ＥｆｆｅｃｔｏｆｄａｉｄｚｅｉｎｏｎＯＰＧａｎｄＲＡＮＫＬｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｉｎｈｕｍａｎｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ ｌｉｋｅＭＧ ６３ｃｅｌｌｓ
ＷＡＮＧＣｈｕａｎ１，ＱＩＬｉｎ２，ＣＨＥＮＹｕ ｍｅｎｇ３，ＷＡＮＧＹｕｅ４，ＨＵＡＮＧＺｏｎｇ ｔａｎｇ５
（１．ＮＨＣＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＨｏｒｍｏｎｅｓａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ＴｉａｎｊｉｎＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｅｔａｂｏｌｉｃＤｉｓｅａｓｅｓ，ＣｈｕＨｓｉｅｎ ＩＭｅｍｏｒｉａｌＨｏｓｐｉｔａｌ＆ＴｉａｎｊｉｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，ＴｉａｎｊｉｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ ３００１３４，Ｃｈｉｎａ；２．ＤｅｐｔｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃＭｅｄｉｃａｌＣｅｎｔｅｒｏｆＰＡＰ，Ｔｉａｎｊｉｎ３００１６２，Ｃｈｉｎａ；３．ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＴｉａｎｊｉｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ ３０００５０，Ｃｈｉｎａ；４．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＩｎｔｅｇｒａｔｅｄＣｈｉｎｅｓｅａｎｄＷｅｓｔｅｒｎＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＴｉａｎｊｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｔｉａｎｊｉｎ ３０１６１７，Ｃｈｉｎａ；５．ＳｈｅｎｚｈｅｎＦｅｎｇｚｅｋａｎｇＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏ．，Ｌｔｄ，Ｓｈｅｎｚｈｅｎ ５１８０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｉｍ Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｆｄａｉｄ ｚｅｉｎｏｎｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ（ＯＰＧ）ａｎｄｒｅｃｅｐｔｏｒａｃｔｉｖａｔｏｒｏｆｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ κＢｌｉｇａｎｄ（ＲＡＮＫＬ）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＭＧ ６３ｃｅｌｌｓａｎｄｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＲＴ ＰＣＲ，ＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔａｎｄｓｉＲＮＡｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｒｅｇｕｌａ ｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｆｄａｉｄｚｅｉｎｏｎＯＰＧａｎｄＲＡＮＫＬｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｈｕｍａｎｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ ｌｉｋｅＭＧ ６３ｃｅｌｌｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＤａｉｄｚｅｉｎｃｏｕｌｄｐｒｏｍｏｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＯＰＧｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｉｎＭＧ ６３ｃｅｌｌｓａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＲＡＮＫＬｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎ，ｗｈｉｃｈｃｏｕｌｄｂｅｂｌｏｃｋｅｄｂｙＩＣＩ１８２７８０．ＩｔｗａｓｃｏｎｆｉｒｍｅｄｔｈａｔＥＲαａｎｄＥＲβｍｅｄｉａｔｅｄｎｏｔｏｎｌｙｔｈｅｐｒｏｍｏｔｉｎｇｅｆｆｅｃｔｏｆｄａｉｄｚｅｉｎｏｎＯＰＧｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭＧ ６３ｃｅｌｌｓｂｕｔａｌｓｏｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＲＡＮＫＬ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ ＤａｉｄｚｅｉｎｐｒｏｍｏｔｅｓＯＰＧｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＭＧ ６３ｃｅｌｌｓａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｓｔｈｅｅｘｐｒｅｓ ｓｉｏｎｏｆＲＡＮＫｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｔｈｒｏｕｇｈＥＲαａｎｄＥＲβｐａｔｈｗａｙｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｄａｉｄｚｅｉｎ；ｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ；ｒｅｃｅｐｔｏｒａｃｔｉ ｖａｔｏｒｏｆｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ κＢｌｉｇａｎｄ；ｅｓｔｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒ；１７β ｅｓｔｒａｄｉｏｌ；ｏｒａｌｉｍｐｌａｎｔ
网络出版时间：２０２１－５－２８１１：０８ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ．２０２１０５２７．１６０６．０４８．ｈｔｍｌ鸡豆黄素Ａ通过雌激素受体抑制ＬＰＳ诱导的
小胶质细胞活化及其机制
刘梦晴１，吴阳洋１，韩俊辉１，俞益桂１，陈寒青２，吴文宁１，李维组１，尹艳艳１
（１．安徽医科大学基础医学院药理学教研室，安徽合肥 ２３００２２；２．合肥工业大学食品科学与工程学院，安徽合肥 ２３０００９）
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０２１．０６．０１３
文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２１）０６－０８０９－０６中国图书分类号：Ｒ２８５ ５；Ｒ３２２ ８；Ｒ３４３ ９；Ｒ３４５ ５７；Ｒ７４５ ７；Ｒ９７７ ３；Ｒ９７７ ６
摘要：目的 探讨鸡豆黄素Ａ（ｂｉｏｃｈａｎｉｎ，ＢｉｏｃｈＡ）能否通过雌激素受体抑制ＬＰＳ诱导的小胶质细胞活化及其机制的研究。方法 ＢＶ２细胞分为：Ｃｏｎｔｒｏｌ组、ＬＰＳ（１０ｍｇ·Ｌ－１）组、ＢｉｏｃｈＡ（５μｍｏｌ·Ｌ－１）组、ＢｉｏｃｈＡ（５μｍｏｌ·Ｌ－１）＋ＩＣＩ（０ １μｍｏｌ·Ｌ－１）组、ＥＲ（０ １μｍｏｌ·Ｌ－１）组、ＥＲ（０ １μｍｏｌ·
收稿日期：２０２１－０３－０１，修回日期：２０２１－０３－２２
基金项目：国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ３１１７１６５０）；安徽省教育厅自然科学基金资助项目（ＮｏＫＪ２０１８Ａ１７１）；安徽省自然
科学基金资助项目（Ｎｏ１９０８０８５ＭＨ２７０）
作者简介：刘梦晴（１９９８－），女，硕士生，研究方向：神经药理学，Ｅ ｍａｉｌ：ｌｉｕｍｅｎｇｑｉｎｇ９３５２＠１６３．ｃｏｍ；
尹艳艳（１９７３－），女，博士，教授，硕士生导师，研究方向：
神经药理学，通讯作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｙｉｎｙａｎｙａｎ５６７８＠１２６．ｃｏｍＬ－１）＋ＩＣＩ（０ １μｍｏｌ·Ｌ－１）组、ＩＣＩ（０ １μｍｏｌ·Ｌ－１）组、Ｒｏ ｓｕｐ（０ １μｍｏｌ·Ｌ－１）组、ＭＡＰＫ通路特异性抑制剂组。加入上述相应药物后，进行２ｈ预处理，除ｃｏｎｔｒ
ｏｌ组外，其余各组加ＬＰＳ（１０ｍｇ·Ｌ－１）进行３６ｈ孵育。测定ＮＯ的含量通过Ｇｒｉｅｓｓ法；检测ＲＯＳ通过ＤＣＦＨ ＤＡ探针法；ＥＬＩＳＡ法测定ＩＬ １β、ＴＮＦ α、ＰＧＥ２含量；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法测定Ｐ４７ｐｈｏｘ、ｇｐ９１ｐｈｏｘ、ｉＮＯＳ、ＮＦ κＢ、ｐ ＮＦ κＢ以及ｐ ＥＲＫ、ｐ ＪＮＫ、ｐ ｐ３８表达水平。结果 与ＬＰＳ组相比，ＢｉｏｃｈＡ组ＲＯＳ、ＮＯ、ＩＬ １β、ＴＮＦ α和ＰＧＥ２含量下降，ｉＮＯＳ、ｐ ＥＲＫ、Ｐ４７ｐｈｏｘ、ｐ ｐ３８、ｐ ＪＮＫ、ｐ ＮＦ κＢ和ｇｐ９１ｐｈｏｘ蛋白表达减少；ＢｉｏｃｈＡ＋ＩＣＩ组上述指标未出现明显变化。结论 通过雌激素受体，ＬＰＳ诱导小胶质细胞的活化受到ＢｉｏｃｈＡ抑制，其机制可能与抑制促分裂原活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）信号通路有关。
关键词：脂多糖；雌激素受体；鸡豆黄素Ａ；小胶质细胞；ＭＡＰＫ
开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）：
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中国药理学通报 ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ ２０２１Ｊｕｎ；３７（６）：８０９－１４
帕金森病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓｄｉｓｅａｓｅ，ＰＤ）是全球第二大衰老性神经系统疾病，其主要特征是黑质多巴胺能神经元的死亡。研究表明：雌激素受体（ｅｓｔｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，ＥＲｓ）中多存在于中脑多巴胺系统区域的是ＥＲβ亚型，具有保持胶质细胞数目，修复受损神经细胞的功能［１－２］。活化的小胶质细胞会导致神经炎症并参与ＰＤ的发生发展［３］，当小胶质细胞活化后，引发活性氧（ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ，ＲＯＳ）、一氧化氮（ＮＯ）以及肿瘤坏死因子 α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃ ｔｏｒ α，ＴＮＦ α）、白介素 １β（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ１β，ＩＬ １β）增多，将导致神经元的变性死亡［４］。丝裂原活化蛋白激酶（ｍｉｔｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ，ＭＡＰＫ）通路参与炎性因子释放，导致一氧化氮合成酶增多并诱导ＮＯ生成，与神经退行性疾病有密切的关系［５］。鸡豆黄素Ａ（ｂｉｏｃｈａｎｉｎＡ，ＢｉｏｃｈＡ）主要见于豆科植物，如鹰嘴豆和红三叶草，属于异黄酮类植物雌激素［６］，具有抗炎，神经保护，抗细胞凋亡等多种功能［７－８］。本课题组前期探索了ＢｉｏｃｈＡ与ＰＤ之间的关系，结果表明，ＢｉｏｃｈＡ能够抑制氧化应激以及炎症因子释放，同时，ＢｉｏｃｈＡ还可以保护ＡｎｇⅡ诱导的小鼠黑质致密部ＤＡ能神经元的损呼唤作文
伤，然而，关于ＢｉｏｃｈＡ保护ＤＡ能神经元的机制仍需进一步的探讨。本文建立ＬＰＳ刺激小胶质细胞活化的体外模型，研究鸡豆黄素Ａ是否通过雌激素受体抑制ＬＰＳ诱导的小胶质细胞活化及其机制。
１ 材料
１．１ 细胞株 ＢＶ２小胶质细胞（来自中国医学科学院协和医科大学）。
１．２ 药品与试剂 二甲基亚砜（Ｄ２６５０）、脂多糖（ＬＰＳ）（Ｌ４３９１）、雌二醇（ＰＨＲ２２２７）、ＢｉｏｃｈＡ（５ ３２６０６）、雌激素受体抑制剂、ＥＲＫ抑制剂（ＰＤ０９８０５９）、ｐ３８抑制剂（ＳＢ２０３５８０）、ＪＮＫ抑制剂（ＳＰ６００１２５）购自美国Ｓｉｇｍａ公司；ＮＯ和ＲＯＳ检测试剂盒（碧云天生物技术研究所）；小鼠ＴＮＦ α、ＩＬ １β（１２４２６ｓ）和ＰＧＥ２的酶联免疫吸附检测试剂盒购自美国瑞沃德公司；兔抗ｐ ｐ３８、ｉＮＯＳ、ｐ３８抗体购自美国赛信通；兔抗ＩｇＧ以及鼠抗β ａｃｔｉｎ抗体（ＡＦ５０００１）购自中杉金桥；兔抗ｐ ＮＦ κＢ以及ＮＦ κＢ购自美国ＩｍｍｕｎｏＷａｙ公司。
１．３ 主要仪器 恒温烘箱 ＤＨＧ ９０７０型（上海三发科学仪器有限公司）；ＨＢ Ｒ／Ｏ０５型纯水机（惠邦净水设备有限公司）；全波长酶标仪 ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ１９０型（美国ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅ公司）；恒温培养箱 Ｈｅａｌ Ｆｏｒｃｅ１００型（力康生物医疗科技有
限公司）；电子天平（上海天平仪器厂）；－８０℃超低温冰箱（海尔集团公司）；制冰机 ＡＦ１００型（斯科茨曼制冰系统有限公司）。
１．４ 小胶质细胞株培养 将ＢＶ２细胞置于ＤＭＥＭ培养基中（混合液含１％的青－链霉素以及１０％的ＦＢＳ溶液），将培养基放置于恒温的培养箱中进行培养，每隔２－３ｄ更换１次培养液，通过显微镜进行观察，当培养瓶９０％以上的面积被细胞占据或瓶底被铺满时，开始细胞传代。要尽快完成细胞的复苏过程，防止细胞死亡，影响最终的实验结果。
１．５ 实验分组及处理 本实验将小胶质细胞分为（１）Ｃｏｎｔｒｏｌ组；（２）ＬＰＳ（１０ｍｇ·Ｌ－１）组；（３）ＢｉｏｃｈＡ（５μｍｏｌ·Ｌ－１）＋ＬＰＳ组；（４）ＢｉｏｃｈＡ（５μｍｏｌ·Ｌ－１）＋ＩＣＩ（０ １μｍｏｌ·Ｌ－１）＋ＬＰＳ组；（５）ＥＲ（０ １μｍｏｌ·Ｌ－１）＋ＬＰＳ组；（６）ＥＲ（０ １μｍｏｌ·Ｌ－１）＋ＩＣＩ（０ １μｍｏｌ·Ｌ－１）＋ＬＰＳ组；（７）ＩＣＩ（０ １μｍｏｌ·Ｌ－１）＋ＬＰＳ组；（８）Ｒｏｓｕｐ（０ １μｍｏｌ·Ｌ－１）＋ＬＰＳ组；（９）ＰＤ（０ ０２μｍｏｌ·Ｌ－１）＋ＬＰＳ组；（１０）ＳＰ（０ ０１μｍｏｌ·Ｌ－１）＋ＬＰＳ组；（１１）ＳＢ（０ ０２μｍｏｌ·Ｌ－１）＋ＬＰＳ组。加入上述药物进行２ｈ预处理，除Ｃｏｎｔｒｏｌ组外，其余组加入ＬＰＳ（１０ｍｇ·Ｌ－１）进行３６ｈ孵育。
１．６ ＮＯ的测定 间接测定ＮＯ含量，通过Ｇｒｉｅｓｓ法检测红色重氮化合物，取对数生长期
的ＢＶ２细胞，按照方法１ ５将细胞分为１－７组，于恒温箱中孵育２４ｈ后收集每组上清。使用Ｇｒｉｅｓｓ试剂盒，按照规定的要求进行吸光度值测定，计算得到各组ＮＯ含量。
１．７ ＲＯＳ检测 ＤＣＦＨ ＤＡ探针法检测细胞内ＲＯＳ的含量。实验按照实验分组将ＢＶ２细胞分为１－８组，加药处理２ｈ后，除Ｃｏｎｔｒｏｌ组，剩余的组别加入ＬＰＳ（１０ｍｇ·Ｌ－１）进行３６ｈ培养。图像采集后，通过Ｉｍａｇｅ ＰｒｏＰｌｕｓ６ ０软件来分析，计算出不同分组的平均荧光强度。
１．８ 酶联免疫吸附测定 培养基中ＴＮＦ α、ＩＬ １β和ＰＧＥ２水平使用ＥＬＩＳＡ试剂盒测量。按照方法１ ５将细胞分为１－７组，根据ＥＬＩＳＡ试剂盒说明书，完成细胞上清液的收集，孵育，洗板，避光显色等操作，通过ＥＬＩＳＡ试剂盒检测ＰＧＥ２、ＩＬ １β以及ＴＮＦ α的含量。
１．９ 蛋白免疫印记法 在培养好的ＢＶ２细胞中加入ＲＩＰＡ缓冲液以溶解，蛋白质浓度通过双辛酸（ＢＣＡ）测定法测定。蛋白质提取物经ＰＡＧＥ分离后转移到固相载体ＰＶＤＦ膜上，放在５％脱脂牛奶在慢速摇床上封闭并在４℃条件下，用一抗继续培养细胞膜过夜，当膜封闭好后，使用ＴＢＳＴ洗涤３次，在室温下将膜与ＨＲＰ结合的二抗孵育２ｈ，随后用
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ＴＢＳＴ洗膜３次，配置ＥＣＬ滴在膜上并在显影仪中曝光，图像保存，通过ＩｍａｇｅＪ软件分析灰度值。１．１０ 统计学分析 数据处理以及统计通过ＳＰＳＳ１９ ０统计软件，组间比较通过单因素方差分析。
２ 结果
数学二次函数２．１ ＢｉｏｃｈＡ对ＬＰＳ诱导的小胶质细胞活化后ＴＮＦ α、ＩＬ １β、ＰＧＥ２的影响 结果如Ｆｉｇ１所示。与Ｃｏｎｔｒｏｌ组相比，ＬＰＳ组ＴＮＦ α、ＩＬ １β和ＰＧＥ２含量明显上升（Ｐ＜０ ０１）；与ＬＰＳ组相比，ＢｉｏｃｈＡ以及ＥＲ组下调了炎症因子含量（Ｐ＜０ ０５），ＩＣＩ组无明显变化（Ｐ＞０ ０５）；与ＢｉｏｃｈＡ组相比，ＢｉｏｃｈＡ＋ＩＣＩ组炎症因子表达上调（Ｐ＜０ ０５）；与ＥＲ组比较，ＥＲ＋ＩＣＩ组同样上升了炎症因子水平（Ｐ＜０ ０５）。结果表明，ＢｉｏｃｈＡ通过雌激素受体，可以抑制炎性因子ＴＮＦ α、ＩＬ １β、ＰＧＥ
２表达。２．２ ＢｉｏｃｈＡ对ＬＰＳ诱导小胶质细胞活化后ｉＮＯＳ和ＮＯ的影响 结果如Ｆｉｇ２所示，与Ｃｏｎｔｒｏｌ组相比，ＬＰＳ组ＮＯ含量（Ｐ＜０ ０１）和ｉＮＯＳ表达（Ｐ＜０ ０１）显著增加；与ＬＰＳ组比较，ＢｉｏｃｈＡ以及ＥＲ组ＮＯ含量和ｉＮＯＳ的表达降低（Ｐ＜０ ０５，Ｐ＜０ ０１），ＩＣＩ组无明显变化（Ｐ＞０ ０５）；与ＢｉｏｃｈＡ组相比，ＢｉｏｃｈＡ＋ＩＣＩ组上调ＮＯ和ｉＮＯＳ水平（Ｐ＜０ ０５）。上述结果表明，ＢｉｏｃｈＡ通过雌激素受体，可以抑制ＮＯ和ｉＮＯＳ表达。
２．３ ＢｉｏｃｈＡ对ＬＰＳ诱导小胶质细胞活化后ｐ４７ｐｈｏｘ、ｇｐ９１ｐｈｏｘ、ＲＯＳ的影响 结果如Ｆｉｇ３所示，与Ｃｏｎｔｒｏｌ组比较，ＬＰＳ组ｐ４７ｐｈｏｘ、ｇｐ９１ｐｈｏｘ和ＲＯＳ水平增加（Ｐ＜０ ０１）；与ＬＰＳ组比较，ＢｉｏｃｈＡ以及ＥＲ组ｐ４７ｐｈｏｘ、ｇｐ９１ｐｈｏｘ、ＲＯＳ水平降低（Ｐ＜０ ０１）；而ＩＣＩ组无明显变化（Ｐ＞０ ０５）；与Ｂｉｏｃｈ
Ａ
Ｆｉｇ１ ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＢｉｏｃｈＡｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＴＮＦ α，ＩＬ １β，ＰＧＥ２ｉｎＬＰＳ ｉｎｄｕｃｅｄＢＶ２ｃｅｌｌｓ（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）Ａ：ＴＮＦ αｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌ；Ｂ：ＩＬ １βｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌ；Ｃ：ＰＧＥ２ｅｘｐｒｅｓｓｉ
ｏｎｌｅｖｅｌ．１：Ｃｏｎｔｒｏｌ；２：ＬＰＳ；３：ＢｉｏｃｈＡ；４：ＢｉｏｃｈＡ＋ＩＣＩ；５：ＥＲ；６：ＥＲ＋ＩＣＩ；７：ＩＣＩ．△△Ｐ＜０ ０１ｖｓＣｏｎｔｒｏｌ； Ｐ＜０ ０５ｖｓＬＰＳ；＃Ｐ＜０ ０５ｖｓＢｉｏｃｈＡ；□Ｐ＜０ ０５ｖｓＥ
Ｒ
Ｆｉｇ２ ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＢｉｏｃｈＡｏｎＮＯ，ｉＮＯＳｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎＬＰＳ ｉｎｄｕｃｅｄＢＶ２ｃｅｌｌｓ（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）Ａ：ＴｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＮＯ；Ｂ：ｉＮＯＳｐｒｏｔｉｅｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．１：Ｃｏｎｔｒｏｌ；２：ＬＰＳ；３：ＢｉｏｃｈＡ；４：ＢｉｏｃｈＡ＋ＩＣＩ；５：ＥＲ；６：ＥＲ＋ＩＣＩ；７：ＩＣＩ．△△Ｐ＜０ ０１ｖｓＣｏｎｔｒｏｌ； Ｐ＜０ ０５， Ｐ＜０ ０１ｖｓＬＰＳ；＃Ｐ＜０ ０５ｖｓＢｉｏｃｈＡ；□Ｐ＜０ ０１ｖｓＥＲ
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关于光的唯美句子中国药理学通报 ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ ２０２１Ｊｕｎ；３７（６）
诚信名人故事
组比，ＢｉｏｃｈＡ＋ＩＣＩ组ｐ４７ｐｈｏｘ、ＲＯＳ和ｇｐ９１ｐｈｏｘ的水平增加（Ｐ＜０ ０５）。结果表明，ＢｉｏｃｈＡ通过雌激素受体，可以抑制Ｐ４７ｐｈｏｘ、ＲＯＳ和ｇｐ９１ｐｈｏｘ表达。２．４ ＢｉｏｃｈＡ对ＬＰＳ诱导小胶质细胞活化后ｐ ｐ３８、ｐ ＥＲＫ和ｐ ＪＮＫ的影响 结果如Ｆｉｇ４所示，与Ｃｏｎｔｒｏｌ组相比，ＬＰＳ组升高了ｐ ｐ３８、ｐ ＥＲＫ和ｐ ＪＮＫ蛋白水平（Ｐ＜０ ０１）；与ＬＰＳ组比较，ＢｉｏｃｈＡ以及ＥＲ组ｐ ｐ３８、ｐ ＥＲＫ和ｐ ＪＮＫ蛋白水平下调（Ｐ＜０ ０５，Ｐ＜０ ０１），加入ＰＤ、ＳＰ和ＳＢ通路特异性抑制剂后，出现了明显的抑制（Ｐ＜０ ０１），ＩＣＩ组无明显变化（Ｐ＞０ ０５）；与ＢｉｏｃｈＡ组比较，ＢｉｏｃｈＡ＋ＩＣＩ组ｐ ｐ３８、ｐ ＥＲＫ和ｐ ＪＮＫ蛋白表达增多（Ｐ＜０ ０５）；
与ＥＲ组比较，ＥＲ＋ＩＣＩ组ｐ ｐ３８、ｐ ＥＲＫ和ｐ ＪＮＫ蛋白表达也增多（Ｐ＜０ ０５，Ｐ＜０ ０１）；上述结果表明，通过雌激素受体，ＢｉｏｃｈＡ可以抑制ｐ ｐ３８、ｐ ＥＲＫ、ｐ ＪＮＫ蛋白表达。
２．５ ＢｉｏｃｈＡ对ＬＰＳ诱导小胶质细胞活化后ｐ ＮＦ κＢ和ＮＦ κＢ的影响 结果如Ｆｉｇ５所示，各组间ＮＦ κＢ蛋白的表达水平均没有不同（Ｐ＞０ ０５）。ＬＰＳ组相较Ｃｏｎｔｒｏｌ组，ｐ ＮＦ κＢ蛋白水平增加（Ｐ＜０ ０５）；相比ＬＰＳ组，ＥＲ组以及ＢｉｏｃｈＡ组降低了ｐ
ＮＦ κＢ蛋白表达（Ｐ＜０ ０５），ＩＣＩ组无明显变化（Ｐ＞０ ０５）；与ＥＲ组比较，ＥＲ＋ＩＣＩ组上调了ｐ ＮＦ κＢ蛋白水平（Ｐ＜０ ０５）；与ＢｉｏｃｈＡ组相比，ＢｉｏｃｈＡ＋ＩＣＩ组ｐ ＮＦ κＢ蛋白水平增加（Ｐ＜０ ０５）；结果表明，通过雌激素受体，ＢｉｏｃｈＡ可以抑制ｐ ＮＦ κＢ蛋白表达。３ 讨论
研究发现，活化的小胶质细胞会诱导中枢神经系统炎症的发生，炎症反应也会导致中枢神经系统中的小胶质细胞活化。许多炎症介质和促炎因子由激活的小胶质细胞生成和分泌，包括细胞因子、蛋白酶、活性氧等，其介导的神经炎症是Ｐ
Ｄ发病的重要环节［９－１０］
。丝裂原活化蛋白激酶是一种丝氨酸／苏
氨酸蛋白激酶，当受到细胞外刺激时，能够通过处理和调节细胞特性，发挥调节细胞存活、分化、增殖和
凋亡等重要作用［
１１］
。脂多糖（ＬＰＳ）是革兰氏阴性细菌细胞壁外壁的组成成分，是一种强效致炎因子，导致细胞或动物模型中帕金森相关的病理学变化，
引起中脑黑质ＤＡ能神经元变性、损伤［１２－１３］
。本实
验选用ＬＰＳ造模，观察ＢｉｏｃｈＡ能否通过雌激素受体抑制ＬＰＳ
n卡控制面板
跑步活动策划方案
诱导的小胶质细胞活化。
Ｆｉｇ３ ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＢｉｏｃｈＡｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆｇｐ９１ｐｈｏｘ，ｐ４７ｐｈｏｘ，ＲＯＳｉｎＬＰＳ ｉｎｄｕｃｅｄＢＶ２ｃｅｌｌｓ（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
Ａ：ｇｐ９１ｐｈｏｘｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌ；Ｂ：ｐ４７ｐｈｏｘｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌ；Ｃ：ＤＣＦＨ ＤＡｐｒｏｂｅｏｆＲＯＳｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｔｅｎｓｉｔｙｉｎＢＶ２；Ｄ：ＰｒｏｐｏｒｔｉｏｎｏｆＲＯＳｉｎ
ｅａｃｈｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ．１：Ｃｏｎｔｒｏｌ；２：ＬＰＳ；３：ＢｉｏｃｈＡ；４：ＢｉｏｃｈＡ＋ＩＣＩ；５：ＥＲ；６：ＥＲ＋ＩＣＩ；７：ＩＣＩ；８：Ｒｏｓｕｐ．△△
Ｐ＜０ ０１ｖｓＣｏｎｔｒｏｌ； Ｐ＜０ ０１ｖｓＬＰＳ；＃
Ｐ＜０ ０５ｖｓＢｉｏｃｈＡ；□Ｐ＜０ ０５，□□
Ｐ＜０ ０１ｖｓＥＲ
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２１８·中国药理学通报 ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ ２０２１Ｊｕｎ；３７（６）
Ｆｉｇ４ ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＢｉｏｃｈＡｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆｐ ＥＲＫ，ｐ ｐ３８，ｐ ＪＮＫｉｎＬＰＳ ｉｎｄｕｃｅｄＢＶ２ｃｅｌｌｓ（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）Ａ：ｐ ＥＲＫｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌ；Ｂ：ｐ ｐ３８ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌ；Ｃ：ｐ ＪＮＫｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌ．１：Ｃｏｎｔｒｏｌ；２：ＬＰＳ；３：ＢｉｏｃｈＡ；４：ＢｉｏｃｈＡ＋ＩＣＩ；５：ＥＲ；６：ＥＲ＋ＩＣＩ；７：ＩＣＩ．△△Ｐ＜０ ０１ｖｓＣｏｎｔｒｏｌ； Ｐ＜０
０５， Ｐ＜０ ０１ｖｓＬＰＳ；＃Ｐ＜０ ０５ｖｓＢｉｏｃｈＡ；□Ｐ＜０ ０５ｖｓＥ
Ｒ
Ｆｉｇ５ ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＢｉｏｃｈＡｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆＮＦ κＢ，
ｐ ＮＦ κＢｉｎＬＰＳ ｉｎｄｕｃｅｄＢＶ２ｃｅｌｌｓ（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
Ａ：ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆＮＦ κＢａｎｄｐ ＮＦ κＢ；Ｂ：ＮＦ κＢａｎｄｐ
ＮＦ κＢｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌ．１：Ｃｏｎｔｒｏｌ；２：ＬＰＳ；３：ＢｉｏｃｈＡ＋ＬＰＳ；４：ＢｉｏｃｈＡ
＋ＩＣＩ＋ＬＰＳ；５：ＥＲ＋ＬＰＳ；６：ＥＲ＋ＩＣＩ＋ＬＰＳ；７：ＩＣＩ＋ＬＰＳ．△Ｐ＜０ ０５ｖｓ
成语故事读后感
Ｃｏｎｔｒｏｌ； Ｐ＜０ ０５ｖｓＬＰＳ；＃Ｐ＜０ ０５ｖｓＢｉｏｃｈＡ；□Ｐ＜０ ０５ｖｓＥＲ
小胶质细胞受到ＬＰＳ刺激，激活ＮＡＤＰＨ氧化
酶引起活性氧过度释放，而ＲＯＳ可参与人体细胞分
化等生理活动，进而释放ＴＮＦ α、ＩＬ １β和ＰＧＥ２等
促炎细胞因子从而产生神经毒性［１４］。过量的炎症
因子释放，导致诱导型一氧化氮合酶的增多以及
ＮＯ的增加，ＮＯ介导炎性反应加重细胞损伤，在正
常水平下，ＮＯ可引起血管扩张，促进血液循环，但
其水平过高会加重对神经细胞的毒害作用。若一直
释放有毒物质或炎性因子，最终将导致ＤＡ能神经
元损伤。
雌激素在多种器官的靶点，如心血管系统、神经
系统等发挥保护作用。雌激素受体是雌激素作用的
关键配体，主要包括两种亚型ＥＲα以及ＥＲβ，在中
脑ＤＡ区域中高表达的ＥＲβ可发挥重要的神经保
护作用，与以神经元损伤为主要特点的衰老性神经
系统疾病有关［１５］。人参皂苷Ｒｇ１通过ＥＲβ及
ＭＡＰＫ／ＥＲＫ信号转导通路促进非淀粉样蛋白切割，
发挥神经保护作用。基于此，我们本次实验也对
ＢｉｏｃｈＡ保护ＤＡ能神经元的机制进行进一步探讨。
本实验中，通过ＬＰＳ诱导小胶质细胞活化，产生
ＲＯＳ，增加ＴＮＦ α、ＩＬ １β和ＰＧＥ２蛋白的表达，进而
激活ＭＡＰＫ引起神经炎症反应、细胞衰老分化等病
理生理过程。而ＢｉｏｃｈＡ预处理能够有效的抑制炎
症因子的释放、小胶质活化以及ＭＡＰＫ信号通路激
活。在加入雌激素受体抑制剂后，ＢｉｏｃｈＡ的作用受
到明显的抑制，提示ＢｉｏｃｈＡ通过雌激素受体抑制
小胶质细胞活化，产生神经保护作用。
综上所述，ＢｉｏｃｈＡ通过雌激素受体抑制ＬＰＳ诱
导的小胶质细胞活化，与此同时也可能直接抑制氧
化应激和炎症，其机制可能与抑制ＭＡＰＫ信号通路
有关。
参考文献
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中国药理学通报 ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ ２０２１Ｊｕｎ；３７（６）赵威后
