适逢的意思急性白血病外周血T细胞CD28和CD137的表达从一到无穷大读后感
【关键词】 ，CD28
Expression of CD28 and CD137 in peripheral blood T cells in acute leukemia
【Abstract】 AIM: To study the expression characteristics of costimulatory molecules CD28 and CD137 (41BB) in peripheral blood T cells in human leukemia before and after the chemotherapy and to explore their significance in antileukemia immunity. METHODS: The expression of costimulatory molecules CD28 and CD137 in T cells was measured in 38 patients with acute leukemia (AL) before and after chemotherapy by immunofluorescence and FACS. The peripheral blood T lymphocyte subts were also analyzed. RESULTS: ① The level of CD28， CD3， CD4 and CD4/CD8 in AL patients before chemotherapy was lower but CD137 was higher than tho in control markedly (P<0.05). ② The level of CD28， CD3， CD4 and CD4/CD8 incread in complete remission (CR) and partial remission (PR) patients after chemotherapy but CD137 decread distinctly compared with that before chemotherapy (P<0.05). The level in CR patients was clo to that in the control.
No significant change was found in nonremission (NR) patients (P>0.05). CONCLUSION: CD28 and CD137 are important costimulatory molecules during the pathogenesis of AL and antileukemia immunity. Their abnormal level may partly be responsible for AL and be cloly related with the clinical curative effects. It may be an important means to treat human leukemia immunogenetically by regulating the expression of CD28 and CD137 in T cells and by correcting the immunodeficiency of AL patients.
【Keywords】 CD28; CD137; T lymphocyte; acute leukemia
【摘要】 目的：研究共刺激分子CD28和CD137（41BB）在人急性白血病（AL）治疗前后外周血T细胞上的表达特点，探讨其与临床疗效的关系. 方法：应用免疫荧光标记及流式细胞术（FACS）检测了38例AL患者治疗前后外周血T细胞表面共刺激分子CD28和CD137的表达，并分析了T淋巴细胞亚群变化情况. 结果：①治疗前AL患者CD28， CD3， CD4， CD4/CD8较对照组显著降低，而CD137显著增高（P<0.05）；②治疗后完全缓解（CR）和部分缓解（PR）患者CD28， CD3， CD4， CD4/CD8均较其治疗前显著增高，而CD137显著降低（P<0.05），CR患者接近对照者，而未缓解（NR）患者以上指标无显著
变化（P>0.05）. 结论：CD28和CD137是参与急性白血病发病和抗白血病免疫反应的重要共刺激分子，其表达异常可能是急性白血病发病机制之一且与临床疗效密切相关；调节T细胞上CD28和CD137的表达，纠正白血病患者细胞免疫功能缺陷，可能是免疫基因治疗人类急性白血病的重要手段之一，具有一定的临床应用价值.
【关键词】 CD28；CD137；T淋巴细胞；急性白血病
0引言
CD28和CD137（41BB）是迄今发现的T细胞上两种最重要的共刺激分子，它们分别与抗原递呈细胞（APC）上的B71（CD80）和CD137L结合，协同MHCAg信号，提高肿瘤细胞免疫原性，后者包括促进T细胞增殖，分泌细胞因子及增强细胞毒活性（CTL）［1-4］. 这种共刺激分子介导的协同刺激通路虽然是非特异性的，但在抗肿瘤免疫反应中不可缺少［5-7］. 目前对CD137的研究多为小鼠，鲜见人类血液肿瘤共刺激分子的研究报道. 我们检测了急性白血病（AL）患者常规化疗前后外周血T细胞表面CD28和CD137的表达，并分析了T淋巴细胞亚群变化情况，旨在探讨其与临床疗效的关系.
1对象和方法
1.1对象200201／200302住西安交通大学第二医院AL患者（初治或复治）38（男20，女18）例，中位年龄35（21～44）岁，均经临床表现、骨髓及外周血细胞形态和细胞化学染色确诊. 其中，CR（完全缓解）10例，PR（部分缓解）13例，NR（未缓解）15例. 急性非淋巴细胞白血病（ANLL）26（男14，女12）例，中位年龄36岁. 急性淋巴细胞白血病（ALL）12（男6，女6）例，中位年龄33岁. 均经常规联合化疗，疗效标准依据
参考文献
尺短寸长［8］. 正常对照者（均为献血者）25（男14，女11）例，中位年龄32（23～42）岁. 经检验，正常对照组在年龄、性别构成上与各白血病组无显著差异. 小鼠抗人CD137 mAb，FITC标记绵羊抗小鼠Ig，FITC标记小鼠抗人CD28 mAb及FITC标记CD3，CD4，CD8 mAb均为Pharmingen公司产品. 流式细胞仪为BD公司产品.
1.2方法取肝素抗凝的AL患者或对照者外周血5 mL，采用FicollHypaque密度梯度离心法分离单个核细胞，再经尼龙棉柱过滤法纯化T细胞，调整细胞密度为1×1010・L-1. 取含1×106细胞的待检标本100 μL放入试管中，加10 μL FITC标记小鼠抗人CD28 mAb，室温孵育30 min，PBS洗涤3次，用FACS检测T细胞上CD28表达. 另外，取含1×106细胞的待
检标本100 μL放入试管中，加入10 μL 1∶10稀释的小鼠抗人CD137 mAb（0.5 g・L-1），室温孵育30 min，PBS洗涤3次，再加入100 μL 1∶50稀释的FITC标记绵羊抗小鼠Ig，作用30 min后PBS洗涤3次，用FACS检测T细胞上CD137表达. FACS分析T淋巴细胞亚群：取以上细胞悬液100 μL分别加入FITC标记CD3，CD4，CD8 mAb 10 μL进行标记，室温孵育30 min，PBS洗涤3次，用FACS检测.
统计学处理：数据均用x±s表示，采用SPSS 11.0软件，组间比较采用t检验或t′检验，同一病例治疗前后比较采用配对资料t检验
富士相机.
2结果
2.1AL患者治疗前CD28，CD137表达及T淋巴细胞亚群AL组CD28，CD3，CD4，CD4/CD8均较对照组显著降低，而CD137显著增高（P<0.05，Tab 1）.
2.2AL患者临床疗效与CD28，CD137表达及T淋巴细胞亚群治疗后CR组、PR组CD28，CD3，CD4，CD4/CD8较其治疗前显著增高而CD137显著降低（P<0.05），CR组接近对
照组，而NR组较其治疗前几无变化（P>0.05，Tab 1）.
积毁销骨 表1AL患者临床疗效与治疗前后CD28，CD137表达及T淋巴细胞亚群 (略)
3讨论
肿瘤细胞不能激发有显著意义的，由T细胞介导的特异性抗瘤反应即逃避宿主免疫监视的重要原因在于：①缺乏强免疫原性的特异性肿瘤抗原；②MHC分子表达不足或缺陷；③共刺激分子表达不足或缺陷；④T细胞免疫功能低下或缺陷；⑤其他因素（如细胞因子水平异常、异常抑制物等）［9］. 近年来，共刺激分子的抗瘤作用引起了众多学者的广泛重视. 研究表明，CD28与B71和CD137（41BB）与CD137L是两对最重要的共刺激分子，前者表达于静止T细胞，优先诱导CD4+T细胞活性，而后者表达于活化T细胞，优先诱导CD8+T细胞活性，可见它们在介导免疫反应的过程中，相互调节，发挥互补作用［10-12］. 但国内外对其研究均限于动物，鲜见人类肿瘤的相关报道. 另外，T淋巴细胞亚群的平衡和稳定是维持机体正常免疫状态的重要因素，在T细胞介导的抗肿瘤免疫反应中具有重要作用.
我们研究了38例AL患者治疗前后外周血T细胞表面CD28和CD137的表达及T淋巴细胞亚
群变化情况，发现AL患者治疗前均存在T细胞免疫功能缺陷（CD3， CD4， CD4/CD8较正常对照组显著降低）和共刺激分子表达异常（CD28显著降低而CD137明显升高），这可能是AL的发病机制之一. 此外，治疗有效病例（包括CR和PR）共刺激通路及细胞免疫功能均有显著改善，甚至CR患者可以接近正常，提示恶性肿瘤发生和进展时，患者的细胞免疫功能受到抑制，出现T细胞亚群失衡，而当疾病好转时，亦出现T细胞亚群的改善，所以它是标志机体细胞免疫状态的重要指标. 其意义在于：①AL患者T细胞上共刺激分子CD28和CD137功能的完善是保证良好疗效（如化疗或其他治疗包括免疫治疗）的重要因素，调节T细胞上共刺激分子的表达是免疫基因治疗人类急性白血病的重要策略之一；②某些AL患者的免疫缺陷是可逆的，通过免疫调节治疗可以纠正T细胞无能，平衡T细胞亚群，增进治疗效果，具有一定的临床应用价值.
参考文献
［1］ MartinFontecha A， Moro M， Crosti MC， Veglia F， Casorati G， Dellabona P. Vaccination with mou mammary adenocarcinoma cells coexpressing B71(CD80) and B
72(CD86) disclos the dominant effect of B71 in the induction of antitumor immunity ［J］. J Immunol， 2000;164(2):698-704.
大树小树
［2］ Lang S， Atarashi Y， Nishioka Y， Stanson J， Meidenbauer N， Whiteside TL. B7.1 on human carcinomas: Costimulation of T cells and enhanced tumorinduced Tcell death ［J］. Cell Immunol， 2000;201(2):132-143.
［3］ Taraban VY， Rowley TF， O’Brien L， Chan HT， Haswell LE ，Green MH， Tutt AL，Glennie MJ， ALShamkhani A. Expression and costimulatory effects of the TNF receptor superfamily members CD134(OX40) and CD137(41BB)， and their role in the generation of antitumor immune respons［J］. Eur J Immunol， 2002;32 (12):3617-3627.
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