中国预防兽医学报Chine Journal of Preventive Veterinary Medicine
第42卷第10期
2020年10月
Vbl.42No.10Oct. 2020
doi : 10.3969/j .issn. 1008-0589.201912004
基于Glue 的马源NLRP3炎症小体激活系统的建立
王 岩土，刘 聪上，那 雷，王雪峰，林跃智王晓钧*
爸爸歌曲*收稿日期：2019-12-05
基金项目：国家自然科学基金面上项目(31672533)；黑龙江省自然科学基金面上项目(C2016064、C2017077, C2017076)
1•共同第一作者：王 岩(1996-)，女，河南开封人，硕士研究生，主要从事动物疫苗与分子免疫学研究；
刘聪(1994-)，男，湖北仙桃人，硕士研究生，主要从事动物疫苗与分子免疫学研究.
* 通信作者： E-mail : *****************; *******************
(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/马传染病和慢病毒病研究创新团队，黑龙江哈尔滨150069)
摘 要：为建立一种快速、敏感的马源NLRP3炎症小体的体外激活检测系统，本研究利用PCR 扩增马IL-1P
(eqIL-l|3)，马 Caspa-l(eqCaspa-l)、马 ASC(eqASC)和马 NLRP3(eqNLRP3)，构建重组真核表达质粒pCAGGS-
eqlL-ip-flag 、pCAGGS-eqlL-113-GLuc-flag 、pCAGGS-eqCaspa-1-HA 、pcDNA3.1-eqASC- HA 和 pcDNA3.1-
eqNLRP3-HA，分别转染H E K 293T 细胞，培养24h 后采用western blot 方法检测细胞中各蛋白的表达，结果显示各重
组质粒均构建正确，且均在HEK 293T 细胞中正确表达；通过质粒共转染HEK 293T 细胞依次对NLR
P3炎症小体复合 物中不同组分进行剂量依赖性试验，培养24 h 后采用western blot 检测细胞中切割的eqIL-ip 蛋白，利用荧光素酶底
物检测细胞上清中的荧光强度，结果显示NLRP3炎症小体体外激活系统中各质粒的最适转染剂量分别为pCAGGS-
eqlL- ip- GLuc- flag 250 ng 、pCAGGS- eqCaspa- 1- HA 3.12 ng 、pcDNA3.1- eqASC- HA 3.12 ng 和 pcDNA3.1-
eqNLRP3-HA 6.25 ng；通过在该系统中加入不同剂量的NLRP3炎症小体激活剂(Nigericin)，检测该系统有效性，结 果显示细胞中切割的IL-1P 蛋白水平以及上清中的荧光强度与Nigericin 存在剂量依赖性，表明基于Glue 的马源
NLRP3炎症小体体外激活系统正确构建，且其能对马源NLRP3炎症小体激活的相关蛋白和药物进行筛选。本研究建 立的马源NLRP3炎症小体的体外激活检测系统为马属动物炎症及炎症小体调控方面的研究提供重要的工具。
关键词：NLRP3炎症小体；IL-ip ； Glue
中图分类号：S852.4 文献标识码：A 文章编号：1008-0589(2020) 10-1039-06
Construction of NLRP3 inflammasome activation system using GLuc
WANG Yan ； LIU Cong ； NA Lei, WANG Xue-feng, LIN Yue-zhi ； WANG Xiao-jun *
(State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology, Harbin Veterinary Rearch Institute, Chine Academy of Agricultural Sciences,
Harbin 150069, China)
Abstract: In order to develop a nsitive method for detecting the activation of equine NLRP3 inflammasome, the coding
quences of eqIL-ip, eqCaspa 1, eqASC, and eqNLRP3 was amplified by PCR, respectively. Recombinant eukaryotic expression plasmids: pCAGGS- eqlL- lp- flag, pCAGGS- eqlL- 1 p- GLuc- flag, pCAGGS- eqCaspa- 1- HA, pcDNA3.1- eqASC- HA and
pcDNA3.1-eqNLRP3-HA were constructed and transfected into HEK 293T cells, respectively. The resulting recombinant proteins
were analyzed by western blot. The results showed that recombinant plasmids were constructed and expresd in HEK 293T cells
successfully. The NLRP3 inflammasome components were co-expresd successively in do-dependent manner, the cleavage of
eqlL- lp in cells and the fluorescence value in supernatant were detected by using western blot and lucifera substrate test
respectively. The results showed that the optimal dos of plasmids in the NLRP3 activation system were 250 ng, 3.12 ng, 3.12 ng,
♦Corresponding author; f Equal contributors
1040中国预防兽医学报2020年
and6.25ng for pCAGGS-eqIL-1P-GLuc-flag,pCAGGS-eqCaspa-1-HA,pcDNA3.1-eqASC-HA,and pcDNA3,1-eqNLRP3-HA, respectively.The NLRP3activator,Nigericin,was added in the activation system in increasing does to test its validity.After stimulating with Nigericin,there were a do-dependent fluorescence in the supernatant and the cleaved eqlL-1卩protein in the cells,which indicated that the NLRP3inflammasome activation system bad on Glue was successfully constructed.This activation system can be ud to screen the proteins or drugs which activate the N
LRP3inflammasome,and also provide an effective method for the study of equine inflammatory dia or inflammation regulation.
Key words：NLRP3inflammasome;IL-ip；Glue
NLRP3炎症小体是一种由NLRP3蛋白(NOD-, LRR-and pyrin domain-containing protein3)、凋亡相关斑点样蛋白(Apoptosis-associated speck-like protein,ASC)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶pro-caspa-1组成的大分子多蛋白复合物，可识别多种病原相关分子模式和宿主来源的危险信号，如细菌的穿孔素、肽聚糖、病毒的dsRNA、DNA、脂蛋白、ATP和尿酸等「日。当机体受到刺激时，NL-RP3与接头蛋白ASC结合，招募并切割pro-caspa-1形成具有活性的caspa-1(p20和plO两个亚单位)。活化的p20进一步切割pro-IL-ip和pro-IL-18产生成熟的IL-lp(pl7)和IL-18，分泌到细胞外引起炎症反应冲(图1)。
图1NLRP3炎症小体的结构及组装
Fig.1The structure and formation of NLRP3inflammasome
NLRP3炎症小体在参与炎症及天然免疫调节中发挥重要作用。目前已有多项研究发现NLRP3炎症小体在病毒复制调控及疾病进程中起重要作用，特异性NLRP3体外重建系统是开展炎症调控机制研究的前
提网。目前已有鼠源和猪源NLRP3炎症小体体外筛选系统的相关报道然而由于该系统中的组成分子具有较为严格的种属特异性，无法开展马源NLRP3炎症小体的研究。因此，建立马属动物NL-RP3炎症小体的激活系统是研究马属动物炎症调控反应的关键。本研究拟参考鼠源NLRP3炎症小体激活系统的构成，并引入Gaussia萤光素酶(Gaussia lucifera,Glue)作为激活指示信号叫通过将GLuc前端的分泌信号肽去掉后连接到pro-IL-13的竣基端，构建重组表达质粒，与炎症小体组分中相应的表达质粒(ASC、NLRP3和caspa-1)依次共转染HEK293T细胞；通过检测细胞上清中的荧光信号和细胞内P17蛋白的表达，确定不导致pro-IL-lp切割的NLRP3复合体中相应组分的最适剂量，从而建立特异性马源NLRP3炎症小体激活系统，并且实现细胞内IL-10的切割活性和细胞上清中成熟IL-邛的平行检测，为马属动物NLRP3炎症小体的调控研究提供技术手段。
1材料与方法
1.1主要实验材料pcDNA3.1-HA、pCAGGS质粒和人胚胎肾细胞HEK293T细胞由本实验室保存；
1.2主要试剂TRIzopM试剂、限制性核酸内切酶购自Thermo Fisher Scientific公司；反转录试剂盒购自TaKaRa公司；KOD高保真酶购自TOYOBO公司；同源重组酶Seamless Asmbly Cloning购自Clone
Smarter公司；胶回收试剂盒、DNA小提试剂盒购自Omega公司；DNA转染试剂PolyJet™购自SignaGen Laboratories公司;5x p assive lysis buffer购自Promega 公司；鼠源抗Flag标签抗体、鼠源抗HA标签抗体、红外荧光标记的羊抗鼠IgG(IgG-Dylight800)、GLuc底物Coelenterazine(native)购自Sigma公司；Ni-gericin购自APExBIO公司。
1.3重组质粒的构建根据GenBank中eqIL-10基因序列(D42147.1)、eqCaspa-1基因序列(NM_ 001081842)、eqASC基因序列(XM_001500509.4)、eqNLRP3基因序列(XM_005598741.3))，设计特异性
第10期王岩，等.基于Glue的马源NLRP3炎症小体激活系统的建立1041
引物（表1）。采用TRIzol试剂提取马组织的总
RNA，经反转录制备eDNA，以eDNA为模板，利用
引物IL-ip-Fl/IL-ip-Rl，扩增eqIL-10目的基因。
以此PCR产物为模板，利用引物IL-1P-F2/IL-1P-
R2扩增eqlL-1pflag基因，经Nel和M。I双酶切后
克隆到pCAGGS载体中，构建重组质粒pCAGGS-eq-
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IL-l|3-flag o以真核表达质粒pCAGGS-eqIL-lp-flag
为模板，利用引物pCAGGS-IL-ip-F/pCAGGS-IL-
1P-R扩增线性pCAGGS-eqIL-10-flag载体；以pMCS-
Gaussia Luc质粒为模板，利用特异性引物GLuc-F/
GLuc-R，扩增线性目的基因Gluc（Gau55ia Luc），利用
同源重组方法将目的基因Glue克隆到pCAGGS-eqlL-
ip-flag载体中，构建重组质粒pCAGGS-eqIL-ip-
GLuc-flag o以pCAGGS载体为模板，利用引物casp-
pC A GGS-F/casp-pCAGGS-R扩增线性pCAGGS载体；
以上述马组织的cDNA为模板，利用引物Casp-l-F/
Casp-1-R扩增线性目的基因eqCaspa-1。利用同源
重组方法将目的基因eqCaspa-1克隆到pCAGGS载体
中，构建重组质粒pCAGGS-eqCaspa-1-HA。以上述
马组织的cDNA为模板，利用引物ASC-F/ASC-R扩增
eqASC目的基因，经Hind III和Not I双酶切后克隆到
pcDNA3.1-HA载体中，构建pcDNA3.1-eqASC-HA质
粒。以上述马组织的cDNA为模板，利用引物NLRP3-
F/NLRP3-R扩增eqNLRP3目的基因，通过Hind III和
No门双酶切后克隆于pcDNA3.1-HA载体中，构建
pcDNA3.1-eqNLRP3-HA质粒。
表1用于相关重组质粒构建所需引物
Table1Primers ud for the construction of recombinant plasmids
Primer name Primer quences(51—3')
IL-lp-Fl ATGGCAGGTACCCGACACCAGT
IL-ip-Rl TTAGGCAGAGGTGATTTCCATGATGAAG
IL-1P-F2CGGCGGCCGATGGCAGCAGTACCCGACACCAGTGACAGT河南旅游攻略
IL-1P-R2TAACTCGAGTrACTTGTCATCGTCATCCTrGTAGTCTCCGCTGGC
GLuc-F TGCCGGATCCACTAGTGGCGAGGCCAAGCCCACCGAGAA
GLuc-R GTAGTCTCCGCTAGCTGCGTCACCACCGGCCCCCTTGAT
pCAGGS-IL-
1P-F pCAGGS-IL-
1P-R Casp-l-F Casp—1—R AAGGGGGCCGGTGGTGACGCAGCTAGCGGAGACTAC
TTGGCCTCGCCACTAGTGGATCCGGCAGAGGTGATTr
AAAGAATTGTGCGGCCGCATGGCCGACAAGGTGCTG GGGCACGTCGTAGGGGTAATGGCCGGGGAACAGGTA
casp-pCAGGS-F CATTACCCCTACGACGTGCCCGATTACGCCTA
casp-pCAGGS-RCACCTrGTCGGCCATGCGGCCGCACAATrCTTTG
ASC-F TATAAGCTTATGGGGCGCACGCGCGACGCCAT
ASC-R TATGCGGCCGCGCTCTGCTCCAGGTCAGCCA
NLRP3-F CCAAGCTTATGGCAAGCGTCGGCTGCAAG
NLRP3-R ATTTGCGGCCGCCCACGAGGGCTCGAA
1.4Western blot检测各蛋白在HEK293T细胞中的表达将HEK293T细胞以每孔4xl05个细胞均匀铺于12孔板中，待细胞生长至80%时利用PolyJet转染试剂分别转染500ng pCAGGS-eqIL-ip-flag.500ng pCAGGS-eqIL-1p-GLuc-flag500ng pCAGGS-eqcas-pa-l-HA、500ng pcDNA3.1-eqASC-HA>500ng pcDNA3.1-eqNLRP3-HA质粒。37弋培养24h后弃去培养液，加入裂解液裂解细胞，离心去除细胞碎片并收集细胞裂解液上清，经SDS-PAGE凝胶电泳后，用半干转膜仪将蛋白样转印至PVDF膜，5%脱脂乳封闭2h，分别用鼠源抗Flag抗体（1：5000）和鼠源抗HA抗体（1：5000）作为一抗，用红外荧光标记的羊抗鼠IgG（l：10000）作为二抗，利用激光扫描成像系统Odysy扫描，检测各目的蛋白的表达。
1.5激活系统的构建参照1.4中转染方法将250ng pCAGGS-eqlL-1B-GLuc-flag质粒分别与不同剂量（0、1.56ng、3.12ng、6.25ng、1
2.5ng、25ng、50ng 和100ng）的pCAGGS-eqCaspa-1-HA质粒共转染HEK293T细胞，20h后收集
25上清与GLuc底物Coelenterazine（native）混合后利用微孔板化学发光检测仪检测荧光强度，同时裂解细胞，按1.4中western blot方法检测细胞中切割的IL-1R蛋白，确定上清中荧光强度较低且不能导致细胞中IL-10蛋白切割的pCAGGS-eqCaspa-1-HA质粒的最适转染剂量；在此基础上，再将250ng pCAGGS-eqIL-ip-GLuc-flag、pCAGGS-eqCaspa-1-HA（确定的最适剂量）质粒与不同剂量的P cDNA
庆元旦绘画3.1-eqASC-HA（0、1.56ng、3.12ng、6.25ng、12.5ng、25ng、50ng和100ng）质粒共转染HEK293T细胞，按上述检测方法确定不能导致IL-1卩蛋白切割的pcDNA3.1-eqASC-HA质粒的最适转染；按上述转染方法再将250ng pCAGGS-eqlL-lp-GLuc-flag、最适剂量的pCAGGS-eqCaspa-]-HA质粒、最适剂量的pcDNA 3.1-eqASC-HA质粒不同剂量（0、1.56ng、3.12ng、6.25ng、12.5ng、25ng、50ng和100ng）的pcD-NA3.1-eqNLRP3-HA质粒共转染HEK293T细胞，按上述检测方法确定不能导致IL-10蛋白切割的pcD-NA3.1-eqNLRP3-HA质粒的最适转染剂量。
1.6激活系统有效性的检测根据1.5中确定的pCAGGS-eqlL-ip-GLuc-flag、pCAGGS-eqGaspa-1-HA、pcDNA3.1-eqASC-HA、pcDNA3.1-eqNLRP3-HA质粒的最适转染剂量进行HEK293T细胞的共转染实验，于收样前2h分别加入不同剂量（0、2jimol/L, 4|xmol/L、8|xmol/L、16|jLmol/L和32|xmol/L）的NL-
1042中国预防兽医学报2020年
RP3炎症小体激活剂Nigericin，按照1.5中检测方法进行细胞上清的荧光强度与细胞中切割的IL-1B蛋白检测。
2结果
2.1重组质粒的酶切鉴定分别利用Not VXIu）I. Hind WNot I.Me畸讥对构建的重aM®pCAGGS-eqIL-lp-flag A pCAGGS-eqlL-1p-G Luc-fLag>pGAGGS- eqCaspa-1-HA>pcDNA
3.1-eqASC-HA和pcDNA3.1-eqNLRP3-HA进行双酶切鉴定，分别获得了864bp、1365bp、1215bp、585bp、3093bp大小的目的条带，经测序鉴定后确定大小和序列均与预期结果相符（图2），表明各质粒均正确构建。
10000bp
7000bp
4000bp
2000bp
1000bp
500bp
250bp
M12345
M:DL10000Maker;1—5:Identification of pCAGGS-eqIL-
lp-flag,pCAGGS-eqIL-1p-GLuc-flag,pCAGGS-eqCaspa-
1-HA,pcDNA3.1-eqASC-HA and pcDNA3.1-eqNLRP3-
HA by restriction enzyme digestions
仙人掌的花语
图2重组质粒的酶切鉴定
Fig.2Digestion analysis of the recombinant plasmids
2.2重组蛋白表达的鉴定Wfi^M®pCAGGS-eq-IL-ip-flag,pCAGGS-eqIL-10-GLuc-flag、pCAGGS-eqCaspa-1-HA、pcDNA
3.1-eqASC-HA和pcD-NA3.1-eqNLRP3-HA分别转染HEK293T细胞,west-ern blot检测目的蛋白大小均符合预期（图3）。表明各重组蛋白均可在HEK293T细胞中正确表达。
115ku
32ku
28ku
M:Protein Marker;1-6:HEK293T cells transfected with
pCAGGS,pCAGGS-eqIL-1p-flag,pCAGGS-eqIL-1p-
GLuc-flag,pCAGGS-eqCaspa-1-HA,pcDNA3.1-
eqASC-HA and pcDN A3.1-eqNLRP3-HA respectively
图3重组蛋白表达的western blot鉴定
Fig.3Western blot analysis for recombinant proteins
expresd in HEK293T cells 2.3NLRP3体外激活系统构建为确定NLRP3炎症小体激活系统中各质粒的最适转染剂量，分别对NLRP3炎症小体复合物中pCAGGS-eqCaspa-1-HA、pcDNA3.1-eqASC-HA和pcDNA3.1-eqNLRP3-HA质粒进行剂量依赖性试验。结果显示，随着pCAGGS-eqCaspa-1-HA质粒转染剂量的增加，细胞中切割的IL-1B蛋白水平逐渐升高，且细胞上清中荧光强度也逐渐增强。当pCAGGS-eqCaspa-1-HA质粒转染剂量为3.12ng时，western blot几乎检测不到切割的IL-ip，同时，细胞上清中荧光信号也较弱，因此可以确定NLRP3激活系统中的pCAGGS-eqCaspa-1-HA质粒发挥切割IL-1（3作用的临界转染剂量为3.12ng（图4A）。将250ng pCAGGS-eqlL-1p-GLuc-flag质粒、3.12ng pCAGGS-eqCaspa-1-HA质粒与不同剂量的pcDNA3.1-eqASC-HA质粒共转染，当pCAGGS-eqASC-1-HA质粒转染剂量为3.12ng时，western blot检测不到切割的IL-1P，同时，细胞上清中荧光信号也较弱，确定NLRP3激活系统中的pCAGGS-eqASC-1-HA质粒发挥切割IL-IB作用的临界转染剂量为3.12ng（图4B）。再将250ng pCAGGS-eqlL-lp-GLuc-flag质粒、3.12ng pCAGGS-eqCaspa-1-HA质粒、3.12ng pCAGGS-eqASC-HA质粒与不同剂量的pcDNA3.1-eqNLRP3-HA质粒共转染，当pCAGGS-eqASC-1-HA质粒转染剂量为3.12ng时，western blot检测不到切割的IL-1P，同时，细胞上清中荧光信号也较弱，确定NLRP3激活系统中的pCAGGS-eqNLRP3-1-HA质粒发挥切割IL-10作用的临界转染剂量为6.25ng （图4C）。结果表明，本研究所构建的马源NLRP3炎症小体激活系统中各个组分的工作剂量分别为pCAGGS-eqIL-1p-GLuc-flag250ng、pCAGGS-eqCas-pa-l-HA3.12昭、pcDN A3.1-eqASC-HA3.12ng和pcDNA3.1-eqNLRP3-HA6.25n go
2.4NLRP3体外激活系统有效性的检测在确定的NLRP3炎症小体激活系统中各质粒的转染剂量条件下，加入NLRP3炎症小体激活剂Nigericin[10]，以检测所建立系统的有效性。结果显示，随着Nigeri. cin剂量的增加，细胞中切割的IL-1B蛋白水平逐渐升高，且细胞上清中荧光强度也逐渐增强（图5）。表明该系统对NLRP3的激活因素可以产生有效应答，可用于后续能激活或抑制马NLRP3炎症小体相关蛋白或药物的筛选研究
。
第10期王 岩，等•基于Glue 的马源NLRP3炎症小体激活系统的建立1043
Supernatant
nl I
A 3.0X107
g 2.0X107 g
1.0X107
| 0.3X107 -! 0.2X107
吕 O.lxlO 7
pCAGGS-eqCaspa-1-HA
pCAGGS-eqIL-1p-GLuc-flag I
WB: anti-HA [
WB: anti-Flag
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I 250 ng Caspa-1 卜 IL-lp
k Cleaved 」IL-ip
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O^x KT t
Supernatant
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pcDNA3.1-eqASC-HA pC A GGS-eqCaspa-1-HA pCAGGS —eqlL —1 p —GLuc-flaj
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WB: anti-Flag
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C
m 1310s g 0.8x10s
端午节如何放假MM I °-6xl0S
、，
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pcDNA3.1-eqNLRP3-HA pcDNA3.1-eqASC-HA pCAGGS-eqCaspa-1-HA pCAGGS-eqIL —1 p —GLuc-flag
Supernatant
I IL±B I J
WB: anti —HA
WB: anti-Flag
ng
趨畿
250 ng
NLRP3
|< ASC
< Caspa-1
书的写法
H IL-13 L. Cleaved IL-lp
A: Co —expression of iGLuc and caspa-1 with different dos;
B: Co-expression of iGLuc, caspa-1 and ASC with different dos;
C: Co-expression of iGLuc, caspa-1, ASC and NLRP3 at
different dos
Fig. 4 Construction of NLRP3 inflammation activation
图4 NLRP3炎症小体体外激活系统构建
图5马NLRP3炎症小体体外激活系统有效性检测Fig. 5 Verification of equine NLRP3 inflammasome activation
system in vitro
3讨论
NLRP3炎症小体在病毒复制调控及疾病进程中
起重要作用，对NLRP3炎症小体的激活机制及其在
疾病进展中的调控作用是目前的热点研究。而建立
灵敏特异的评估方法是该研究得以开展的重要前 提。目前已建立了多种检测及评估方法，如采用激
光共聚焦显微镜的方法判断NLRP3和ASC 斑点样聚
集情况；Western blot 检测NLRP3和ASC 多聚复合物 的形成；采用ELISA 方法检测细胞上清中炎症因子
水平(IL-ip 和IL-18)等，对NLRP3炎症小体是否激
活综合评价凶心珥这些方法中最为经典，最为直接
的就是NLRP3的体外激活系统。现已有关于猪源和
鼠源NLRP3炎症小体检测系统的报道并取得了一定
进展。但是该系统尽管可通过western blot 检测细胞
内pro-IL-ip 的切割，但是对分泌到细胞上清中成
熟的IL-1B 则需要ELISA 的辅助检测，但有多项研
究发现这种方法对抗体的亲和力和特异性要求较高
且敏感性较低，可能存在无法检测的情况。
本研究在上述研究的基础上，引入了 GLuc，建
立了高敏感性的NLRP3炎症激活系统。GLuc 是様足
类海洋动物Gaussia princeps 分泌的一种发光物质，
是目前已知的最小的可自然分泌的荧光素酶，其灵 敏度比萤火虫荧光素酶FLuc (用咖y lucifera)和海
蜃荧光素酶 RLuc (Renilla lucifera )高出约 10 000
倍，已被广泛用于蛋白互作与定位检测、启动子活 性监测及肿瘤发生和药物治疗评价等研究领域冈12]o
GLuc 报告基因的使用，不仅可以提高检测的敏感
性，重要的是实现了细胞内IL-10的切割活性和细
胞上清中成熟IL-1B 的平行检测，使评价更为准 确、便捷，方法更加方便。另外，如果利用本研究风平浪静打一城市名字
中的GLuc-IL-1B 质粒构建成细胞系，也可为NLRP3 炎症小体体内激活的检测提供可靠手段，并进一步
促进对NLRP3炎症小体调控机制的研究。
本研究中构建的激活系统虽然是基于NLRP3炎
症小体，但对于NAIP-NLRC4和AIM2这几类炎症小
体，由于激活机制较为相似，因此将NLRP3替换成
NAIP-NLRC4或AIM2，也可以构建其他几种类型炎
症小体的体外筛选系统z%由此可见，本研究不
仅建立了高效特异性的马源NLRP3炎症小体的体外
筛选系统，同时也为其它炎症小体的构建提供重要
参考依据。本研究中构建的炎症小体激活系统将为
