ｐ１５基因在急性白血病中失活的临床和实验研究
硕士研究生：夏艳秋
指导教师：宋振岚教授
专业名称：内科学（血液病）
摘要
（ｐ１５（ＭｕｌｔｉｐｌｅＴｕｍｏｒＳｕｐｐｒｅｓｓｏｒ２，ＭＴＳ２）基因是１９９４年由Ｋａｍｂ＼
等发现的一个新的抑癌基因．与口１６（ＭｕｌｔｉｐｌｅＴｕｍｏｒＳｕｐｐｒｅｓｓｏｒｌ，ＭＴＳｌ）基因有４４％的同源性。近年来的研究发现ｐ１５是转化生长因子Ｂ（ＴｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ，ＴＧＦ．Ｂ）介导的细胞生长停滞的效应因子。ｐ１５蛋白能抑制ＣＤＫ（ｃｙｃｌｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅ）的活性，阻止细胞进入增殖周期。许多实验显示ｐ１５在白血病中表达失活，进一步研究发现其主要原因在于基因发生了ＣｐＧ岛的异常甲基化，而并非基因的突变或缺失。检测急性白血病中ｐ１５基因的失活及与其相关的ｐ１６等蛋白的异常表达对研究白血病发病机制、评价化疗效果、
、
指导治疗有重要意义斗本研究的目的在于检测急性白血病患者和非白血病患者骨髓细胞中ｐ１５、ｐ１６与ｂｃｌ．２蛋白的表达．比较不同类型急性白血病中其表达水平的差异，观察它们异常表达对急性白血病化疗效果的影响，探讨急性自血病中这三种蛋白的表达是否具有一定的相关性及其对于监测白血病临床疗效和指导治疗方案的意义。ｆ应用甲基化特异性ＰＣＲ（ＭｅｔｈｙｌａｔｉｏｎＳｐｅｃｉｆｉｃＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｆｉｏｈ，ＭＳＰ）方法检测急性白血病ｐ１５基因ＣｐＧ岛甲基化，深入探究ｐ１５基因失活的分子机制，比较ｐ１５基因ＱＩＧ岛甲基化病人与非甲基化病人临床治疗有效率，并对部分病人进行短期随访，从而分析ｐ１５基因ｃｐＧ穿衣风格
岛甲基化在评价急性白血病预后．监测疾病活动性和预测复发中的意义。探讨其作为一种白血病基因标记的可行性，为白血病的去甲基化基因治疗奠定基础。
首先采用免疫组化方法检测急性白血病细胞中ｐ１５、ｐ１６和ｂｃｌ．２蛋白的表达。为便于分析其表达与白血病临床疗效的关系，人为地规定白血病细胞中蛋白阳性率大于或等于１０％为阳性表达，而低于１０％则视为阴性表达。对３３例急性白血病患者的检测结果显示ｐ１５蛋白表达缺失率为７２．７％．ｐ１６蛋白表达缺失率为５４．５％，ｂｃｌ．２蛋白阳性率为５７．６％。非恶性血液疾患病人ｐ１５、ｐ１６蛋白均为阳性表达，而ｂｃＩ－２蛋白则全为阴性表达，差异十分显著。
将２９例可评定疗效的急性白血病患者分为治疗有效组和治疗无效组，结果治疗有效组ｐ１５、ｐ１６蛋白的阳性表达率分别为５４．５％和７２．８％，明显高于治疗无效组：而治疗无效组的ｂｃｌ．２蛋白阳性率为７７．８％，明显高于治疗有效组。ｐ１５、ｐ１６蛋白的表达与ｂｃｌ一２蛋白的表达呈明显负相关。但是这三种蛋白的表达与患者性别、年龄、就诊时外周血白细胞计数、骨髓幼稚细胞百分率之间经多因素方差分析无相关性，与急性白血病类型也无关。
为进一步探讨ｐ１５基因在急性白血病中失活的分子机制，用酚一氯仿方法提取急性白血病细胞的基因组ＤＮＡ，经热变性法获得单链ＤＮＡ后用亚硫酸氢钠（ＮａＨＳ０，）硫化处理，然后采用甲基化特异性ＰＣＲ（ＭＳＰ）方法检测ｐ１５基因ＣｐＧ岛甲基化与非甲基化，琼脂糖凝胶电泳检测ＰＣＲ产物。ｐ１５基因ＣｐＧ岛甲基化阳性者可见到～条１４８ｂｐ的ＰＣＲ产物，而非甲基化者则可见到一条１５４ｂＰ的ＰＣＲ产物。４１例急性自血病患者ＭＳＰ检铡结果：ｐ１５基因ＣｐＧ岛甲基化率为７０．７％，其中急性髓细胞性白血病和急性淋巴细胞性白血病的发生率分别为７７．８％和５７．１％。ｐ１５基因甲基化阳性者其ｐ１５蛋白的表达均为阴性。完全缓解（ＣｏｍｐｌｅｔｅＲｅｍｉｓｓｉｏｎ，ＣＲ）期、初发及复发性急性
白血病患者ｐ１５基因ＣｐＧ岛甲基化率呈逐渐增高趋势。可判定疗效的３６例急性白血病患者中２６例发生ｐ１５基因甲基化者临床治疗有效率为２６．９％，而１０例ｐ１５基因非甲基化者治疗有效率８０％。对９例急性白血病患者进行了短期随访：４例初治，其中２例病人在初治及ＣＲ时均为
减脂餐食谱做法大全ｐ１５基因甲基化阳性，２人分别在缓解后３月、５月时复发，
张晓一
复发时ｐ１５基因甲基化继续阳性；ｌ例初治时阳性的病人在达到ＣＲ时甲基化转为阴性。至今己缓解８个半月；另一例病人ｐ１５基因始终呈正常状态，已存括１年。５例病人是从ＣＲ期开始的随访，３例ＣＲ时甲基化阴性的病人中有２人在复发后转为阳性．另１人多次检测ｐ１５基因均正常，已持续缓解１年２个月；２例ＣＲ时己发生ｐ１５基因甲基化者，１人曾出现骨髓复发倾向，经联合化疗后ｐ１５基因转为正常。未发生临床复发；另１人ｃＲ２月后临床复发．复发时甲基化呈阳性≯通过以上实验，对急性白血病患者ｐ１５、ｐ１６和ｂｃｌ－２蛋白的表达进行了检测．结果发现急性白血病ｐ１５、ｐ１６蛋白有较高的失活率，
最好听的男孩小名而ｂｅｌ．２蛋白则为高表达。临床观察显示三种蛋白异常表达者临床治疗效果差，这提示研究这三种蛋自在急性白血病中的异常表达及其对化疗的影响对于评价白血病临床疗效和指导治疗有重要意义。在此基础上，进一步研究了ｐ１５基因失活的主要分子机制：即ｐ１５基因５’
端ｃｐＧ岛异常甲基化。结果急性白血病中ｐ１５基因确有较高的甲基化率，与文献报道较一致。／发生甲基化者对化疗反应差，缓解率降低。急性白血病ｐ１５基因呈阶段性变化，持续甲基化者预后差、易复发，
ＣＲ期阳性可能预示复发。非恶性血液疾患病人骨髓细胞及正常血细胞的ｐ１５基因均为非甲基化．
提示ｐ１５基因ＣｐＧ岛异常甲基化为白血病肿瘤细胞所特有，可以用来作为一种自血病基因标记，用于监测发生该基因甲基化病例在化疗过程中疾病的活动性，并为及时识别和处理早期复发病例提供条件。ｐ１５基因ＣｐＧ岛异常甲基化的发现为去
甲基化基因治疗奠定了基础，
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乔丹投篮的希望。
∥
将为难治、复发性白血病的治疗带来新
关键词急性白血病ｐ１５ｐ１６
聚合酶链反应Ｖ化疗
４
ｂｃｌ．２ＤＮＡ甲基化。预后
ＣｌｉｎｉｃａｎｄＬａｂｏｒａｔｏｒｙＳｔｕｄｙｏｎｐ１５ＧｅｎｅｉｎＡｃｕｔｅＬｅｕｋ
ｅｍｉａ
Ｐｏｓｔｇｒａｄｕａｔｅ：Ｓｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：
游戏节目Ｓｐｅｃｉａｌｉｔｙ：ＸｉａＹａｎｑｉｕ
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Ｐ１５ｇｅｎｅｉｓｒｅｇａｒｄｅｄａｓａｔｕｍｏｒｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｇｅｎｅｆｏｕｎｄｂｙＫａｍｂｉｎ１９９４．Ｉｔｈａｓ“％ｈｏｍｏｇｅｎｅｉｔｙｗｉｔｈｐ１６ｇｅｎｅ．Ｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ．ｔｈｅｓｔｕｄｙｈａｓｓｈｏｗｅｄｐｔ５ｇｅｎｅｉｓａｌｌｅｆｆｅｃｔｏｒｏｆｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－１３ｗｈｉｃｈｃａｎｉｎｈｉｂｉｔｃｅｌｌｓｇｒｏｗｉｎｇｉｎｔｏｃｅｌｌｃｙｃｌｅ．Ｍａｎｙｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｓｈｏｗｐ１５ｇｅｎｅｉｓｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄｉｎａｃｕｔｅｌｅｕｋｅｍｉａ，ａｎｄｔｈｅｍａｉｎｍｅｃｈａｎｉｓｍｉｓｎｏｔｇｅｎｅｄｅｌｅｔｉｏｎｏｒｍｕｔａｔｉｏｎｂｕｔａｂｎｏｒｍａｌｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｏｆＣｐＧｉｓｌａｎｄ．Ｉｔｉｓｖｅｒｙｉｍｐｏｒｔａｎｔｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｐｌ５ａｎｄａｂｎｏｒｍ
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