网络出版时间：２０２２－１２－０９１８：３３：２０ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／／３４．１０８６．Ｒ．２０２２１２０９．１４２８．０２０．ｈｔｍｌ
ＦＫＢＰ３８可调控多巴胺能神经元的凋亡
刘 静，谢彩婷，封文斌，赵文卓，李芳红，吴晓丽，赵子建
（广东工业大学生物医药学院，广东广州 ５１０００６）
收稿日期：２０２２－０８－２２，修回日期：２０２２－１１－２４
基金项目：国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ８２００３６１５）；国家重点研
非税收入票据发计划（Ｎｏ２０１８ＹＦＡ０８００６０３）；广东省重点领域研发计划“新药创制”专项（Ｎｏ２０１９Ｂ０２０２０１０１５）；广东省创新团队（
Ｎｏ２０１６ＺＴ０６Ｙ４３２）；广东省高校高水平科研项目（Ｎｏ２０ＺＫ０２３０）
作者简介：刘 静（１９９５－），女，硕士生，研究方向：ＦＫＢＰ３８对帕金
森病的治疗，
孜然牛肉的家常做法
Ｅ ｍａｉｌ：１８０８６４７１７６１＠１６３．ｃｏｍ；吴晓丽（１９８８－），女，博士，讲师，研究方向：神经退行性疾病机制研究及药物开发，通信作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｗｕｘｉａｏｌｉ＠ｇｄｕｔ．ｅｄｕ．ｃｎ；
赵子建（１９６２－），男，博士，教授，博士生导师，研究方向：慢性疾病与创新药物，通信作者，Ｅ ｍａｉｌ：ａｚｚｈａｏ＠ｇｄｕｔ．ｅｄｕ．ｃｎ
ｄｏｉ：１０．１２３６０／ＣＰＢ２０２２０１０９４
文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２３）０１－００９０－０７中国图书分类号：Ｒ ３３２；Ｒ３２９ ２５；Ｒ７４２ ５；Ｒ７４５ ７；Ｒ９７７ ６摘要：目的 研究ＦＫＢＰ３８在鱼藤酮诱导的帕金森病（Ｐａｒ ｋｉｎｓｏｎ’ｓｄｉｓｅａｓｅＰＤ）细胞模型中抑制凋亡的作用。方法 体内实验：构建ＭＰＴＰ所致的ＰＤ体内模型，检测ＰＤ小鼠脑中α ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ、ＴＨ和ＦＫＢＰ３８的表达。体外实验：使用鱼藤酮刺激多巴胺能神经元ＭＮ９Ｄ细胞构建ＰＤ体外模型；采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ＰＤ体外模型中α ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ、ＴＨ、Ｔｏｍ２０和ＦＫＢＰ３８的表达水平；将ＦＫＢＰ３８慢病毒转入ＭＮ９Ｄ细胞构建稳定过表达及敲减ＦＫＢＰ３８的细胞株；采用ＣＣＫ ８法检测过表达及敲减ＦＫＢＰ３８的细胞在受到鱼藤酮刺激后的
细胞活力；通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ＰＤ细胞模型中抗凋亡蛋白Ｂｃｌ ２和凋亡蛋白Ｂ
ａｘ的表达水平。结果 在ＰＤ体内外模型中，
ＦＫＢＰ３８蛋白表达水平均明显地下调（Ｐ＜０ ０１）。而敲减ＦＫＢＰ３８后加剧了鱼藤酮造成的多巴胺能神经元细胞活力下降（Ｐ＜０ ０５），而过表达ＦＫＢＰ３８却可明显地改善鱼藤酮造成的多巴胺能神经元细胞活力下降（
Ｐ＜０ ０５），并且，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果表明，过表达ＦＫＢＰ３８可明显地上调ＰＤ多巴胺能神经元中抗凋亡蛋白Ｂｃｌ ２的表达水平及升高Ｂｃｌ ２／Ｂａｘ的比值（Ｐ＜０ ０５）。结论 在ＰＤ细胞模型中，调控ＦＫ ＢＰ３８可改善多巴胺能神经元凋亡。
关键词：帕金森病；鱼藤酮；ＭＮ９Ｄ细胞；细胞活力；凋亡；ＦＫ ＢＰ３８
开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）：
帕金森病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓｄｉｓｅａｓｅＰＤ）又称为震颤麻痹，是一种影响患者活动能力的中枢神经系统慢
性疾病，起病隐袭，进展缓慢［
１］
。其主要病理特征是中脑黑质致密部多巴胺能神经元损伤，神经元内出现以α 突触核蛋白（α
ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ）为关键成分的路易小体（Ｌｅｗｙｂｏｄｙ），进而引起神经元变性、凋亡，
导致脑部多巴胺水平降低［
２］
。文献研究表明，减少多巴胺神经元凋亡可一定程度改善ＰＤ的症状。目前临床上用于治疗Ｐ
Ｄ的药物（司来吉兰和美多巴）均是通过提高多巴胺水平，从而减少神经元凋亡。然而，这些药物只能改善ＰＤ症状，并不能阻止病情
的进展，也无法治愈疾病［
１－３］
。因此，寻找新的靶点，在ＰＤ发病早期进行基因修饰，抑制神经元凋亡，进而改善ＰＤ症状，是极为迫切的事情。
过网击球
ＦＫ５０６结合蛋白３８（ＦＫＢＰ３８）是ＦＫＢＰ家族蛋白之一，特征在于其相应的ｍＲＮＡ在人脑组织中显
著表达［４］
管理用财务报表
，包含ＦＫ５０６结合域并表现出肽基脯氨酰异构酶活性［５－６］。在小鼠胚胎发育过程中，ＦＫＢＰ３８可通过拮抗Ｓｈｈ通路延缓神经管的关闭［７－８］。并且
ＦＫＢＰ３８的丢失还会导致后神经管细胞凋亡增加和
发育异常［９］。此外，还有研究表明ＦＫＢＰ３８通过其
Ｃ端跨膜结构域锚定在线粒体外膜上，招募并帮助
抗凋亡蛋白Ｂｃｌ ２来抑制细胞凋亡［１０－１１］。这提示ＦＫＢＰ３８可能是一种重要的细胞凋亡抑制剂［１２］。但
是，尚未有研究报道Ｆ
ＫＢＰ３８在帕金森病中对多巴胺能神经元的作用。
因此，本文旨在探讨在ＰＤ体内外模型中ＦＫ ＢＰ３８蛋白表达情况，并选用神经毒素诱导的ＰＤ体外模型，研究过表达和敲减ＦＫＢＰ３８后，对多巴胺能神经元凋亡的作用。１ 材料与方法１．１ 材料
１．１．１ 实验动物 ８周龄♂的Ｃ５７ＢＬ／６小鼠３０只，体质量（２０～２５）ｇ，购买于广东省医学实验动物中心（广东佛山，编号：４４００７２０００８５２００）。小鼠每笼５只，饲养温度（２１～２５）℃，１２ｈ昼夜交替，自由饮水摄食，每周更换３～４次垫料，动物在开展实验
前先适应性喂养１周。
１．１．２ 细胞和慢病毒 ＭＮ９Ｄ（小鼠中脑多巴胺神经元）细胞购自广州吉尼欧公司。ＦＫＢＰ３８慢病毒载体购自广州赛业公司，慢病毒载体为ＬＶ ＥＦＳ＞ｍＦＫｂＰ８ ＰＧＫ＞Ｐｕｒｏ和ＬＶ ＣＭＶ＞ｅＧＦＰ／Ｔ２Ａ／Ｐｕｒｏ（以下分别简写为ＯＶ ＦＫＢＰ３８及ＯＶ ＮＣ），ＬＶ Ｕ６＞ｍＦＫｂＰ８［ｓｈＲＮＡ＃２］ ＰＧＫ＞Ｐｕｒｏ和ＬＶ Ｕ６＞Ｓｃｒａｍ ｂｌｅ ｓｈＲＮＡ ＰＧＫ＞ＥＧＦＰ／Ｔ２Ａ／Ｐｕｒｏ（以下分别简写为ｓｈ ＮＣ及ｓｈ ＦＫＢＰ３８），该慢病毒中含有ＦＫＢＰ３８全长ｃＤＮＡ，所有结构都经ＤＮＡ测序验证，转染效果经免疫印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）验证。
１．１．３ 试剂 ＲＰＭＩ１６４０（Ｌｏｔ：ＰＭ１５０１１０Ａ）购自武汉普诺赛公司；胎牛血清购自于美国Ｇｉｂｃｏ公司；胰酶（Ｌｏｔ：２１２０６４９）购买于美国Ｇｉｂｃｏ公司；ＣＣＫ ８（ｃｅｌｌｃｏｕｎｔｉｎｇｋｉｔ ８，批号：Ｇ９０９ＦＡ００３）购自上海生物工程有限公司；ＤＭＳＯ购自于美国ｓｉｇｍａａｌｄｒｉｃｈ公司；ＦＫＢＰ３８抗体购自Ｒ＆Ｄ公司；α ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ、Ｔｏｍ２０和Ｂａｘ抗体购自美国ＣＳＴ公司；Ｂｃｌ ２抗体购自英国Ａｂｃａｍ公司；ＴＨ抗体购买于美国Ｇｉｂｃｏ公司；鱼藤酮和ＭＰＴＰ购自中国阿拉丁公司；ＭＰＰ＋购买于美国Ｓｉｇｍａ公司。
１．１．４ 仪器 二氧化碳培养箱ＣＬＭ １７０Ｂ ８ ＮＦ型（ＥＳＣＯ，新加坡）；二级生物安全柜ＡＣ２ ４Ｓ１型（ＥＳ ＣＯ，新加坡）；ＥＰＥＤ ２ＴＦ纯水仪（中国）；ＤＹＹ ６Ｃ电泳仪（中国）；多管架自动平衡离心机ＴＤＺ５ ＷＳ型（上海卢湘仪离心机仪器有限公司）；流式细胞仪（ＤＸＰＡｔｈｅｎａＴＭ，美国）；Ｌｅｉｃａ倒置显微镜（Ｌｅｉｃａ，德国）；酶标仪ＣＭＡＸＰＬＵＳ＋（美国）；化学发光凝胶成像系统ＣｈｅｍｉＤｏｃ＋ＸＲＳ（Ｂｉｏ Ｒａｄ，美国）。１．２ 方法
１．２．１ 小鼠分组及给药 小鼠随机分为２组，每组１５只：对照组、模型组。以腹腔注射的方式给予模型组小鼠１０ｍｇ·ｋｇ－１的ＭＰＴＰ，给予对照组小鼠相同体积的ＰＢＳ。３ｄ注射１次，连续注射７次，在末次注射后的ｄ２进行脱颈椎处死小鼠，立即取脑，冰上操作，剥离纹状体和
黑质，液氮速冻，后转至－８０℃保存备用。
１．２．２ 细胞培养及药物处理 ＭＮ９Ｄ细胞用添加１０％胎牛血清的ＲＰＭＩ１６４０培养基，于３７℃、５％二氧化碳细胞培养箱中进行常规培养，每隔１天进行换液，２～３ｄ进行传代，待细胞密度为８５％左右，根据不同条件进行刺激。鱼藤酮及ＭＰＰ＋采用完全培养基溶解，刺激细胞时采取全换液的方式进行。１．２．３ 细胞分组及感染 将ＭＮ９Ｄ细胞分为ＦＫ ＢＰ３８过表达组（ＯＶ ＦＫＢＰ３８）及对照组（ＯＶ ＮＣ）、敲减ＦＫＢＰ３８组（ｓｈ ＦＫＢＰ３８）及对照组（ｓｈ ＮＣ），将细胞铺板接种于６孔板，每孔接种细胞数２×１０５个，放置于培养箱常规培养。待细胞密度长于３０％～５０％时进行感染慢病毒实验，收集细胞提蛋白进行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检验慢病毒感染效率。
１．２．４ ＣＣＫ ８法检测细胞增殖活性 将生长状态良好的ＭＮ９Ｄ细胞及转染慢病毒成功后的细胞制备成单细胞悬液并铺板接种于９６孔板，每孔１００μＬ细胞悬液，每孔接种细胞数２×１０４个，放置于培养箱常规培养。实验分组为不同浓度（８、４、２、１、０ ５、０ ２５、０ １２５、０）μｍｏｌ·Ｌ－１的鱼藤酮处理ＭＮ９Ｄ组，及同浓度鱼藤酮分别处理ＯＶ ＮＣ、ＯＶ ＦＫＢＰ３８、ｓｈ ＮＣ、ｓｈ ＦＫＢＰ３８组。过夜培养待细胞贴壁后，吸出原培养基，更换为提前配好不同浓度鱼藤酮药物的培养基；继续放置培养箱培养不同时间后，向每孔添加１０μＬＣＣＫ ８溶液，贴壁加入以免产生气泡，避光孵育，１～２ｈ后取出，用酶标仪测定在４５０ｎｍ处的吸光度（Ａ值）
。
１．２．５ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测蛋白水平 在１０ｃｍ细胞培养皿中加入２００μＬＲＩＰＡ裂解液，裂解液含（ＲＩ ＰＡ、ＰＭＳＦ、蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂），用无菌细胞刮缓慢刮下，置于冰上裂解１０ｍｉｎ，超声破碎１～２次，每次３０ｓ，４℃离心机１２０００ｒ·ｍｉｎ－１离心２０ｍｉｎ后，取上清于另一干净Ｅｐ管中，蛋白定量ＢＣＡ法检测待测样品浓度。待测样品与５×上样缓冲液稀释混合，金属浴１０ｍｉｎ。取同等质量蛋白样品在质量分数１０％或１２％聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ ＰＡＧＥ）进行电泳，恒压转膜至ＰＶＤＦ膜，室温下用５％脱脂奶粉封闭１ｈ或４℃过夜封闭。分别加一抗α－ｓｙｎ（１∶１０００）、ＦＫＢＰ３８（１∶５００）、Ｂａｘ（１∶１０００）、ＴＨ（１∶１０００）、Ｔｏｍ２０（１∶１０００）、Ｂｃｌ ２（１∶２０００）、β－ａｃｔｉｎ（１∶５０００），４℃孵育过夜。过夜孵育后ＴＢＳＴ洗膜３次，二抗室温孵育１ｈ，再次ＴＢＳＴ洗膜３次，ＥＣＬ发光成像仪曝光。并应用ＩｍａｇｅＪ软件对目标蛋白和内参蛋白灰度值进行分析，相对表达量＝目的蛋白灰度值／内参灰度值。１．２．６ 统计学方法 采用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ８ ０软件进行数据处理，符合正态分布的计量资料以珋ｘ±ｓ表示，多组间比较采用单因素方差分析（ＡＮＯＶＥ），组间多重比较采用Ｔｕｋｅｙ法。
２ 结果
２．１ ＰＤ体内模型中ＦＫＢＰ３８表达情况 如Ｆｉｇ１所示，通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ＭＰＴＰ诱导的ＰＤ体内模型。结果显示，在小鼠脑纹状体和黑质区域，α ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ蛋白的表达量水平明显升高（Ｐ＜０ ０１），
ＴＨ表达量水平明显下降（Ｐ＜０ ０１）（Ｆｉｇ１Ａ）。而在ＭＰＴＰ诱导的ＰＤ小鼠脑纹状体区域中ＦＫＢＰ３８表达水平明显下降（Ｐ＜０ ０１），在黑质区域中ＦＫ ＢＰ３８表达量无明显变化（Ｆｉｇ１Ｂ），说明在ＭＰＴＰ诱导的Ｐ
Ｄ体内模型中ＦＫＢＰ３８在纹状体中特异性下调，提示ＦＫＢＰ３８与ＰＤ模型中的特异性蛋白（α ｓｙ ｎｕｃｌｅｉｎ和ＴＨ）存在相关性。
２．２ ＰＤ细胞模型中ＦＫＢＰ３８表达情况 如Ｆｉｇ２所示，通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测鱼藤酮／ＭＰＰ＋（４μｍｏｌ
·Ｌ－１）／（３ｍｍｏｌ·Ｌ－１）处理ＭＮ９Ｄ细胞２４ｈ后的
α ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ、ＴＨ、Ｔｏｍ２０、ＦＫＢＰ３８的表达。结果显示，在鱼藤酮刺激ＭＮ９Ｄ诱导的ＰＤ细胞模型中，α ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ表达水平明显升高（Ｐ＜０ ０１），ＴＨ表达水
平明显下降（
Ｐ＜０ ０５），表明鱼藤酮诱导的ＰＤ细胞模型构建成功（Ｆｉｇ２Ａ），Ｔｏｍ２０的表达水平没有变化，而ＦＫＢＰ３８表达水平明显下降（Ｐ＜０ ０１）（Ｆｉｇ２Ｂ），表明ＦＫＢＰ３８在鱼藤酮诱导的ＰＤ细胞模型中特异性降低。
２．３ 稳定过表达ＦＫＢＰ３８的ＭＮ９Ｄ细胞株的建立 如Ｆｉｇ３所示，利用携带ＦＫＢＰ３８的慢病毒感染ＭＮ９Ｄ细胞。随后，我们利用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ＦＫＢＰ３８的表达水平。与ＭＮ９Ｄ组相比，ＯＶ ＮＣ组和ｓ
ｈ ＮＣ组的ＦＫＢＰ３８表达量均没有明显变化，说明选择的载体合适。与ＯＶ ＮＣ组相比，ＯＶ ＦＫＢＰ３８组的ＦＫＢＰ３８表达量明显上升（Ｐ＜０ ０５），说明ＦＫＢＰ３８过表达细胞构建成功。与ｓｈ ＮＣ组相比
，
Ｆｉｇ１ ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＦＫＢＰ３８ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｓｔｒｉａｔｕｍａｎｄｓｕｂｓｔａｎｔｉａｎｉｇｒａｏｆＰＤｍｏｄｅｌ（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
72小时是什么字 Ａ：α
ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ／ＴＨｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｓｔｒｉａｔｕｍａｎｄｓｕｂｓｔａｎｔｉａｎｉｇｒａ；Ｂ：ＦＫＢＰ３８ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｓｔｒｉａｔｕｍａｎｄｓｕｂｓｔａｎｔｉａｎｉｇｒａ． Ｐ＜０ ０５， Ｐ＜０ ０１ｖｓｃｏｎｔｒｏ
ｌ
Ｆｉｇ２ ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＦＫＢＰ３８ｉｎＰＤｃｅｌｌｍｏｄｅｌ（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
Ａ：α
ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ／ＴＨｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＰＤｃｅｌｌｓ；Ｂ：Ｔｏｍ２０／ＦＫＢＰ３８ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＰＤｃｅｌｌｓ． Ｐ＜０ ０５，
Ｐ＜０ ０１ｖｓｃｏｎｔｒｏｌ坐过山车
Ｆｉｇ３ ＦＫＢＰ３８ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｏｆＭＮ９Ｄｃｅｌｌｓ（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３） Ｐ＜０ ０１ｖｓｃｏｎｔｒｏｌ
ｓｈ ＦＫＢＰ３８组的ＦＫＢＰ３８表达量明显下降（Ｐ＜０ ０５），说明ＦＫＢＰ３８敲减细胞构建成功。
２．４ 鱼藤酮抑制ＭＮ９Ｄ细胞活力 如Ｆｉｇ４所示，ＣＣＫ ８检测不同浓度（８、４、２、１、０ ５、０ ２５、０ １２５、０）μｍｏｌ·Ｌ－１的鱼藤酮处理ＭＮ９Ｄ细胞８ｈ后，结果显示，显著抑制细胞增殖（Ｆｉｇ４Ａ）（Ｐ＜０ ０１），４μｍｏｌ·Ｌ－１浓度时，细胞活力下降到对照组的４９ ５２％，且用鱼藤酮（４μｍｏｌ·Ｌ－１）处理ＭＮ９Ｄ细胞不同时间，发现随着处理时间的增加，细胞活力降低加剧（Ｆｉｇ４Ｂ）（Ｐ＜０ ０１）处理８ｈ时，细胞活力为对照组５０ ０８％。因此，选用鱼藤酮（４μｍｏｌ·Ｌ－１）处理ＭＮ９Ｄ细胞８ｈ进行后续研究。
２．５ ＦＫＢＰ３８对ＰＤ细胞活力下降的影响 如Ｆｉｇ５所示，鱼藤酮处理ＭＮ９Ｄ细胞８ｈ后，与ｓｈ ＮＣ组模型组相比，ｓｈ ＦＫＢＰ３８组模型组的细胞活力明显下降（Ｆｉｇ５Ａ）（Ｐ＜０ ０１），表明ＦＫＢＰ３８敲减后加剧ＰＤ细胞活力下降。而与ＯＶ ＮＣ组模型组相比，ＯＶ ＦＫＢＰ３８组模型组的细胞活力明显增强（Ｆｉｇ５Ｂ）（Ｐ＜０ ０１），表明过表达ＦＫＢＰ３８可以明显改善ＰＤ细胞活力下降。
２．６ ＦＫＢＰ３８对ＰＤ细胞凋亡的影响 如Ｆｉｇ６所示，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测结果显示，与对照组相比，模型组经鱼藤酮处理ＭＮ９Ｄ细胞８ｈ后，抗凋亡蛋白Ｂｃｌ ２的表达明显下调（Ｐ＜０ ０５），凋亡蛋白Ｂａｘ的表达没有差异，但Ｂｃｌ ２／Ｂａｘ比值降低（Ｐ＜０ ０５），表明鱼藤酮引起了多巴胺能神经元的凋亡。与ＯＶ ＮＣ组模型组相比，ＯＶ ＦＫＢＰ３８组模型组的Ｂｃｌ ２蛋白表达上升（Ｐ＜０ ０１），Ｂａｘ
的表达量没有差异，
Ｆｉｇ４ ＥｆｆｅｃｔｏｆｒｏｔｅｎｏｎｅｏｎｖｉａｂｉｌｉｔｙｏｆＭＮ９Ｄｃｅｌｌｓ（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）Ａ：ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆｒｏｔｅｎｏｎｅｏｎｔｈｅｖｉａｂｉｌｉｔｙｏｆＭＮ９Ｄｃｅｌｌｓ；Ｂ：ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｒｏｔｅｎｏｎｅｏｎｔｈｅｖｉａｂｉｌｉｔｙｏｆＭＮ９Ｄｃｅｌｌｓａｔｄｉｆ ｆｅｒｅｎｔｔｉｍｅｐｏｉｎｔｓ， Ｐ＜０ ０５， Ｐ＜０ ０１ｖｓｃｏｎｔｒｏ
ｌ
Ｆｉｇ５ ＥｆｆｅｃｔｏｆＦＫＢＰ３８ｏｎｄｅｃｒｅａｓｅｄｖｉａｂｉｌｉｔｙ
ｏｆＰＤｃｅｌｌｓ（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
Ａ：Ｅｆｆｅｃｔｏｆｓｈ ＦＫＢＰ３８ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＰＤｃｅｌｌｓ；Ｂ：ＥｆｆｅｃｔｏｆＦＫＢＰ３８ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＰＤｃｅｌｌｓ． Ｐ＜０ ０１ｖｓｃｏｎｔｒｏｌ；＃＃Ｐ＜０ ０１ｖｓＭｏｄｅｌ
Ｆｉｇ６ ＥｆｆｅｃｔｏｆＦＫＢＰ３８ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＢｃｌ ２，ＢａｘｐｒｏｔｅｉｎｉｎＰＤｃｅｌｌｓ（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）Ａ：Ｗｅｓｔｅ
ｒｎｂｌｏｔａｎａｌｙｓｉｓｏｆＢｃｌ ２ａｎｄＢａｘｐｒｏｔｅｉｎｓ；Ｂ：ＥｆｆｅｃｔｏｆｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＦＫＢＰ３８ｏｎｔｈｅｒａｔｉｏｏｆＢｃｌ ２／ＢａｘｐｒｏｔｅｉｎｉｎＰＤｃｅｌｌｓ；Ｃ：ＥｆｆｅｃｔｏｆｋｎｏｃｋｄｏｗｎｏｆＦＫＢＰ３８ｏｎＢｃｌ ２／ＢａｘｐｒｏｔｅｉｎｒａｔｉｏｉｎＰＤｃｅｌｌｓ． Ｐ＜０ ０５， Ｐ＜０ ０１ｖｓｃｏｎｔｒｏｌ；＃＃Ｐ＜０ ０１ｖｓｃｏｎｔｒｏｌ
Ｂｃｌ ２／Ｂａｘ比值上升（Ｐ＜０ ０１），说明过表达ＦＫ
ＢＰ３８可以明显改善鱼藤酮引起的多巴胺能神经元
凋亡。与ｓｈ ＮＣ组模型组相比，ｓｈ ＦＫＢＰ３８组模型
组的Ｂｃｌ ２和Ｂａｘ的表达量均无明显差异，表明敲
减ＦＫＢＰ３８无明显加剧鱼藤酮引起的多巴胺能神经
元凋亡。
３ 讨论
帕金森病是一种进展非常缓慢的疾病，发病因
素复杂，且不同患者病情轻重也存在很大的差
异［１３］。多巴胺是一种神经递质，将信息从一个神经
细胞传至另一个神经细胞，保证神经的传导性，由多
巴胺能神经元合成并储存在囊泡中，而后通过胞裂
外排的方式由神经元释放，多巴胺能神经元的病变
会导致帕金森病。这也是临床上导致ＰＤ的主要病
理特征，减少神经元凋亡对缓解ＰＤ进程有重要作立冬是什么意思
用［１４］。目前，关于帕金森病治疗手段只能延缓但无
法阻止疾病的进展［１５］。基因治疗是帕金森病治疗
的新兴领域，由于其发病机制复杂，其中线粒体功能
阴历七月十五障碍在帕金森病发生中具有重要作用［１６－１７］。因此
以线粒体相关基因为靶点寻找新的治疗方法具有重
要意义。同时，应深入研究线粒体功能障碍分子机
制，明确线粒体相关基因对帕金森病的影响。
为研究ＦＫＢＰ３８对神经毒素诱导的帕金森病的
影响，本课题组检测在ＰＤ体内外模型中ＦＫＢＰ３８表
达水平，实验结果发现，在ＰＤ体内模型中，与正常
组相比模型组小鼠脑纹状体区域中ＦＫＢＰ３８表达水
平明显降低。同样，在ＰＤ细胞模型中，与正常组相
比ＦＫＢＰ３８表达水平明显特异性降低。猜测高表达
ＦＫＢＰ３８可能会延缓多巴胺神经元凋亡从而缓解ＰＤ
进程。为进一步探究ＦＫＢＰ３８对帕金森病的影响，
我们在体外实验中通过使用ＦＫＢＰ３８慢病毒转染
ＭＮ９Ｄ细胞来检测其表型变化。实验结果显示，鱼
藤酮可明显降低ＭＮ９Ｄ细胞活力，并通过降低Ｂｃｌ ２
的表达量引起ＭＮ９Ｄ细胞凋亡。而过表达ＦＫＢＰ３８
后能明显改善鱼藤酮引起的细胞活力下降，表明过
表达ＦＫＢＰ３８可明显提高ＰＤ细胞活力。过表达
ＦＫＢＰ３８后，抗凋亡蛋白Ｂｃｌ ２的表达量明显升高，
Ｂｃｌ ２／Ｂａｘ比值明显升高，表明过表达ＦＫＢＰ３８改善
