网络出版时间：２０２２－１２－０９１８：２２：２４ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／／３４．１０８６．Ｒ．２０２２１２０９．１４２８．０３０．ｈｔｍｌ
◇肾脏药理学◇
新型磷酸二酯酶５抑制剂ＣＰＤ１对单侧输尿管梗阻引起的
肾间质纤维化小鼠治疗作用
刘傲璐１，任 倩２，封文斌１，李 斌１，陈心慧１，李思蓉１，赵子建１，穆云萍１，李芳红１
青山原不老
（１．广东工业大学生物医药学院，广东广州 ５１０００６，２．南方医科大学，南方医院肾内科，器官衰竭防治国家重点实验室，国家肾脏病临床医学研究中心，广东广州 ５１０５１５）
收稿日期：２０２２－０８－２１，修回日期：２０２２－１０－１８
基金项目：国家重点研发计划项目（Ｎｏ２０１８ＹＦＡ０８００６０３）；广东省重
点领域研发计划项目（Ｎｏ２０１９Ｂ０２０２０１０１５）；广东省“珠江人才计划”项目（Ｎｏ２
０１６ＺＴ０６Ｙ４３２）；广东省自然科学基金面上项目（Ｎｏ２０２０Ａ１５１５０１１３０２）；国家自然科学基金青年项目（Ｎｏ８２１０００６４）
作者简介：刘傲璐（１９９３－），女，博士生，研究方向：肾间质纤维化发
病机制及其防治，Ｅ ｍａｉｌ：１１１１９０６０１５＠ｍａｉｌ２．ｇｄｕｔ．ｅｄｕ．ｃｎ；
穆云萍（
１９８８－），女，博士，讲师，硕士生导师，研究方向：心肺疾病及纤维化疾病发病机制及创新药物研发，通信作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｍｕｙｕｎｐｉｎｇ２０１８＠ｇｄｕｔ．ｅｄｕ．ｃｎ；
蛏子煮多久
李芳红（１９６６－），女，博士，教授，博士生导师，研究方向：心血管疾病与纤维化、肿瘤病理诊断和创新药物研发，通信作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｆｌｉ＠ｇｄｕｔ．ｅｄｕ．ｃｎ
ｄｏｉ：１０．１２３６０／ＣＰＢ２０２２０２０５１
文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２３）０１－０１４７－０６中国图书分类号：Ｒ ３３２；Ｒ３２２ ６１；Ｒ３２２ ６３；Ｒ６９２ ３２；Ｒ９７７ ３
摘要：目的 探讨新型磷酸二酯酶５抑制剂ＣＰＤ１对单侧输尿管梗阻（ｕｎｉｌａｔｅｒａｌｕｒｅｔｅｒｉｃｏｂｓｔｒｕｃｔｉｏｎ，ＵＵＯ）诱导的肾纤维化小鼠肾脏组织结构损伤及间质纤维化的影响。方法 ８周龄♂Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠随机分为假手术组、模型组、ＣＰＤ１治疗组，手术结扎模型组和治疗组小鼠左侧输尿管，假手术组仅分离输尿管而不结扎。造模２ｈ后，给予ＣＰＤ１（５ｍｇ·
ｋｇ－１·ｄ－１
）灌胃治疗，持续７ｄ。通过组织病理学染色和
Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ，观察ＣＰＤ１治疗对ＵＵＯ小鼠患侧肾脏组织结构病变和纤维化标志蛋白：纤维连接蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ，ＦＮ）、α平滑肌肌动蛋白（α ＳＭＡ）、Ｉ型胶原（ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｉ）、肾损伤分子 １（ｋｉｄｎｅｙｉｎｊｕｒｙｍｏｌｅｃｕｌｅ１，Ｋｉｍ １）表达及分布的影响。结果 与假手术组相比，ＵＵＯ组小鼠患侧肾组织中肾小管扩张，可见明显空泡变性，炎症浸润增加，ＦＮ、α ＳＭＡ、ｃｏｌｌａ ｇｅｎ Ｉ及Ｋｉｍ １蛋白的表达明显增加（Ｐ＜０ ０５）；ＣＰＤ１可明显改善ＵＵＯ模型小鼠患侧肾脏的结构，降低胶原纤维蛋白的沉积，纤维化标志蛋白ＦＮ、α ＳＭＡ、ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｉ及Ｋｉｍ １的表达均得到明显抑制（Ｐ＜０ ０５）。结论 磷酸二酯酶５抑制剂ＣＰＤ１通过下调细胞外基质ＥＣＭ的沉积，减少Ｋｉｍ １介导的肾损伤，改善输尿管梗阻诱导的肾间质纤维化，其具体
的作用机制还有待进一步研究。
关键词：磷酸二酯酶５抑制剂；ＣＰＤ１；肾间质纤维化；单侧输尿管梗阻；胶原沉积；肾损伤
开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）：
肾间质纤维化是各种慢性肾脏疾病发展到末期的共同病理结果，常伴有肾小管萎缩和细胞外基质ＥＣＭ（纤维连接蛋白和Ⅰ型胶原）沉积、肌成纤维细胞数量增加、毛细血管闭塞、大量炎症细胞浸润，其
爱在深处纤维化程度与肾功能衰竭程度密切相关［１］
。全世
界７０岁以上的成年人中，有一半患有慢性肾病，占
总人口的１０％［２］。目前还没有减缓肾纤维化的靶
向治疗方法，很大一部分慢性肾病患者最终发展为终末期肾功能衰竭，只能依赖透析或肾移植维持生命。随着全世界肾衰竭发生率的不断上升，慢性肾病已成为一个重大的公共卫生问题，预防或延缓导
致终末期肾衰竭的肾功能不全是慢性肾病药物研发的最重要目标。因此，开发有效的治疗药物对于阻止疾病恶化至关重要。单侧输尿管梗阻（ｕｎｉｌａｔｅｒａｌｕｒｅｔｅｒｉｃｏｂｓｔｒｕｃｔｉｏｎ，ＵＵＯ）模型是目前研究最广泛的肾间质纤维化动物实验模型，该模型造模时间短，重复性好，可很好的模拟临床上输尿管梗阻性疾病以
及肾纤维化的过程［３］。
磷酸二酯酶（
ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ，ＰＤＥｓ）抑制剂是一种抑制ＰＤＥｓ活性的药物，广泛应用于勃起功能
障碍、肺动脉高压、心衰、哮喘等疾病中［４］。越来越多的研究显示，ＰＤＥ５抑制剂他达拉非［５］、西地那非、伐地那非［６］具有改善肾纤维化的作用。而传统
的Ｐ
ＤＥ５抑制剂选择性低、水溶性差、半衰期短（西地那非），导致生物利用度低、副作用强，因此，本课
题组在中国专利（ＣＮ１０２０２０６４５Ａ）［７］公开的西地那
非类似物ＷＹＱ基础上，对其结构继续进行优化改
·７
４１·中国药理学通报 ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ ２０２３Ｊａｎ；３９（１）：１４７～５２
造，通过成盐和共晶筛选，最终选出优良晶型ＣＰＤ１（Ｆｉｇ１），其水溶性及肠溶性得到大幅提升，降低了
药物治疗剂量，从而提升生物利用度［８］。本课题组
前期研究已经证实，ＣＰＤ１可通过抑制肺动脉高压模型大鼠的肺动脉平滑肌细胞中钙通道功能治疗肺
动脉高压［
９］
，因此，本研究继续探索了ＣＰＤ１在肾脏
疾病中发挥的作用。
Ｆｉｇ１ ＴｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｆｏｒｍｕｌａｏｆＣＰＤ１
本研究使用ＵＵＯ小鼠模型，观察新型ＰＤＥ５抑制剂Ｃ
观潮教学反思ＰＤ１对肾纤维化病理学组织结构的改善，胶原纤维的沉积以及纤维化标志蛋白和肾损伤分子表达水平的影响。初步验证ＣＰＤ１对肾间质纤维化的治疗作用，为进一步探讨ＣＰＤ１作用于肾间质纤维化的分子机制奠定基础。１ 材料与方法１．１ 材料
１．１．１ 实验动物 ♂Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠（８周龄），购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司（４３０７２７１１１００３６５５２３），饲养于广东药科大学实验动物中心，ＳＹＸＫ（粤）２０１７ ０１２５。本实验方案严格遵循广东药科大学动物伦理委员会（编号：ｇｄｐｕｌａｃｓｐｆ２０１７０２７）制定的动物护理方针。１．１．２ 试剂 ＣＰＤ１（ＥＴ３２６３７ ３７ Ｐ１）委托天津药明康德新药开发有限公司合成，
ＣＰＤ１经ＣＯＡ分析测定纯度达９
９％。青霉素、二甲苯、无水乙醇购自美国ｓｉｇｍａａｌｄｒｉｃｈ公司。ＳＤＳ、甘氨酸、吐温２０、３０％Ａｃｒｙｌａｍｉｄｅ、１ ０ｍｏｌ·Ｌ－１
Ｔｒｉｓ ＨＣｌ（ｐＨ６ ８）、１ ５ｍｏｌ·Ｌ－１
Ｔｒｉｓ ＨＣＬ（ｐＨ８ ８）、４０×ＴＢＳＴ粉剂均购自上海生工生物技术有限公司。ＨＥ染色试剂盒（Ｃ０１０５），ＳｉｒｉｕｓＲｅｄ试剂盒（Ｓｏｌａｒｂｉｏ，Ｇ１４７０），ＳＰ试剂盒（中杉金桥，ＳＰ ９００１），ＤＡＢ（中杉金桥，ＺＬＩ ９０１７），ＲＩＰＡ裂解液（碧云天Ｐ００１３Ｂ）、磷酸酶蛋白酶抑制剂（碧云天Ｐ１０５１）、ＰＭＳＦ（碧云天ＳＴ５０６）。一抗：α
ＳＭＡ（ＣＳＴ１９２４５）、ＦＮ（ａｂ２４１３）、Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｉ（ＣＳＴ９１１４４）、Ｋｉｍ １（Ｒ＆ＤＡＦ１８１７）、α ｔｕｂｕｌｉｎ（ｓｉｇ ｍａＴ５１６８），二抗（ＪＡＸ１１１ ０３５ ００３）。脱脂奶粉，ＢＳＡ（上海生工）。
１．１．３ 仪器 分析天平（ＢＰ２２１Ｓ，德国Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ），倒置显微镜（Ｌｅｉｃａ德国），ＣｈｅｍｉＤｏｃ＋ＸＲＳ化学发光凝胶成像系统（Ｂｉｏ Ｒａｄ），移液器（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ），烘箱（ＤＨ６ ９１４３Ｂ５ Ⅲ，上海新苗），石蜡包埋机（ＭＰＳ／Ｐ１惶恐是什么意思
，德国ＳＬＥＥ），低温离心机（美国Ｔｈｅｒｍｏ），－８０℃冰箱（中国美菱），纯水仪（ＥＰＥＤ ２ＴＦ）。１．２ 方法
１．２．１ ＵＵＯ小鼠模型的构建 将体质量为２０～２２ｇ的雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠随机分为３组，每组６只，分别为假手术组、单侧输尿管结扎组（ＵＵＯ模型组）、单侧输尿管结扎ＣＰＤ１干预组（ＵＵＯ＋ＣＰＤ１（５
ｍｇ·ｋｇ－１
））。手术前称重，用１ ２５％三溴乙醇腹腔
注射麻醉小鼠，剔除小鼠左侧腹部毛发，７５％酒精常规消毒后，将小鼠右侧卧固定于手术台上。于
腹部
左侧斜切约０
５ｃｍ皮肤切口，逐层剪开腹壁，弯镊拨开脂肪暴露并游离左侧肾脏和输尿管，用５－０细线将输尿管两点结扎后从中间剪断。结扎成功后用抗生素清洗腹腔、逐层缝合、涂抹碘伏，并将小鼠置于恒温垫上待其苏醒。假手术组经过同样的操作步骤仅游离输尿管，不结扎。治疗组：将ＣＰＤ１溶于生理盐水，于造模２ｈ后予以药物灌胃治疗，每天１次，持续７ｄ，假手术组和模型组予以同体积生理盐水直至模型结束。
１．２．２ 标本收集 实验结束时将小鼠安乐死，摘取小鼠患侧肾脏，快速投入冰ＰＢＳ中清洗表明血渍，摘取的肾脏沿冠状面切开，一部分置于４％多聚甲醛固定液中固定，另一部分组织冻于液氮中保存进行后续Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测。
１．２．３ 肾脏ＨＥ、ＳｉｒｉｕｓＲｅｄ染色 肾脏组织固定２４ｈ，常规脱水、石蜡包埋，切成厚３μｍ切片，进行ＨＥ和ＳｉｒｉｕｓＲｅｄ染色，观察肾脏病理形态学改变和肾脏胶原纤维的沉积。
１．２．４ 肾脏免疫组化染色 切片常规脱蜡至蒸馏水，ＰＢＳＴ洗３次，抗原修复，加入金桥Ｓ
Ｐ ９００１试剂１阻断内源性过氧化物酶，室温孵育１０ｍｉｎ。用山羊血清室温封闭１ｈ。孵育一抗α ＳＭＡ（１∶１００）／
ＦＮ（１∶１００）４℃过夜。ｄ２ＰＢＳＴ洗３次后，滴加生物素标记山羊抗兔ＩｇＧ聚合物，室温孵育１５ｍｉｎ，ＰＢＳＴ洗３次。滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，室温孵育１５ｍｉｎ，ＰＢＳＴ洗３次。ＤＡＢ显色，苏木精复染３ｍｉｎ，分化、反蓝、脱水、透明、封片。
１．２．５ 肾脏Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测 取适量肾脏组织于加入磷酸酶和蛋白酶抑制剂的Ｒ
ＩＰＡ裂解液中，充分研磨后，４℃，１２０００×ｇ，离心２０ｍｉｎ，取上清得组织总蛋白，ＢＣＡ法测定蛋白浓度，蛋白变性后于
·
８４１·中国药理学通报 ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ ２０２３Ｊａｎ；３９（１）
－８０℃保存。制备ＳＤＳ 聚丙烯酰胺凝胶，每孔上样３０～４０μｇ总蛋白，电泳，转膜，５％牛奶室温封闭２ｈ，一抗４℃过夜孵育：α ＳＭＡ（１∶１０００）、ＦＮ（１∶１０００）、ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｉ（１∶１０００）、Ｋｉｍ １（１∶１０００）、α ｔｕｂｕｌｉｎ（１∶５０００），
室温孵育二抗（１∶５０００）１ｈ。点化学发光试剂曝光显影，采用ＩｍａｇｅＬａｂ软件进行半定量分析。
１．３ 统计学分析 采用ＧｒａｐｈｐａｄＰｒｉｓｍ８ ０软件进行统计学分析。计量资料以珋ｘ±ｓ表示，两组之间比较采用Ｓｔｕｄｅｎｔ′ｓｔ检验，多组比较采用单因素方差分析和Ｔｕｋｅｙ’ｓ检验。
２ 结果
２．１ ＣＰＤ１对ＵＵＯ模型小鼠肾脏组织结构损伤的影响 ＨＥ染色观察ＣＰＤ１治疗对ＵＵＯ小鼠患侧肾脏组织结构损伤情况的影响。结果显示：假手术组（ｓｈａｍ）小鼠肾脏组织结构基本正常无病变，肾小管饱满；ＵＵＯ模型组小鼠组织中肾小管扩张，肾小管上皮细胞可见疏松、肿胀和空泡变性，肾小球基底膜增厚，肾脏间质炎性细胞浸润明显，肾间质宽度增加，纤维化明显；与ＵＵＯ模型组相比，ＵＵＯ＋ＣＰＤ１治疗组中肾小管空泡变性较少，病变程度明显减轻（Ｆｉｇ２）。提示ＣＰＤ１可有效改善输尿管梗阻引起的肾脏组织结构损伤。
２．２ ＣＰＤ１对ＵＵＯ模型小鼠肾脏肾间质胶原纤维沉积的影响 利用ＳｉｒｉｕｓＲｅｄ染色观察ＣＰＤ１对ＵＵＯ小鼠肾脏组织胶原纤维沉积情况的影响。结果显示：ｓｈａｍ组小鼠患侧肾脏组织结构完整，基本无红色阳性着色，胶原阳性染色区域主要位于系膜区、肾小管间质的毛细血管周着多音字组词
围；ＵＵＯ模型组肾脏间质及小管处可见明显的天狼星红阳性区域，表明有大量胶原沉积；与模型组相比，ＵＵＯ＋ＣＰＤ１治疗组中小管间质胶原沉积明显减少（Ｆｉｇ３），表明ＣＰＤ１干预可明显减少输尿管梗阻引起的肾间质胶原纤维沉积，延缓肾纤维化的进展。
２．３ ＣＰＤ１对ＵＵＯ小鼠肾脏组织纤维化标志蛋白表达的影响 为了进一步探究ＣＰＤ１对纤维化标志蛋白表达的作用，利用免疫组化染色（ＩＨＣ）和Ｗｅｓｔ ｅｒｎｂｌｏｔ方法检测了小鼠肾脏组织中α 平滑肌肌动蛋白（α ＳＭＡ）、纤维连接蛋白（ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ，ＦＮ）、Ⅰ型胶原（ｃｏｌｌａｇｅｎ Ⅰ）和肾损伤分子 １（ｋｉｄｎｅｙｉｎｊｕｒｙｍｏｌｅｃｕｌｅ １，Ｋｉｍ １）的分布情况及表达水平。ＩＨＣ结果显示：与ｓｈａｍ组相比，ＵＵＯ模型组肾脏
间
Ｆｉｇ２ ＣＰＤ１ａｌｌｅｖｉａｔｅｄＵＵＯ ｍｅｄｉａｔｅｄｒｅｎａｌｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｊｕｒｙ
ＨＥｓｔａｉｎｉｎｇｏｆｋｉｄｎｅｙｔｉｓｓｕｅｓｅｃｔｉｏｎｓ．Ｓｃａｌｅｂａｒ，２００μｍ（Ａ）ａｎｄ１００μｍ（Ｂ）
．
Ｆｉｇ３ ＣＰＤ１ａｌｌｅｖｉａｔｅｄＵＵＯ ｍｅｄｉａｔｅｄｒｅｎａｌｃｏｌｌａｇｅｎｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ
ＳｉｒｉｕｓＲｅｄｓｔａｉｎｉｎｇｏｆｋｉｄｎｅｙｔｉｓｓｕｅｓｅｃｔｉｏｎｓ．Ｓｃａｌ
ｅｂａｒ＝５０μｍ．
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中国药理学通报 ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ ２０２３Ｊａｎ；３９（１）
质处可见大量α ＳＭＡ（Ｆｉｇ４）和ＦＮ（Ｆｉｇ５）着色阳性区域；ＵＵＯ＋ＣＰＤ１治疗组中阳性着色面积明显低于模型组（Ｐ＜０ ０５）。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示：经ＣＰＤ１干预后，纤维化蛋白标志分子ＦＮ、ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｉ、α
ＳＭＡ的表达水平明显性降低，该结果与免疫组化染色结果一致。ＵＵＯ＋ＣＰＤ１治疗组中肾损伤
分子Ｋｉｍ １的表达也明显低于模型组（Ｐ＜０ ０５）（Ｆｉｇ６），提示ＣＰＤ１明显降低ＵＵＯ小鼠患侧肾脏组织中纤维化标志蛋白的表达，减轻输尿管梗阻引起的肾损伤，
有效延缓疾病进展。
Ｆｉｇ４ ＥｆｆｅｃｔｏｆＣＰＤ１ｏｎα ＳＭＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＵＵＯｍｏｕｓｅｋｉｄｎｅｙｂｙＩＨＣ
Ｓｃａｌｅｂａｒ，２００μｍ（Ａ）ａｎｄ１００μｍ（Ｂ）．Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓ． Ｐ＜０ ０１ｖｓｓｈａｍ；＃Ｐ＜０ ０５ｖｓＵＵＯ（Ｃ）
．
Ｆｉｇ５ ＥｆｆｅｃｔｏｆＣＰＤ１ｏｎＦｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＵＵＯｍｏｕｓｅｋｉｄｎｅｙｂｙＩＨＣ
Ｓｃａｌｅｂａｒ，２００μｍ（Ａ）ａｎｄ１００μｍ（Ｂ）．Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓ． Ｐ＜０ ０１ｖｓｓｈａｍ；＃
Ｐ＜０ ０５ｖｓＵＵＯ（Ｃ）
．
Ｆｉｇ６ ＥｆｆｅｃｔｏｆＣＰＤ１ｏｎｐｒｏｔｅｉｎｌｅｖｅｌｓｏｆｏｆＦＮ，ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｉ，α
ＳＭＡ，Ｋｉｍ １ｉｎＵＵＯｍｏｕｓｅｋｉｄｎｅｙｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔＡ：ＲｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ．Ｔｈｅｎｕｍｂｅｒｓ（１，２，３…）ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅａｃｈｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｍｏｕｓｅ；Ｂ～Ｅ：Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓｒｅｌａｔｉｖｅｌｅｖｅｌｓｏｆｆｉ
ｂｒｏｎｅｃｔｉｎ，ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｉ，α
ＳＭＡａｎｄＫｉｍ １，
Ｐ＜０ ０５ｖｓＵＵＯ．·
０５１·中国药理学通报 ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ ２０２３Ｊａｎ；３９（１）
３ 讨论
肾纤维化是创面愈合过程的病理延伸，以损伤、炎症、肌成纤维细胞激活和迁移、基质沉积和重塑为特征，是所有慢性和进行性肾病的共同最终途径，也是肾功能不全的主要决定因素［１０］。在ＵＵＯ模型中，梗阻造成的压力使输尿管扩张，压力传至肾小管导致小管上皮细胞受到机械性损伤，肾小球滤过率（ＧＦＲ）降低。在ＵＵＯ早期的１～２ｈ内肾血流量（ＲＢＦ）增加，随着阻塞时间的延长，ＲＢＦ逐渐减少，使毛细血管收缩导致血供不足。当肾脏轻度损伤后，由肌成纤维细胞产生的细胞外基质最初可能有助于组织修复过程，随后即被再吸收。然而，在ＣＫＤ发生的慢性损伤中，细胞外基质蛋白持续不受抑制的过度沉积，致使毛细血管稀疏，减少了肾小管周围的血流量，导致肾小管缺氧和肾单位脱落，最终破坏器官结构、导致肾功能衰竭。因此，抑制细胞外基质的沉积是改善肾纤维化的首要目标，我们的研究结果发现，ＣＰＤ１可使肾脏组织结构得到改善，降低细胞外基质胶原的沉积。α ＳＭＡ是肌成纤维细胞的特异性标志蛋白，在生理状态下主要表达于平滑肌组织和心肌组织中，肾脏中表达较低。而在病理条件下，发生上皮间质转化（ＥＭＴ），使α ＳＭＡ的表达升高，因此α ＳＭＡ的表达水平反映了肾间质纤维化的进展。Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ主要由肾小球系膜细胞分泌，分布在系膜区，在正常肾脏组织中表达较低，有研究发现，ＵＵＯ模型中肾脏组织ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ的表达量与造模时间成正比，反映了纤维化的严重程度［１１］。本研究结果显示，ＵＵＯ模型小鼠经ＣＰＤ１干预后，α ＳＭＡ和细胞外基质蛋白ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ、ｃｏｌｌａ ｇｅｎ Ｉ的表达均得到明显抑制。Ｋｉｍ １是一种磷脂酰丝氨酸受体，由受损的近端肾小管上皮细胞表达，在肾小管间质纤维化过程中起重要作用。在临床研究中，Ｋｉｍ １被作为肾小管损伤
的早期诊断指标［１２］。本研究发现，ＣＰＤ１干预可有效降低Ｋｉｍ １蛋白的表达，表明ＣＰＤ１通过下调细胞外基质ＥＣＭ沉积，减少Ｋｉｍ １介导的肾损伤，抑制单侧输尿管梗阻诱导的肾间质纤维化进展，ＣＰＤ１可能参与了肾小管上皮细胞的上皮－间质转化以及对系膜细胞的激活抑制具有调控作用。
环磷酸鸟苷（ｃＧＭＰ）是重要的第二信使，在不同的器官和细胞类型中调节各种生理功能，如血管扩张、炎症和凋亡。有研究报道，提高ｃＧＭＰ水平对包括肾脏在内的各种器官均显示出有效的抗纤维化效果［１３］。ｃＧＭＰ的细胞浓度是由其合成和降解之间的平衡决定的，磷酸二酯酶５（ＰＤＥ５）是特异性催化ｃＧＭＰ水解的酶，可溶性鸟苷酸环化酶（ｓＧＣ）刺激剂和ＰＤＥ５抑制剂，均可使ｃＧＭＰ浓度增加［１４］。ＰＤＥ５抑制剂通过其下游信号转导，在治疗慢性肾病（ＣＫＤ）患者的肾纤维化方面显示出潜力［１５］。本课题组自主研发的新型ＰＤＥ５抑制剂ＣＰＤ１克服了传统的ＰＤＥ５抑制剂水溶性和肠溶性差、对ＰＤＥ５特异性不强（西地那非对ＰＤＥ５特异性仅为ＰＤＥ６的１０倍，而ＷＹＱ有３０００倍）、副作用较大的缺点，有效提高了药物生物利用度且具有更稳定的理化性质（中国发明专利申请号：２０１９１０５０５９４８ ５）。本研究利用ＵＵＯ模型，观察了ＣＰＤ１对肾纤维化小鼠的治疗作用，从病理学以及分子层面进行验证。
综上所述，新型ＰＤＥ５抑制剂ＣＰＤ１改善肾纤维化的作用可能是通过降低纤维化相关蛋白的表达、减少Ｋｉｍ １介导的肾损伤产生的，但其具体的作用分子机制还有待进一步探索，本研究对抗肾
纤维化新药的开发和临床研究具有重要意义。
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ａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｔｈｅｒｅｏｆ．Ｃｈｉｎａ：ＣＮ１０２０２０６４５Ａ［Ｐ］，２０１１－０４
－２０．
［８］ 赵子建，穆云萍，李芳红，等．一种５型磷酸二酯酶抑制剂的钾
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中国药理学通报 ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ ２０２３Ｊａｎ；３９（１）
