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ｓｌｌｓ《《我和我的故乡
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第四军医大学博士学位论文
大鼠三叉神经脊束问质核内ｃａｌｂｉｎｄｉｎＤ．２８ｋ神经元接受口面部躯体和内脏伤害性传入信息
汇聚和投射的研究
博士研究生导师马文领河南一本分数线
张丈斌教授非诚勿扰台词
中文摘要
三叉神经脊束间质核（ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｎｕｃｌｅｕｓｏｆｔｈｅｓｐｉｎａｌｔｒｉｇｅｍｉｎａｌｔｒａｃｔ，ＩＮＶ）是位于三叉神经脊束（ｓｐｉｎａｌｔｒｉｇｅｍｉｎａｌｔｒ
斗罗大陆拼音ａｃｔ，ＳＶＴ）背侧的数个灰质团块，主要由背侧边缘旁核（ｄｏｒｓａｌｐａｒａｍａｒｇｉｎａｌｎｕｃｌｅｕｓ，ＰａＭｄ）和三叉旁核（ｐａｒａｔｒｉｇｅｍｉｎａｌｎｕｃｌｅｕｓ，ＰａＶ）组成。ＩＮＶ经三叉神经（Ｖ）的一些分支及舌咽神经（Ⅸ）和迷走神经（Ｘ）接受口面部躯体和内脏神经的初级传入，在外周伤害性信息的汇聚和传递以及对内脏和心血管活动的调制等方面均具有重要作用。
ＩＮＶ内存在多种与伤害性信息传导和调控相关的神经活性物质，如谷氨酸（ｇｌｕｔａｍａｔｅ，Ｇｌｕ）、ＥＮＫ、ＳＰ和ＣＧＲＰ等。ＣａｌｂｉｎｄｉｎＤ一２８ｋ（ＣＢ）是钙结合蛋白家族的重要成员之一，可高亲和力地结合细胞去极化时进入细胞内的Ｃａ２＋，防止因伤害性刺激过度传入引起的神经元高频放电所致的损伤，并可防止钙依赖性钾外流而使膜产生的超级化，缩短不应期，加快神经信息的传递。近年来对ＣＢ在中枢神经系统的分布和功能方面进行了大量的研究，结果表明ＣＢ在脑干和脊髓内多存在于与感觉信息特别是伤害性信息传递相关
第四军医大学博士学住论文
的核团，如在脊髓背角ＣＢ与Ｇｌｕ共存于Ｉ层长轴突神经元内，并投射到孤束核（ｎｕｃｌｅｕｓｏｆｌｈｅｓｏｌｉｔａｒｙｔｒａｃｔ，ＮＴＳ）；延髓背角浅层含ＣＢ的神经元可接受躯体的伤害性信息并投射到臂旁核（ＰＢＮ）：ＮＴＳ内接受内脏伤害性信息的ＣＢ神经元投射到终纹床核等，
提示脊髓和延髓内含ＣＢ的神经元可能参与伤害性信息在中枢内传递的过程。ＩＮＶ内分布有大量含ＣＢ的神经元，其中大部分投射到ＮＴＳ和ＰＢＮ，但这些含ＣＢ的投射神经元是否直接接受口面部躯体和内脏伤害性信息：是否与兴奋性递质Ｇｌｕ共存并受抑制性递质的调控：口面部躯体传入与内脏伤害性传入信息能否汇聚于含ＣＢ的投射神经元，特别是口面部躯体传入纤维终末是否与含ＣＢ的神经元形成直接的突触连接等，均是值得深入探讨的问题。
基于上述问题，本课题综合应用逆行和跨神经节追踪结合免疫组织化学的光镜、激光扫描共聚焦显微镜以及免疫电镜等技术，对其进行了较系统的研究。
应用ＦＧ逆行柬路追踪结合ＣＢ和Ｆｏｓ标记法，将荧光金（ＦＧ）注射到一侧ＮＴＳ后，观察到同侧ＩＮＶ内大部分（约７４．４％）投射到ＮＴＳ的ＦＧ逆标细胞同时呈ＣＢ免疫反应阳性。在投射到ＮＴＳ的ＣＢ神经元中，又有４１．０％和４７．４％以及３２．５％的神经元分别接受头面部浅层和深层结构的躯体伤害性信息以及内脏伤害性信息。荧光金注射到一侧ＰＢＮ后，ＩＮＶ投射到同侧ＰＢＮ的多数ＦＧ逆标细胞（７７．３％）呈ＣＢ免疫反应阳性；在投射到ＰＢＮ的含ＣＢ神经元中，又有３８．５％和５２．０％分别接受口面部浅层结构和内脏的伤害性传入信息。
磷酸激活的谷氨酰胺酶（ＰＡＧ）是合成Ｇｌｕ的关键酶，是Ｇｌｕ能神经元的特异标识物。应用ＦＧ逆行束路追踪结合ＰＡＧ和ＣＢ或ＰＡＧ和Ｆｏｓ免疫荧光组织化学三重标记法，观察到ＩＮＶ内
约１／４以上的ＣＢ神经元（２６．６％）与ＰＡＧ有共存现象，并且ＣＢ与ＰＡＧ共存的神经元大部分投射到ＮＴＳ或接
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受内脏伤害性信息。应用免疫细化双重标记法，在ＩＮＶ内虽然未见ＧＡＢＡ与ＣＢ共存的神经元，但却观察到７２％，ｎ６３％的ＣＢ和ＰＡＧ免疫反应阳性神经元分别显示ＧＡＢＡＢ受体阳性标记。
跨神经节束路追踪结合免疫组织化学多重标记的激光扫描共聚焦显微镜观察结果显示，１ＮＶ内投射到ＮＴＳ或含ＣＢ的神经元接受内脏伤害性信息，同时与下牙槽神经的初级传入终末之问形成紧密接触。运用跨神经节束路追踪结合免疫电镜法，在超微结构水平观察到下牙槽神经初级传入终末与ＣＢ阳性树突或胞体形成非对称型突触连接。
以上结果提示；１ＮＶ内含ＣＢ的神经元直接接受口面部躯体和内脏伤害性传入信息，并投射到ＮＴＳ和ＰＢＮ；部分含ＣＢ的神经元以Ｇｌｕ为神经递质，构成了ＩＮＶ至ＮＴＳ的兴奋性传导通路，并且可能通过ＧＡＢＡＢ受体受ＧＡＢＡ的抑制性调控；１ＮＶ内含ＣＢ的神经元接受口面部躯体和内脏伤害性信息的汇聚，并参与外周伤害性信息向ＮＴＳ和ＰＢＮ的传递，进而通过ＮＴＳ和ＰＢＮ可能影响躯体一内脏及心血管反射活动。
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ＳｔｕｄｙｏｆｔｈｅＣｏｎｖｅｒｇｅｎｃｅｓａｎｄｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎｓｏｆＣａｌｂｉｎｄｉｎＤ２８ｋ－ＣｏｎｔａｉｎｉｎｇＮｅｕｒｏｎｓＲｅｃｅｉｖｉｎｇＯｒｏｆａｃｉａｌＳｏｍａｔｉｃａｎｄ
ＶｉｓｃｅｒａｌＮｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅＡｆｆｅｒｅｎｔｉｎｔｈｅＩｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ
ＮｕｃｌｅｕｓｏｆｔｈｅＳｐｉｎａｌＴｒｉｇｅｍｉｎａｌＴｒａｃｔｉｎＲａｔ．灵异鬼故事
ＣａｎｄｉｄａｔｅｆｏｒＰＨ．Ｄ．：ＭａＷｅｎ—Ｌｉｎｇ
Ｓｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＺｈａｎｇＷｅｎ—Ｂｉｎｇ
ＡＢＳＴＲＡＣＴ
Ｔｈｅｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｎｕｃｌｅｕｓｏｆｔｈｅｓｐｉｎａｌｔｒｉｇｅｍｉｎａｌ（ＩＮｖ）ｉｓｄｉｆｆｕｓｅｇｒｏｕｐｓｏｆｎｅｕｒｏｎｓａｎｄｎｅｕｒｏｐｉｌｓｌｏｃａｔｅｄｗｉｔｈｉｎｔｈｅｓｐｉｎａｌｔｒｉｇｅｍｉｎａｌｔｒａｃｔａｌｏｎｇｔｈｅｄｏｒｓｏｌａｔｅｒａｌｅｄｇｅｏｆｔｈｅｓｐｉｎａｌｔｒｉｇｅｍｉｎａｌｓｕｂｎｕｃｌｅｕ
ｓｃａｕｄａｌｉｓ（Ｖｃ）ａｎｄｉｎｔｅｒｐｏｌａｒｉｓ（Ｖｉ）．Ｉｔｍａｉｎｌｙｃｏｎｓｉｓｔｓｏｆｔｈｅｄｏｒｓａｌｐａｒａｍａｒｇｉｎａｌｎｕｃｌｅｕｓ（ＰａＭｄ）ａｎｄｔｈｅｐａｒａｔｒｉｇｅｍｉｎａｌｎｕｃｌｅｕｓ（ＰａＶ）ａｎｄｒｅｃｅｉｖｅｓｔｈｅｏｒｏｆａｃｉａｌｓｏｍａｔｉｃａｎｄｖｉｓｃｅｒａｌｐｒｉｍａｒｙｉｎｐｕｔｓｖｉａｂｒａｎｃｈｅｓｏｆｔｈｅｔｒｉｇｅｍｉｎａｌｎｅｒｖｅｓ（Ｖ），ｔｈｅｇｌｏｓｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ（Ⅸ）ａｎｄｖａｇｕｓ（Ｘ）ｎｅｒｖｅｓ．Ｉｔｐｌａｙｓａｎｉｍｐｏｒｃａｍｒｏｌｅｉｎｃｏｎｖｅｒｇｅｎｃｅａｎｄｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｏｒｏｆａｃｉａｌｓｏｍａｔｉｃａｎｄｖｉｓｃｅｒａｌｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ａｓｗｅｌｌａｓｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｖｉｓｃｅｒａｌａｎｄｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．
Ｔｈｅｒｅａｒｅｍａｎｙｋｉｎｄｓｏｆｎｅｕｒｏａｃｔｉｖｅｓｕｂｓｔａｎｃｅｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎａｎｄｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ｓｕｃｈａｓＬ—ＥＮＫ，ｓｕｂｓｔａｎｃｅＰ（ＳＰ），ＣＧＲＰａｎｄＳＯｏｎｉｎＩＮＶ．ＴｈｅｃａｌｂｉｎｄｉｎＤ一２８ｋ（ＣＢ）ｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｍｅｍｂｅｒｏｆｔｈｅｆａｍｉｌｙｏｆｃａｌｃｉｕｍ－ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｓ．ＣＢｍｉｇｈｔｂｕｆｆｅｒｓｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｃａ２＋ｉｎｄｕｃｅｄｂｙＮ
－ｍｅｔｈｙｌ—Ｄ－ａｓｐａａａｔｅ（ＮＭＤＡ）ｒｅｃｅｐｔｏｒａｃｔｉｖｉｔｙ，ａｎｄｔｈｕｓｐｒｅｖｅｎｔｆｒｏｍｅｘｃｉｔｏｔｏｘｉｃｅｆｆｅｃｔｓｏｆｈｉｇｈ—ｆｒｅｑｕｅｎｃｙｄｉｓｃｈａｒｇｅｏｆｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅａｆｆｅｒｅｎｔｆｉｂｅｒｓ．ＣＢｍｉｇｈｔａｌｓｏｒｅｄｕｃｅｔｈｅＣａ２＋－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔＫ＋ｏｕｔｆｌｏｗ，ｄｅｃｒｅａｓｅｔｈｅａｍｐｌｉｔｕｄｅｏｆｔｈｅｈｙｐｅｒｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎａｎｄｉｎｃｒｅａｓｅｔｈｅｄｉｓｃｈａｒｇｅｒａｔｅ，ＳＯｔｈａｔｉｔｓｈｏｒｔｅｎｌｈｅｒｅｆｒａｃｔｏｒｙｐｅｒｉｏｄａｎｄｓｐｅｅｄｕｐｔｈｅｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｏｆｎｅｒｖｅｍｅｓｓａｇｅｓ．Ｉｎｒｅｓｅｎｔｙｅａｒｓ，ｉｔｈａｓｂｅｅｎｓｔｕｄｉｅｄ
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