ａｇｇｒａｖａｔｅｄｔｈｅｄｅｃｌｉｎｅｏｆｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃｎｅｕｒｏｎｃｅｌｌｖｉａ ｂｉｌｉｔｙｃａｕｓｅｄｂｙｒｏｔｅｎｏｎｅ（Ｐ＜０ ０５），ｗｈｉｌｅｏｖｅｒｅｘ ｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＦＫＢＰ３８ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙａｍｅｌｉｏｒａｔｅｄｔｈｅｄｅ ｃｌｉｎｅｏｆｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃｎｅｕｒｏｎｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙｃａｕｓｅｄｂｙｒｏｔｅｎｏｎｅ（Ｐ＜０ ０５）．ＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＦＫＢＰ３８ｃｏｕｌｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｕｐ ｒｅｇｕ ｌａｔｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆａｎｔｉ ａｐｏｐｔｏｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎＢｃｌ ２ａｎｄｉｎｃｒｅａｓｅｔｈｅｒａｔｉｏｏｆＢｃｌ ２／ＢａｘｉｎＰＤｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃｎｅｕｒｏｎｓ（Ｐ＜０ ０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＩｎｔｈｅＰＤｃｅｌｌｍｏｄｅｌｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＦＫＢＰ３８ｃａｎｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃｎｅｕｒｏｎｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ′ｓｄｉｓｅａｓｅ；ｒｏｔｅｎｏｎｅ；ＭＮ９Ｄｃｅｌｌｓ；ｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙ；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ；ＦＫＢＰ３８
网络出版时间：２０２２－１２－０９１８：３２：４３ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／／３４．１０８６．ｒ．２０２２１２０９．１４２８．０２１．ｈｔｍｌ◇肿瘤药理学◇
Ｇ蛋白偶联雌激素受体抑制剂增加他莫昔芬
诱导Ｔ ４７ＤＴＲ耐药细胞凋亡
张敏琴１，２，宋雨萱２，樊双琴２，任 爽２，张 癑２，陈 妍２，沈祥春２，刘同征３，张 敏１，２（贵州医科大学１．基础医学院生理学教研室、２．天然药物资源优效利用重点实验室，贵州贵阳 ５５００２５；
３．暨南大学肿瘤药理研究所，广东广州 ５１０６３２）
ｄｏｉ：１０．１２３６０／ＣＰＢ２０２２０３００８
文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２３）０１－００９６－０５中国图书分类号：Ｒ３２９ ２５；Ｒ３９２ １１；Ｒ７３７ ９；Ｒ９７７ １２；Ｒ９７９ １
摘要：目的 研究Ｇ蛋白偶联雌激素受体（Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎｃｏｕｐｌｅｄｅｓｔｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＧＰＥＲ）抑制剂Ｇ１５对乳腺癌他莫昔芬耐药细胞Ｔ ４７ＤＴＲ敏感性的影响。方法 采用他莫昔芬在体内活性形式４ 羟基他莫昔芬（４ ＯＨＴ）进行实验。ＭＴＴ实验检测乳腺癌他莫昔芬耐药细胞系Ｔ ４７ＤＴＲ及其亲本细胞系Ｔ ４７Ｄ对他莫昔芬的敏感性；膜浆分离分析抑制剂Ｇ１５对ＧＰＥＲ蛋白表达的变化；流式细胞术ＡｎｎｅｘｉｎＶ ＦＩＴＣ／ＰＩ双染分析４
ＯＨＴ联用Ｇ１５对Ｔ ４７ＤＴＲ细胞凋亡的影响；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析凋亡相关蛋白Ｂａｘ、Ｂｃｌ ２、ｃａｓｐａｓｅ ３、ｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ ３、ｃａｓｐａｓｅ ９、ｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ ９的表达水平。结果 （１）相比于亲本细胞Ｔ ４７Ｄ，Ｔ ４７ＤＴＲ耐药细胞对４ ＯＨＴ的抵抗性显著增强。（２）给予４ ＯＨＴ（２μｍｏｌ·Ｌ－１），与对照组相比，ＧＰＥＲ在细胞膜分布增加，表明在Ｔ ４７ＤＴＲ耐药细胞中
收稿日期：２０２２－０８－０９，修回日期：２０２２－１１－１８
基金项目：国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ８１８６０６４８）；贵州省普通高等学校科技拔尖人才支持计划（黔教合ＫＹ字［２０１８］
０４８）；贵州省药学国际科技合作基地（黔科合平台人才
［２０１７］５８０２）；贵州省优秀青年科技人才计划项目（黔科
合平台人才［２０２１］５６３２号）；贵州省普通高等学校青年科
技人才成长项目（黔教合ＫＹ字［２０２１］１６９）；贵州省科技
计划项目（黔科合基础 ＺＫ［２０２１］一般５２７）
作者简介：张敏琴（１９９７－），女，硕士生，研究方向：抗肿瘤药物药理学，Ｅ ｍａｉｌ：２３９７８３１３００＠ｑｑ．ｃｏｍ；
张 敏（１９７３－），女，硕士，副教授，硕士生导师，研究方
向：抗肿瘤药物药理学，通信作者，Ｅ ｍａｉｌ：１０７１６３２８６９＠
ｑｑ．ｃｏｍＧＰＥＲ被激活；与单用４ ＯＨＴ相比，联用Ｇ１５（５μｍｏｌ·Ｌ－１）显著减少ＧＰＥＲ表达。（３）ＧＰＥＲ抑制剂Ｇ１５能增加Ｔ ４７ＤＴＲ耐药细胞凋亡率同时下调抗凋亡蛋白Ｂｃｌ ２，上调促凋亡蛋白Ｂａｘ、ｃｌｅａｖｅｄｃａｓｐａｓｅ ３、ｃｌｅａｖｅｄｃａｓｐａｓｅ ９的表达。结论 ＧＰＥＲ抑制剂Ｇ１５增加Ｔ ４７ＤＴＲ细胞的凋亡恢复耐药细胞对他莫昔芬的敏感性。
关键词：乳腺癌；他莫昔芬；耐药；ＧＰＥＲ；Ｇ１５；凋亡
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乳腺癌是全球女性中最常见的恶性肿瘤［１］。约７０％为雌激素受体（ｅｓｔｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＥＲ）阳性，抗雌激素的内分泌治疗是该类患者主要的治疗手段［２］。作为最有效和最常用的抗雌激素药物，他莫昔芬（Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ，ＴＡＭ）已被证实可大大延长乳腺癌患者
的生存期［３］。尽管大多数患者从这种治疗中获益，但临床数据显示，大约５０％的患者对他莫昔芬产生耐药性，最终导致复发和死亡［４］。
Ｇ蛋白偶联雌激素受体（Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎｃｏｕｐｌｅｄｅｓ ｔｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＧＰＥＲ），又称ＧＰＲ３０，在结构上不同于经典的ＥＲα和ＥＲβ，是一种新型雌激素受体，介导多种雌激素反应［５］，并在获得性他莫昔芬耐药中起重要作用。据有关文献报道，他莫昔芬对ＧＰＥＲ具有激动作用，体内外研究数据表明，ＧＰＥＲ的表达与他莫昔芬耐药密切相关［６］，同时也是影响他莫昔芬治疗过程的一个不利生存因素。Ｇ１５是一种取代
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·中国药理学通报 ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ ２０２３Ｊａｎ；３９（１）：９６～１００
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的二氢喹啉类似物，可抑制ＧＰＥＲ，有望应用于增加他莫昔芬耐药细胞敏感性［７］。因此，本研究探讨ＧＰＥＲ抑制剂Ｇ１５能否增加ＴＡＭ对Ｔ ４７ＤＴＲ耐药细胞诱导凋亡的作用，恢复耐药细胞对他莫昔芬的敏感性，为抑制ＧＰＥＲ增加耐药细胞对治疗药物敏感性提供理论依据。
李元霸武器１ 材料与方法
１．１ 药品与试剂 人乳腺癌他莫昔芬耐药细胞株Ｔ４７ＤＴａｍ１（ＣＲＬ ３４３６ＴＭ，Ｔ ４７ＤＴＲ）购自美国ＡＴＣＣ公司，人乳腺癌Ｔ ４７Ｄ细胞株购于中国科学院昆明细胞库。高糖ＤＭＥＭ培养基（Ｇｉｂｃｏ公司），胎牛血清（Ｇｉｂｃｏ公司）。４ ＯＨＴ（Ｃａｔ＃ａｂ１４３６３８）购自Ａｂ ｃａｍ公司，Ｇ１５（Ｃａｔ＃１４６７３）购自Ｓｉｇｍａ公司；ＢＣＡ蛋白定量试剂盒（Ｃａｔ＃２３２２７）购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；ＡｎｎｅｘｉｎＶ ＦＩＴＣ／ＰＩ双染细胞凋亡检测试剂盒购自江苏凯基生物技术股份有限公司；细胞膜蛋白与细胞质蛋白抽提试剂盒（Ｃａｔ＃Ｐ００３３）购自碧云天生物技术有限公司。ＭＴＴ粉末（Ｃａｔ＃Ｍ８１８０）购自北京索莱宝公司。ｃａｓｐａｓｅ ９／ｐ３５／ｐ１０单克隆抗体（Ｃａｔ＃６６１６９ １ Ｉｇ），ｃａｓｐａｓｅ ３／ｐ１７／ｐ１９单克隆抗体（Ｃａｔ＃６６４７０ ２ Ｉｇ），ＢＡＸ多克隆抗体（Ｃａｔ＃５０５９９ ２ Ｉｇ），Ｂｃｌ２多克隆抗体（Ｃａｔ＃２６５９３ １ ＡＰ）抗体均购自ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ公司；Ｎａ＋，Ｋ＋ ＡＴＰａｓｅα１（Ｙ１０）多克隆抗体（ＢＳ１４３６），β ａｃｔｉｎ（４Ｄ３）单克隆抗体 ＨＲＰ（Ｃａｔ＃ＢＳ６００７Ｍ），羊
辣豆腐的家常做法抗鼠ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）ＨＲＰ（Ｃａｔ＃ＢＳ１２４７８），羊抗兔ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）ＨＲＰ（Ｃａｔ＃ＢＳ１３２７８）抗体均购自Ｂｉｏ Ｗｏｒｌｄ公司；ＧＰＥＲ多克隆抗体（Ｃａｔ＃ＰＡ５ ２８６４７）购自美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司。１．２ 主要仪器 ３１１１二氧化碳培养箱（赛默飞世尔科技（中国）有限公司）；ＣｈｅｍｉＤｏｃＸＲＳ＋凝胶成像系统（美国Ｂｉｏ Ｒａｄ公司）；ＡＣＥＡＮｏｖｏＣｙｔｅ３００８流式细胞仪（美国艾森公司）；Ｍｉｃｒｏｆｕｇｅ ２０Ｒ冷冻离心机（美国ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ公司）；ＥＬＸ８００酶标仪（美国ＢｉｏＴｅｋ公司）。
１．３ 方法
１．３．１ 细胞培养 Ｔ４７ＤＴａｍ１（Ｔ ４７ＤＴＲ）细胞系按照ＡＴＣＣ的标准方案进行培养，在培养基中补充１μｍｏｌ·Ｌ－１４ ＯＨＴ以维持他莫昔芬的耐药性。其中Ｔ ４７ＤＴＲ使用含有１０％胎牛血清（ＦＢＳ）和１０ｍｇ·Ｌ－１胰岛素的ＤＭＥＭ培养液培养。Ｔ４７Ｄ细胞系在添加１０％ＦＢＳ的ＤＭＥＭ中培养。所有细胞均在５％ＣＯ
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和３７℃条件下培养。
１．３．２ ＭＴＴ法检测细胞存活率 取对数生长期Ｔ ４７Ｄ／ＴＲ耐药细胞或其亲本细胞Ｔ ４７Ｄ，按照８×１０３个／孔接种于９６空板内，培养２４ｈ后，给予不同浓度４ ＯＨＴ（０ ５、１、２ ５、５、１０μｍｏｌ·Ｌ－１）作用４８ｈ，
另设阴性对照（Ｃｏｎｔｒｏｌ组），每组５个复孔。然后将ＭＴＴ溶液（５ｇ·Ｌ－１，２０μＬ）添加到每个孔中并再孵育４ｈ。然后除去培养基，加入ＤＭＳＯ（１００μＬ／孔）并充分混合。使用酶标仪在５７０ｎｍ处测量吸光度（ＯＤ）值。重复３次，将所得数据进行计算，得出各浓度药物下的抑制率（ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｒａｔｅ，ＩＲ），ＩＲ／％＝［（ＯＤ
对照组
－ＯＤ
４ ＯＨＴ
）／ＯＤ
对照组
］×１００％。１．３．３ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测蛋白表达 取对数生长期Ｔ ４７ＤＴＲ耐
药细胞接种于６孔板内，按照实验分组Ｔ ４７ＤＴＲ、Ｔ ４７ＤＴＲ＋４ ＯＨＴ（２μｍｏｌ·Ｌ－１）、Ｔ ４７ＤＴＲ＋Ｇ１５（５μｍｏｌ·Ｌ－１）和Ｔ ４７ＤＴＲ＋４ ＯＨＴ（２μｍｏｌ·Ｌ－１）＋Ｇ１５（５μｍｏｌ·Ｌ－１）给药４８ｈ后。使用含有ＰＭＳＦ（１ｍｍｏｌ·Ｌ－１）和蛋白酶抑制剂混合物（１∶１００）的裂解缓冲液提取细胞总蛋白，离心并收集上清，采用ＢＣＡ蛋白定量试剂盒进行蛋白定量。按照４５μɡ共２０μＬ分装各组蛋白并进行电泳，湿法转膜，２％牛血清白蛋白封闭。封闭完成后，根据抗体说明书稀释一抗，４℃孵育过夜，再加入相应二抗室温孵育９０ｍｉｎ，采用Ｂｉｏ Ｒａｄ凝胶成像系统获取图像，并使用ＩｍａｇｅＬａｂ分析软件计算蛋白印迹结果的灰度值。
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１．３．４ 细胞凋亡检测 取对数生长期Ｔ ４７ＤＴＲ耐药细胞接种于６孔板内，按“１ ３ ３”项给药４８ｈ后，用不含ＥＤＴＡ胰酶消化收集细胞，ＰＢＳ洗涤细胞两次，２０００ｒ·ｍｉｎ－１，５ｍｉｎ收集１×１０５细胞，进行ＦＩＴＣ／ＰＩ双染，室温避光反应１５ｍｉｎ后进行流式细胞仪检测。
１．３．５ 膜浆分离分析 根据试剂盒说明书方法，分离细胞膜蛋白和细胞质蛋白，通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ定量分析ＧＰＲ３０在细胞内分布的变化。
１．３．６ 统计学处理 所有结果均表示为至少３个独立实验的平均值±标准差。使用ｔ检验分析两组之间的差异，并使用单因素方差分析分析多组之间的差异。
２ 结果例行公事
２．１ ４ ＯＨＴ对Ｔ ４７Ｄ和Ｔ ４７ＤＴＲ细胞生长抑制的影响 ＭＴＴ结果显示，不同浓度４ ＯＨＴ（０ ５、１、２ ５、５、１０μｍｏｌ·Ｌ－１）作用４８ｈ后，与Ｔ ４７Ｄ亲本细胞相比，Ｔ ４７ＤＴＲ耐药细胞对４ ＯＨＴ的抵抗性明
显增强，其４ ＯＨＴ对Ｔ ４７Ｄ和Ｔ ４７ＤＴＲ细胞的ＩＣ
５０值分别为（２ ６９±０ １６）μｍｏｌ·Ｌ－１、（２６ ６５±０ ０３）μｍｏｌ·Ｌ－１，两者比较差异具有统计学意义（Ｆｉｇ１）。２．２ Ｇ１５对Ｔ ４７ＤＴＲ细胞中ＧＰＥＲ蛋白表达的影响 如Ｆｉｇ２所示，与Ｔ ４７Ｄ亲本细胞相比，
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中国药理学通报 ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ ２０２３Ｊａｎ；３９（１）Copyright©博看网. All Rights Rerved.
属猪是哪一年
Ｆｉｇ１ Ｅｆｆｅｃｔｏｆ４ ＯＨＴｏｎｇｒｏｗｔｈｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆ
Ｔ ４７ＤａｎｄＴ ４７ＤＴＲｃｅｌｌｓ（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
Ｐ＜０ ０５， Ｐ＜０ ０１ｖｓＴ ４７Ｄ／ＴＲ
Ｆｉｇ２ ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＧＰＥＲｐｒｏｔｅｉｎｉｎＴ ４７Ｄａｎｄ
Ｔ ４７ＤＴＲｃｅｌｌｓ（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
Ａ：Ｔｈｅｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅｐｈｏｔｏｇｒａｐｈｓ；Ｂ：Ｔｈｅｓｔａｔｉｓｔｉ
ｃａｌａｎａｌｙｓｉｓ． Ｐ＜０ ０１ｖｓＴ ４７Ｄ．
Ｔ ４７ＤＴＲ耐药细胞中ＧＰＥＲ蛋白表达明显上调；在Ｔ ４７ＤＴＲ耐药细胞中，给予４ ＯＨＴ作用４８ｈ后，与空白对照组比较，ＧＰＥＲ在细胞膜内易位增加，给予Ｇ１５处理后能明显降低４ ＯＨＴ诱导的Ｔ ４７ＤＴＲ细胞中ＧＰＥＲ蛋白表达上调（Ｆｉｇ３）。
２．３ Ｇ１５诱导Ｔ ４７ＤＴＲ耐药细胞凋亡 与单用４ ＯＨＴ组或对照组相比，４ ＯＨＴ联用Ｇ１５组总凋亡率增加，表明Ｇ１５可增强４ ＯＨＴ对Ｔ ４７ＤＴＲ细胞的抑制作用（Ｆｉｇ４），结果提示，Ｇ１５能够增加Ｔ ４７ＤＴＲ耐药细胞对他莫昔芬的敏感性。
２．４ Ｇ１５对Ｔ ４７ＤＴＲ耐药细胞中凋亡相关蛋白表达的影响 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示，与单用４ ＯＨＴ组或对照组相比，４ ＯＨＴ联用Ｇ１５处理４８ｈ后，Ｔ ４７ＤＴＲ耐药细胞中Ｂａｘ表达显著增加，Ｂｃｌ ２表达显著降低；ｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ３和ｃｌｅａｖｅｄ ｃａｓｐａｓｅ９表达增加（Ｆｉｇ５）。表明Ｇ１５影响凋亡相关蛋白的表达从而恢复Ｔ ４７ＤＴＲ耐药细胞对他莫昔芬的敏感性。３ 讨论
他莫昔芬是一种选择性雌激素受体（ＥＲ）调节剂，是世界范围内ＥＲ阳性转移性乳腺癌女性最常见的内分泌治疗药物，或作为疾病早期的辅助治疗
Ｆｉｇ４ ＡｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎＴ ４７ＤＴＲｃｅｌｌｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙＧ１５（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
Ａ：Ｔｈｅｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅｐｈｏｔｏｇｒａｐｈｓ；Ｂ：Ｔｈｅｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓ．１：Ｔ ４７ＤＴＲ；２：Ｔ ４７ＤＴＲ＋４ ＯＨＴ；３：Ｔ ４７ＤＴＲ＋Ｇ１５；４：Ｔ ４７ＤＴＲ＋４ ＯＨＴ＋Ｇ１５． Ｐ＜０ ０１ｖｓＴ ４７ＤＴＲ＋４ ＯＨＴ．
素相关肿瘤发生中的作用［Ｊ］．中国药理学通报，２０１４，３０（８）：１０３７－４１．
［１０］ＺｈａｏＰＷ，ＬｅｅＤＹ，ＴａｏＳＹ，ｅｔａｌ．ＥｆｆｅｃｔｏｆＧｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｕｐｌｅｄｅｓ ｔｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒｏｎｔｈｅｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｅｓｔｒｏｇｅｎｒｅ ｌａｔｅｄｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＣｈｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌＢｕｌｌ，２０１４，３０（８）：１０３７－４１．［１１］ＩｇｎａｔｏｖＡ，ＩｇｎａｔｏｖＴ，ＲｏｅｓｓｎｅｒＡ，ｅｔａｌ．ＲｏｌｅｏｆＧＰＲ３０ｉｎｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｔａｍｏｘｉｆｅｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒＭＣＦ ７ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒＲｅｓＴｒｅａｔ，２０１０，１２３（１）：８７－９６．
［１２］ＬｉｕＱ，ＣｈｅｎＺ，ＪｉａｎｇＧ，ｅｔａｌ．ＥｐｉｇｅｎｅｔｉｃｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＧｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｕｐｌｅｄｅｓｔｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＧＰＥＲ）ｆｕｎｃｔｉｏｎｓａｓａｔｕｍｏｒｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｉｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＭｏｌＣａｎｃｅｒ，２０１７，１６（１）：８７．
［１３］ＳｊｏｓｔｒｏｍＭ，ＨａｒｔｍａｎＬ，ＧｒａｂａｕＤ，ｅｔａｌ．ＬａｃｋｏｆＧｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｕ ｐｌｅｄｅｓｔｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＧＰＥＲ）ｉｎｔｈｅｐｌａｓｍａｍｅｍｂｒａｎｅｉｓａｓｓｏｃｉ ａｔｅｄｗｉｔｈｅｘｃｅｌｌｅｎｔｌｏｎｇ ｔｅｒｍｐｒｏｇｎｏｓｉｓｉｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒＲｅｓＴｒｅａｔ，２０１４，１４５（１）：６１－７１．［１４］ＪａｃｅｎｉｋＤ，ＣｙｇａｎｋｉｅｗｉｃｚＡＩ，ＫｒａｊｅｗｓｋａＷＭ．ＴｈｅＧｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｕ ｐｌｅｄｅｓｔｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒａｓａｍｏｄｕｌａｔｏｒｏｆｎｅｏｐｌａｓｔｉｃｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＭｏｌＣｅｌｌＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，２０１６，４２９：１０－８．
［１５］ＷａｎｇＤ，ＨｕＬ，ＺｈａｎｇＧ，ｅｔａｌ．Ｇｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｕｐｌｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒ３０ｉｎｔｕｍｏｒｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ，２０１０，３８（１）：２９－３７．
［１６］王 婧，洪端阳，陈 林，等．ＧＰＥＲ抑制剂对雌激素长期诱导的ＭＣＦ １２Ａ乳腺上皮细胞生长和克隆形成的影响［Ｊ］．中国
医院药学杂志，２０１７，３７（３）：２３５－８．
［１６］ＷａｎｇＪ，ＨｏｎｇＤＹ，ＣｈｅｎＬ，ｅｔａｌ．ＥｆｆｅｃｔｏｆＧｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｕｐｌｅｄｒｅ ｃｅｐｔｏｒｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｎｌｏｎｇ ｔｅｒｍｅｘｐｏｓｕｒｅｔｏ１７β ｅｓｔｒａｄｉｏｌ ｉｎｄｕｃｅｄｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈａｎｄｃｌｏｎｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｉｎＭＣＦ １２Ａｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＣｈｉｎＪＨｏｓｐＰｈａｒｍ，２０１７，３７（３）：２３５－８．
［１７］ＹｉｎＨ，ＺｈｕＱ，ＬｉｕＭ，ｅｔａｌ．ＧＰＥＲｐｒｏｍｏｔｅｓｔａｍｏｘｉｆｅｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎＥＲ＋ｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｂｙｒｅｄｕｃｅｄＢｉｍｐｒｏｔｅｉｎｓｔｈｒｏｕｇｈＭＡＰＫ／ＥＲＫ ＴＲＩＭ２ｓｉｇｎａｌｉｎｇａｘｉｓ［Ｊ］．ＩｎｔＪＯｎｃｏｌ，２０１７，５１（４）：１１９１－８．
ＧＰＥＲｉｎｈｉｂｉｔｏｒｉｎｃｒｅａｓｅｓｔａｍｏｘｉｆｅｎ ｉｎｄｕｃｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎ
Ｔ ４７ＤＴＲ ｒｅｓｉｓｔａｎｔｃｅｌｌｓ
失望近义词
ＺＨＡＮＧＭｉｎ ｑｉｎ１，２，ＳＯＮＧＹｕ ｘｕａｎ２，ＦＡＮＳｈｕａｎｇ ｑｉｎ２，ＲＥＮＳｈｕａｎｇ２，ＺＨＡＮＧＹｕｅ２，ＣＨＥＮＹａｎ２，ＳＨＥＮＸｉａｎｇ ｃｈｕｎ２，ＬＩＵＴｏｎｇ ｚｈｅｎｇ３，ＺＨＡＮＧＭｉｎ１，２（１．ＤｅｐｔｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＢａｓｉｃＭｅｄｉｃｉｎｅ；２．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＯｐｔｉｍａｌＵｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＮａｔｕｒａｌＭｅｄｉｃｉｎａｌＲｅｓｏｕｒｃｅｓ，ＧｕｉｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５００２５，Ｃｈｉｎａ；
３．ＪｉｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＴｕｍｏｒＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０６３２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｉｍ ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＧｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｕ ｐｌｅｄｅｓｔｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＧＰＥＲ）ｉｎｈｉｂｉｔｏｒＧ１５ｏｎｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｔａｍｏｘｉｆｅｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｔｃｅｌｌｓｔｏＴ ４７ＤＴＲ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｗｅｒｅｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｗｉｔｈ４ ｈｙｄｒｏｘｙｔａｍｏｘｉｆｅｎ（４ ＯＨＴ），ｔｈｅａｃｔｉｖｅｆｏｒｍｏｆｔａｍｏｘｉｆｅｎｉｎｖｉｖｏ．Ｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｔａｍｏｘｉｆｅｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｔｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅＴ ４７ＤＴＲａｎｄｉｔｓｐａｒｅｎｔａｌｃｅｌｌｌｉｎｅＴ ４７ＤｔｏｔａｍｏｘｉｆｅｎｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＭＴＴａｓｓ
ａｙ；ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＧＰＥＲｐｒｏｔｅｉｎｗａｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙｐｌａｓｍａｓｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｉｎｈｉｂｉｔｏｒＧ１５；ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆ４ ＯＨＴｃｏｍ ｂｉｎｅｄｗｉｔｈＧ１５ｏｎｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆＴ ４７ＤＴＲｃｅｌｌｓｗａｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙＡｎｎｅｘｉｎＶ ＦＩＴＣ／ＰＩｄｏｕｂｌｅｓｔａｉｎｉｎｇ；ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｒｅｌａｔｅｄｐｒｏ ｔｅｉｎｓＢａｘ，Ｂｃｌ ２，ｃａｓｐａｓｅ ３，ｃｌｅａｖｅｄｃａｓｐａｓｅ ３，ｃａｓｐａｓｅ ９，ｃｌｅａｖｅｄｃａｓｐａｓｅ ９ｗｅｒｅａｎａｌｙｓｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ （１）ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｐａｒｅｎｔａｌｃｅｌｌＴ ４７Ｄ，ｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆＴ ４７ＤＴＲ ｒｅｓｉｓｔａｎｔｃｅｌｌｓｔｏ４ ＯＨＴｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｅｎｈａｎｃｅｄ．（２）Ｗｈｅｎ４ ＯＨＴ（２μｍｏｌ·Ｌ－１）ｗａｓａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ，ｔｈｅｍｅｍｂｒａｎｅｄｉｓ ｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆＧＰＥＲｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇｔｈａｔＧＰＥＲｗａｓａｃｔｉｖａｔｅｄｉｎＴ ４７ＤＴＲ ｒｅｓｉｓｔａｎｔｃｅｌｌｓｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ；ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＯＨＴ，ｔｈｅｕｓｅｏｆＧ１５（５μｍｏｌ·Ｌ－１）ａｎｄＯＨＴｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｄｕｃｅｄｔｈｅｅｘ ｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＧＰＥＲ．（３）ＧＰＥＲｉｎｈｉｂｉｔｏｒＧ１５ｃｏｕｌｄｉｎ ｃｒｅａｓｅｔｈｅａｐｏｐｔｏｔｉｃｒａｔｅｏｆＴ ４７ＤＴＲ ｒｅｓｉｓｔａｎｔｃｅｌｌｓｗｈｉｌｅｄｏ
ｗｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｔｈｅａｎｔｉ ａｐｏｐｔｏｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎＢｃｌ ２ａｎｄｕｐ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐｒｏ ａｐｏｐｔｏｔｉｃｐｒｏ ｔｅｉｎｓＢａｘ，ｃｌｅａｖｅｄｃａｓｐａｓｅ ３，ｃｌｅａｖｅｄｃａｓｐａｓｅ ９．Ｃｏｎ ｃｌｕｓｉｏｎｓ ＴｈｅＧＰＥＲｉｎｈｉｂｉｔｏｒＧ１５ｉｎｃｒｅａｓｅｓｔｈｅａｐｏｐ ｔｏｓｉｓｏｆＴ ４７ＤＴＲｃｅｌｌｓａｎｄｒｅｓｔｏｒｅｓｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｔｃｅｌｌｓｔｏｔａｍｏｘｉｆｅｎ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ；ｔａｍｏｘｉｆｅｎ；ｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ；ＧＰＥＲ；Ｇ１５；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ
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·中国药理学通报 ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ ２０２３Ｊａｎ；３９（１）
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