第一军医大学
博士学位论文
AGE激活内皮细胞NF-κB及诱导COX-2表达的机制研究
姓名：***
申请学位级别：博士
专业：内科学
指导教师：张训；侯凡凡
20030601
ＡＧＥ
ＤＲＡ
ＡＧＥ一１３２ＭＲＡＧＥ
ｓＲＡＧＥ
ＮＦ－ＫＢＩＣＡＭ一１ＶＡＣＭ．１ＭＣＰ．１
ＮＡＤＰＨＰＫＣ
ＰＴＫ
ＰＭＡ
ＬＰＣ
ＭＡＰＫ
ＥＲＫ
ＳＡＰＫ
ＪＮＫ
ＣＭＬ
张家界山
ＣｏＸ
ＰＧＨＳ
糖醋鸡肉
ＰＧ
ＨＳＡ
甘甜的近义词缩略语词汇表
ａｄｖａｎｃｅｄｇｌｙｃａｔｉｏｎｅｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓ
ｄｉａｌｙｓｉｓ—ｒｅｌａｔｅｄａｍｙｌｏｉｄｏｓｉｓ
ＡＧＥ—Ｂ２一ｍｉｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎ
ｒｅｃｅｐｔｏｒｆｏｒａｄｖａｎｃｅｄｇｌｙｃａｆｉｏｎｅｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓｓｏｌｕａｂｌｅＲＡＧＥ
ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｋａｐｐａＢ
ｉｎｔｅｒｎａｌｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌａｒ－ｌ
ｖａｓｃｕｌａｒｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ一１
ｍｏｎｏｃｙｔｅｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔｐｒｏｔｅｉｎ一１
ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ—ａｄｅｎｉｎｅｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｐｈｏｓｐｈａｔｅｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ
ｐｒｏｔｅｉｎｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅ
ｐｈｏｒｂｏｌｍｙｒｉｓｔａｔｅａｃｅｔａｔｅ，ｐｈｏｒｂｏｌｅｓｔｅｒ
ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ
ｍｉｔｏｇｅｎ—ａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ
ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ－ｓｉｇｎａｌｒｅｇｕｌａｔｅｄｋｉｎａｓｅ
ｓｔｒｅｓｓａｃｔｉｖｅｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎｅａｓｅ
ｃ—ＪｕｎＮ．ｔｅｒｍｉｎａｌｋｉｎａｓｅ
ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｌｙｓｉｎｅ
想念你白色袜子ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ
ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎＨ２ｓｙｎｔｈａｓｅ莽苍
ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ
ｈｕｍａｎｓｅｒｕｍａｌｂｕｍｉｎ
ＦＢＳ
ＨＵＶＥＣＩＫＢ
ＥＭＳＡＰＤＴＣ
ＴＰＣＫＧＳＨ
ＲＯＳ
ＬＤＬｏ—ＵＤＬＲＣｏ
ＰＤＧＦＩＧＦ
中考必备古诗词
ＨＲＰ
ＥＣＬ
ＬＰＳ
ＥＧＦ附ＥＴ
Ⅲ
ＴＮＦ
ＩＬｆｅｔａｌｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍ
ｈｕｍａｎｕｍｂｉｌｉｃａｌｖｅｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ
ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｋａｐｐａＢ
ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃｍｏｂｉｌｉｔｙｓｈｉｆｔａｓｓａｙ
ｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｅｄｉｔｈｉｏｃａｒｂａｍａｔｅ
ＮｒｃＯ－Ｌ－ｔｏｓｙｌ—Ｌ－ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈｙｌｋｅｔｏｎｅｒｅｄｕｃｅｄｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ
ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ
ｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙｆｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ
ｏｘｉｄｉｚｅｄｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ
ｒｅａｃｔｉｖｅｃａｒｂｏｎｙｌ
ｐｌａｔｅｌｅｔｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ
Ｉｎｓｕｌｉｎ—ｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ
ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ
ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ
ｌｉｐｏｐｏｂ，ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ
ｐｌａｔｅｌｅｔａｃｔｉｖａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ
ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ
ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ
ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ
ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ
ＡＧＥ激活内皮细胞ＮＦ．ＫＢ及诱导
ＣＯＸ．２表达的机制研究
摘要
背景
ＡＧＥ是蛋白质、脂类的氨基与糖的醛基之间发生非酶性糖化氧化反应的终产物。随着年龄增大及血糖升高，各种组织中ＡＧＥ增多。ＡＧＥ形成在多种疾病如糖尿病、动脉粥样硬化、阿尔海默茨病、慢性’肾衰等病理过程加速，已经证实ＡＧＥ蓄积和上述疾病的发生、发展及组织病变密切相关。ＡＧ
Ｅ可通过多种受体而被细胞识别，其各种生物学作用可能与其特异性受体ＲＡＧＥ介导有关。已有的研究表明，ＡＧＥ与ＲＡＧＥ结合可引起细胞内氧化应激，导致核转录因子（ＮＦ）一ＫＢ的激活，诱导由ＮＦ．ＫＢ所调控的各种基因的表达。在内皮细胞，ＡＧＥ可引起粘附分子（ＩＣＡＭ一１、ＶＡＣＭ一１）、单核细胞趋化因子一１（ＭＣＰ一１）、Ｅ一选择素等基因的表达增强。这些因子的表达可增加内皮通透性，增强炎性细胞的吸附，降低内皮细胞的正常防护功能等，故ＮＦ—ＫＢ激活引起炎症反应，导致血管内皮功能失调，可能参与ＡＧＥ相关的疾病的病理进程。揭示ＮＦ－ＫＢ激活的信号通路有助于认识疾病发生发展，指导疾病的治疗。己发现，ＡＧＥ引起的氧化应激，参与了ＮＦ．ＫＢ的激活。ＡＧＥ引起的氧化应激与ＮＡＤＰＨ氧化酶的激活有关。ＮＡＤＰＨ氧化酶的激活可能通过两条途径，其中，佛波醇脂引起的ＮＡＤＰＨ氧化酶激活由ＰＫＣ介导，而溶血卵磷脂则通过ＰＴＫ介导。ＡＧＥ通过何种途径激活ＮＡＤＰＨ氧化酶及激活后的ＮＡＤＰＨ氧化酶如何引起ＮＦ－ＫＢ的激活目前尚不清楚。已发现，
ＡＧＥ引起的ＲＯＳ参与了ｐ３８ＭＡＰＫ的激活，对单核细胞ＴＨＰｌ的研究发现，ｐ３８ＭＡＰＫ介导了ＮＦ－ＫＢ的激活。在内皮细胞，ｐ３８ＭＡＰＫ是否参与了ＡＧＥ诱导的ＮＦ．ＫＢ的激活目前尚不清楚。
激活的ＮＦ—ＫＢ可诱导很多介导免疫和炎症信号的基因表达，环加氧酶．２（ＣＯＸ．２）是ＮＦ—ＫＢ调节的重要蛋白之一。多种因素可诱导ＣＯＸ一２在内皮细胞、血管平滑肌细胞等多种细胞中
的表达，引起氧化应激产生及炎症反应，参与多种疾病的病理过程。ＡＧＥ可刺激内皮细胞表达多种炎症介质，作为炎症介质调节酶的ＣＯＸ一２是否参与ＡＧＥ引起的病理生理过程目前尚不清楚。
小米共享wifi我们以ＡＧＥ修饰的人血清白蛋白（ＡＧＥ—ＨＳＡ）作为ＡＧＥ模型，研究了ＡＧＥ诱导内皮细胞ＮＦ—ＫＢ激活的信号传导机制，观察了ＡＧＥ对ＣＯＸ一２表达的诱导作用。
方法
我们用ＤＲＡ病人关节组织研究ＮＦ－ＫＢ在体内的激活情况，然后选择体外培养的人脐静脉内皮细胞（ⅢⅣＥｃ）及内皮细胞株（ＥＣＶ３０４）为靶细胞，观察ＡＧＥ修饰蛋白对内皮细胞ＮＦ．ＫＢ激活及ＣＯＸ一２表达的作用并对其作用机制进行探讨。
１．ＡＧＥ对血管内皮细胞ＮＦ－ＫＢ的激活作用。
（１）用免疫组织化学方法检测ＮＦ－ＫＢ在ＤＲＡ病人关节血管内皮细胞中的移位激活情况。光纤猫
（２）用免疫组织化学法染色检测ＡＧＥ处理ＨＵＶＥＣ后，ＮＦ—ＫＢ在胞浆和胞核内的分布变化，用图象分析仪检测分析核浆灰度比值评价ＮＦ—ＫＢ的激活状况。
（３）ＡＧＥ刺激ＥＣＶ３０４引起的ＩＫＢｄ的变化用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测，ＮＦ一
４
