ｅｆｆｅｃｔｏｆｂｉｃｙｃｌｏｌａｎｄｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｗａｓｅｖａｌｕａｔｅｄｂｙｄｅｔｅｃｔｉｎｇｔｈｅｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃｒｅｌｅａｓｅｏｆｌｉｖｅｒｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＣ（ＣｙｔＣ）ａｎｄｔｈｅｏ ｐｅｎｉｎｇｏｆｍｅｍｂｒａｎｅｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｐｏｒｅ（ｍＰＴＰ）ｉｎｉｓｏｌａｔｅｄｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＢｉｃｙｃｌｏｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅｏｆｍｉｃｅｗｉｔｈｌｉｖｅｒｉｎｊｕｒｙｉｎｄｕｃｅｄｂｙＴＮＦ α／Ｄ ＧａｌＮ，ｄｅｃｒｅａｓｅｄｓｅｒ ｕｍＡＬＴａｎｄＡＳＴｌｅｖｅｌｓ，ａｎｄａｌｌｅｖｉａｔｅｄｔｈｅｈｉｓｔｏｐａｔｈｏ ｌｏｇｉｃｉｎｊｕｒｙａｎｄｈｅｐａｔｏｃｙｔｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｌｉｖｅｒ．Ｍｅｃｈａ ｎｉｓｍｓｔｕｄｉｅｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｂｉｃｙｃｌｏｌｄｅｃｒｅａｓｅｄＢａｘｌｅｖｅｌ
ａｎｄｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅａｎｔｉａｐｏｐｔｏｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎＢｃｌ ２ｌｅｖｅｌ，ａｌ ｌｅｖｉａｔｅｄｔｈｅｏｐｅｎｉｎｇｏｆｍＰＴＰａｎｄｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃｒｅｌｅａｓｅｏｆＣｙｔｃ，ａｎｄｔｈｕｓｉｎｈｉｂｉｔｅｄｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄａｃｔｉｖａｔｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｃａｓｐａｓｅ ３／ ９ｉｎｄｕｃｅｄｂｙＴＮＦ α／Ｄ ＧａｌＮ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｂｉｃｙｃｌｏｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙａｌｌｅｖｉａｔｅ
ｓｆｕｌｍｉ ｎａｎｔｌｉｖｅｒｉｎｊｕｒｙｉｎｄｕｃｅｄｂｙＴＮＦ α／Ｄ ＧａｌＮｖｉａｐｒｏｔｅｃ ｔｉｎｇｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｆｒｏｍｉｎｊｕｒｙａｎｄｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｔｈｅｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌａｐｏｐｔｏｓｉｓｐａｔｈｗａｙ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｂｉｃｙｃｌｏｌ；ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ α；ｌｉｖｅｒｉｎ ｊｕｒｙ；ｈｅｐａｔｉｔｉｓ；ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ
其实我很幸福网络出版时间：２０２１－３－１５１７：２１ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ．２０２１０３１２．１７０６．０１８．ｈｔｍｌ
具栖冬青苷对大鼠急性心肌缺血／再灌注损伤的保护作用研究
杨爱萍，张启春，宋 ，杨 梦，王君阳，王 畅，胡立宏，王吓长
（南京中医药大学江苏省中药功效物质重点实验室，江苏南京 ２１００２３）
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０２１．０４．００９
文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２１）０４－０４８４－０６中国图书分类号：Ｒ ３３２；Ｒ２８４ １；Ｒ３３１ ３１；Ｒ５４０ ４１；Ｒ５４２ ２；Ｒ６１９ ９
摘要：目的 研究具栖冬青苷（ｐｅｄｕｎｃｕｌｏｓｉｄｅ，ＰＥ）对大鼠急性心肌缺血／再灌注损伤（ＭＩＲＩ）的保护作用。方法 采用结扎大鼠心脏冠状动脉左前降支（
ＬＡＤ）３０ｍｉｎ，再灌注２４ｈ的方法制备急性心肌缺血／再灌注损伤模型。大鼠随机分为７组（ｎ＝１０），即假手术组（Ｓｈａｍ）、急性心肌缺血／再灌注损伤模型组（Ｍ）、卡托普利组（Ｃａｐｔ，阳性药）、美托洛尔组（在押
ＭＴ，阳性药）、ＰＥ低、中、高剂量组（２ ５ｍｇ·ｋｇ－１
、５ｍｇ·ｋｇ－１和１０ｍｇ·ｋｇ－１）。术前连续给药３ｄ，每日１次。观察
ＰＥ对ＭＩＲＩ大鼠心肌缺血／再灌注损伤的影响。结果 ＭＩ ＲＩ模型组大鼠在结扎ＬＡＤ３０ｍｉｎ，再灌注２４ｈ后，心肌梗死面积显著增加，心脏收缩、舒张功能降低，表现为ＬＶＳＰ、＋ｄＰ／ｄｔｍａｘ降低，ＬＶＥＤＰ、－ｄＰ／ｄｔｍａｘ升高。同时，血清ＳＯＤ含量降低，ＭＤＡ，ＣＴｎＩ含量升高。与模型组比较，ＰＥ能明显改善上述病理改变。结论 具栖冬青苷对大鼠急性心肌缺血／
再灌注损伤有明显的保护作用。收稿日期：２０２０－１２－２０，修回日期：２０２１－０１－２６
基金项目：国家重点研发计划（Ｎｏ２０１９ＹＦＣ１７１１５００，２０１８ＹＦＣ
１７０７９００）
作者简介：杨爱萍（１９９１－），女，博士生，研究方向：心血管药理学，
Ｅ ｍａｉｌ：ａｉｐｉｎｇｙａｎｇ２１２＠１６３．ｃｏｍ；
张启春（１９７６－）男，博士，副教授，硕士生导师，研究方向：心血管及神经药理学，Ｅ ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｑｉｃｈｕｎ＠ｎｊｕｃｍ．ｅｄｕ．ｃｎ；
王吓长（
１９７６－），男，博士，教授，博士生导师，研究方向为中药活性成分及其质量标准，Ｅ ｍａｉｌ：ｘｉａｃｈａｎｇｗａｎｇ＠ｎｊｕｃｍ．ｅｄｕ．ｃｎ
关键词：具栖冬青苷；大鼠；缺血／再灌注损伤；心电图；血流动力学；心肌损伤标志物
开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）：
急性心肌梗死作为临床上较常见的急危重症，是冠状动脉急性、持续性缺血缺氧引起心肌坏死的
一类疾病，具有发病快，致死致残率高等特点［
１，２］
。随着溶栓疗法以及心外科技术的进步，急性心肌梗死患者的死亡率在逐渐减低，但缺血／再灌注后中断的血流突然恢复，随之产生的一系列如再灌注心律失常、微循环障碍、心肌顿挫以及部分心肌细胞损伤进行性加重等不良反应仍然给患者带来严重的伤
害［３－６］
。心肌缺血／再灌注损伤（ｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉ
ａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ，ＭＩＲＩ）作为心血管疾病近年来研究的热点之一，寻找药物预处理来对抗ＭＩＲＩ是目前临床工作中亟待解决的问题。
救必应为我国南方常用中药，始载于《岭南采药录》，为冬青科植物铁冬青（Ｉｌｅｘｒｏｔｕｎｄ
ａＴｈｕｎｂ．）的干燥树皮或根皮。早期文献报道，救必应提取物具有降低血压，减慢心率，缓解心绞痛，预防冠心病，
抗缺氧，抗心律失常以及抵抗心肌缺血的作用［７－８］。
具栖冬青苷（
ｐｅｄｕｎｃｕｌｏｓｉｄｅ，ＰＥ）为救必应的活性成分之一［９－１０］，结构式见Ｆｉｇ１，其对ＭＩＲＩ的治疗作用
目前未见报道。本实验通过结扎大鼠心脏冠状动脉·
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左前降支（ｌｅｆｔａｎｔｅｒｉｏｒｄｅｓｃｅｎｄｉｎｇｃｏｒｏｎａｒｙ，ＬＡＤ）３０ｍｉｎ，再灌注２４ｈ的方法建立大鼠ＭＩＲＩ模型，研究具栖冬青苷预处理对ＭＩＲＩ的保护作用，并探讨其可能的机制，为临床寻找更好的心肌保护药物提供
内部控制管理制度
参考。
Ｆｉｇ１ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｐｅｄｕｎｃｕｌｏｓｉｄｅ（ＰＥ）
１ 材料
１．１ 实验动物 健康成年ＳＤ大鼠，ＳＰＦ级，♂，体质量（３００±３０）ｇ，由江苏省南京市青龙山实验动物养殖场提供，动物许可证号：ＳＣＸＫ（苏）２０１７ ０００１，合格证号：２０１８０００４０２５６３８。
１．２ 药物和试剂 具栖冬青苷（实验室自制，纯度９９ ５％，白色粉末，易溶于甲醇和ＤＭＳＯ，可溶于水，常温保存）；卡托普利片（批号２０１８０３０６，中美上海施贵宝制药有限公司）；酒石酸美托洛尔片（批号２０１７１２０８，阿斯利康制药有限公司）；戊巴比妥钠（批号２
０１６１２０２，上海市惠兴生化试剂有限公司）；肝素钠（批号４２１Ｆ０２７，南京森贝伽生物科技有限公司）；２，３，５ 氯化三苯基四氮唑（ＴＴＣ，批号２０１６０９０１，南京森贝伽生物科技有限公司）；伊文思蓝（批号２０１７０３０５，南京森贝伽生物科技有限公司）；丙二醛（ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ，ＭＡＤ）试剂盒、超氧化物歧化酶（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ，ＳＯＤ）试剂盒、心肌肌钙蛋白Ｉ（ｃａｒｄｉａｃｔｒｏｐｏｎｉｎＩ，ＣＴｎＩ）试剂盒均购于南京建成生物工程研究所，批号２０２００８０１。
阳性对照药美托洛尔、卡托普利和受试药物具栖冬青苷均采用０ ５％羧甲基纤维素钠配制的混悬液进行灌胃给药，药物当天配制，现配现用。
１．３ 主要仪器设备 小动物呼吸机（型号ＡＥ０２ ＡＬＣ Ｖ８Ｓ，上海奥尔科特生物科技有限公司）；ＰｏｗｅｒＬａｂ（型号ＰＬ３５０８Ｂ７３，上海赞德医疗器械有限公司）；酶标仪（型号Ｍ２００ＰｒｏＮａｎｏｑｕａｎｔ，上海帝肯贸易有限公司）；冷冻离心机（批号ＡｕｅｇｒａＸ３０Ｒ，Ｂｅｃｋｍａｎ公司）；电子天平（型号ＯＨＡＵＳ，苏州塞恩斯仪器有限公司）。
２ 方法２．１ 动物分组及处理 ＳＤ大鼠购入后在室温２３℃－２６℃，相对湿度４０％－６０％环境下饲养７ｄ，期间自由进食饮水。术前选取体质量在（３００±３０）ｇ的大鼠，随机分成７组，即假手术组（Ｓｈａｍ）、急性心肌缺血／再灌注损伤模型组（Ｍ）、卡托普利组（Ｃａｐｔ，
１２ ５ｍｇ·ｋｇ－１，阳性药）、美托洛尔组（ＭＴ，１５ｍｇ·ｋｇ－１，阳性药）、ＰＥ低、中、高剂量组（２ ５、５和１０ｍｇ），每组大鼠１０只。
２．２ 实验模型的制备 大鼠称重，用２％戊巴比妥钠溶液（６０ｍｇ·ｋｇ－１）行腹腔注射麻醉，观察大鼠反应，待角膜反射、肌张力消失后，置鼠板仰卧位固定。剪去大鼠颈部正中、左前胸的体毛备皮，碘伏消毒。先实施颈部开口，暴露气管，于视觉可见下连接小动物呼吸机，设置呼吸频率为９０次／ｍｉｎ，潮气量为３ｍＬ／１００ｇ，观察２ｍｉｎ。待大鼠呼吸平稳后，打开Ｐｏｗｅｒｌａｂ，将针式电极固定于大鼠四肢皮下，以监测肢体Ⅱ导联心电图的变化。并于左胸前第３－４肋间逐层开胸，分离心包，暴露心脏，于肺动脉圆锥和左心耳间找到左冠状动脉前降支ＬＡＤ，用丝线于左心耳下缘２ｍｍ处以活结结扎，附带结扎自制导管。以Ⅱ导联心电图采集的图像中ＳＴ段明显抬高，结扎点以下部位心肌色泽瞬时变苍白，或发生区域性心肌运动障碍，即为ＬＡＤ结扎成功的标志［１１－１４］。结扎３０ｍｉｎ后，打开活结，去掉自制导管，恢复血液供应，实现血液再灌注。随后，立即用棉球小心拭去胸腔积水，轻轻调整心肺正常位置，逐层缝合伤口，缝合时胸腔预留自制抽气导管，待拉紧缝合线关闭胸腔后，抽气并拔出导管以恢复胸腔的负压状态。整个再灌注过程持续２４ｈ，２４ｈ后进行各指标检测。假手术组大鼠同模型组大鼠手术过程，但仅在ＬＡＤ下留置丝线，不进行结扎和再灌注手术。术后观察大鼠心电图，如无心律失常、室颤等异形波形图，且呼吸平稳，可小心去掉呼吸机，缝合颈部皮肤。将大鼠置宠物电热毯保暖至麻醉消退意识恢复。
２．３ 给药方法 大鼠术前３ｄ连续灌胃给药，每日１次，每次灌胃以当天体重计算，灌胃体积１０ｍＬ·ｋｇ－１。模型组、假手术组给予０ ５％羧甲基纤维素钠溶液。其余各组分别给予ＰＥ低、中、高剂量（２ ５、５和１０ｍｇ·ｋｇ－１）、阳性对照药卡托普利１２ ５ｍｇ·ｋｇ－１、阳性对照药美托洛尔１５ｍｇ·ｋｇ－１。末次给药２ｈ后开始急性心肌缺血／再灌注损伤手术操作。
２．４ 指标检测
２．４．１ Ⅱ导联心电图 记录各组大鼠的Ⅱ导联心
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５
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电图，观察缺血性心律失常的发生，并记录缺血／再灌注后ＳＴ段高度的变化。
２．４．２ 血流动力学 连接生物信号采集系统Ｐｏｗ ｅｒＬａｂ、压力换能器及聚乙烯导管，用０ １％肝素钠生理盐水冲洗并充盈导管，排空气泡备用。分离大鼠右颈总动脉，根据显示器所示压力图形的变化，将含０
１％肝素钠的导管缓缓插入左心室，监测大鼠左心室血流动力学的变化，评估心脏收缩及舒张功能。观察指标包括左心室收缩压（ｌｅｆｔｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒｓｙｓｔｏｌｉｃｐｒｅｓｓｕｒｅ，ＬＶＳＰ）、左心室舒张末期压（ｌｅｆｔｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒｅｎｄ ｄｉａｓｔｏｌｉｃｐｒｅｓｓｕｒｅ，ＬＶＥＤＰ）、左心室等容期压力最大变化速率（ｔｈｅｍａｘｉｍｕｍｒａｔｅｏｆｐｒｅｓ ｓｕｒｅｒｉｓｅａｎｄｆａｌｌ，±ｄＰ／ｄｔｍａｘ
）。２．４．３ 心肌梗死面积 待再灌注结束后，将２ｍＬ１％伊文思蓝由主动脉注入左心室染色，区分非缺血区（蓝染区）与缺血区（非蓝染区）。然后迅速处死大鼠，取出离体心脏，用冷的磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）冲洗３次，挤出心脏内部液体，滤纸吸干心脏表面水分，称量心脏重量，用于心脏脏器指数计算。置－８０℃冰箱冷冻１０ｍｉｎ后取出，将心脏横切成２ｍｍ厚的切片，置于１％ＴＴＣ溶液中，３７℃恒温避光染色２０ｍｉｎ，区分缺血未梗死区（砖红色）和梗死区（灰白色）。ＴＴＣ染色后将心肌切片放入４％的多聚甲醛溶液中固定２
４ｈ。心肌切片拍照后，采用电脑图像分析软件ＩｍａｇｅＰｒｏＰｌｕｓ测定心肌梗死面积百分比／％＝（心肌梗死区面积之和／心肌缺血区面积之和）×１００％。
２．４．４ 心脏脏器指数 心脏脏器系数＝（心脏重量／体重）×１００％，体重为末次给药体重。２．４．５ 血清中ＳＯＤ、ＭＡＤ、ＣＴｎＩ含量测定 测定血流动力学后，大鼠颈动脉取血４ｍＬ，４℃静置１ｈ，以３
５００ｒ·ｍｉｎ－１低温离心１０ｍｉｎ，分装血清于ＥＰ管中，
－８０℃保存。测定时取出血清，快速解冻，严格按照试剂盒说明，测血清中ＳＯＤ、ＭＡＤ和ＣＴｎＩ的含量。２．５ 统计分析 所有数据采用ＳＰＳＳ１３ ０软件进行分析，两组间比较采用ｔ检验，多组内比较采用单因
素方差分析，实验结果以珋ｘ±ｓ表示。３ 结果
３．１ 具栖冬青苷对急性心肌缺血／再灌注大鼠心电图ＳＴ段高度的影响 ＳＤ大鼠在结扎ＬＡＤ后，可见Ｓ波消失，ＳＴ段明显抬高，经血液再灌注２４ｈ后，ＳＴ段略降低，但各组间未见显著性差异，见Ｆｉｇ２。ＭＩ ＲＩ模型制备过程中有５只大鼠因心律失常死亡而舍弃，建模成功率大于９０％
。
Ｆｉｇ２ ＣｈａｎｇｅｓｏｆｅｌｅｃｔｒｏｃａｒｄｉｏｇｒａｍｏｆＭＩＲＩｍｏｄｅｌｒａｔｓＡ：Ｎｏｒｍａｌｅｌｅｃｔｒｏｃａｒｄｉｏｇｒａｍ；Ｂ：ＡｆｔｅｒＬＡＤｌｉｇａｔｉｏｎ；Ｃ：２４ｈａｆｔｅｒｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
３．２ 具栖冬青苷对急性心肌缺血／再灌注大鼠血流动力学的影响 与假手术组比较，ＭＩＲＩ组大鼠ＬＶＳＰ和＋ｄＰ／ｄｔｍａｘ下降，ＬＶＥＤＰ和－ｄＰ／ｄｔｍａｘ上升，差异均有显著性（Ｐ＜０ ０１），说明模型组大鼠心脏舒张功能和收缩功能明显受损；与模型组比较，卡托普利组、美托洛尔组、具栖冬青苷中、高剂量组ＬＶＳＰ升高；卡托普利组、美托洛尔组、具栖冬青苷高剂量组＋ｄＰ／ｄｔｍａｘ升高；卡托普利组、具栖冬青苷高剂量预处理组ＬＶＥＤＰ和－ｄＰ／ｄｔｍａｘ降低，差异存在显著性（Ｐ＜０ ０５）；提示具栖冬青苷预处理有改善急性心肌缺血／再灌注损伤后心肌收缩及舒张功能的作用，结果如Ｔａｂ１所示。
Ｔａｂ１ ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｐｅｄｕｎｃｕｌｏｓｉｄｅｏｎｈｅｍｏｄｙｎａｍｉｃｓｉｎＭＩＲＩｒａｔｓ（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
ＧｒｏｕｐＤｏｓｅ／ｍｇ·ｋｇ－１ＬＶＳＰ／ｍｍＨｇＬＶＥＤＰ／ｍｍＨｇ＋ｄＰ／ｄｔｍａｘ／ｍｍＨｇ／ｓ－ｄＰ／ｄｔｍａｘ／ｍｍＨｇ／ｓＳｈａｍ—
１７３．７０±１７．９０１１．５９±１．８８１１３１２．８４±９１１．３５－８９８６．２１±２１３４．６７
入团年龄要求Ｍ—１２０．６２±１８．９８
＃＃
１３．０２±２．４６
＃＃
６９２１．８４±１１２４．３３
＃＃
－５９１６．８７±１１３０．０５＃＃
Ｃａｐｔ１２．５１４３．２２±１７．０５
怎么折礼物盒１１．６６±２．５６
８７７０．６１±１３５０．１１
－７９０４．８７±２０２２．６７ ＭＴ１５１４４．１２±１２．３６ １１．６７±２．３３
８８３５．４７±１７９６．１２ －７８６７．８２±２６２７．８６
２．５１３０．５６±１４．８７
１１．８１±２．８１５６０６．７０±１９０９．８６
－６７６６．０５±３３９１．５１ＰＥ
５１３８．６２±１０．５１
１２．６１±１．４５
７９３６．５８±１６０５．６８
－７７０８．３５±２５６２．９５
１０
１４０．９１±１５．９１
１１．７７±２．８９
８６２１．７２±１３３０．７６
－８４９０．００±３０２５．０１
＃＃
Ｐ＜０ ０１ｖｓｓｈａｍｏｐｅｒａｔｉｏｎ； Ｐ＜０ ０５ｖｓＭＩＲＩｍｏｄｅｌ．
·
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Ｆｉｇ３ Ｅｖｅｎｓｂｌｕｅｓｔａｉｎｉｎｇｏｆｗｈｏｌｅｈｅａｒｔｉｎｒａｔ
ｓ
Ｆｉｇ４ ＴＴＣｓｔａｉｎｉｎｇｏｆｍｙｏｃａｒｄｉａｌｓｅｃｔｉｏｎｓｉｎｒａｔｓ
３．３ 具栖冬青苷对急性心肌缺血／再灌注大鼠心肌梗死面积的影响 各组大鼠经ＬＡＤ结扎３０ｍｉｎ，再灌注２４ｈ后，整体心脏用伊文思蓝染色后，除假手术组外，其他各组大鼠结扎线以下可见缺血区（非蓝染区），其中模型组缺血区域比较明显，见Ｆｉｇ３。心肌切片用ＴＴＣ染色后，同样模型组梗死区（灰白色区）较明显，见Ｆｉｇ４。
与假手术组相比，心肌缺血／再灌注模型组大鼠心肌梗死面积明显增加（
Ｐ＜０ ０５）；与模型组相比，卡托普利组、美托洛尔组、具栖冬青苷低、中、高剂量组心肌梗死面积明显降低（Ｐ＜０ ０５或Ｐ＜０ ０１），且具栖冬青苷高剂量组的效果比低剂量的效果更明显，提示具栖冬青苷预处理可缓解心肌缺血／再灌注后的心肌梗死，见Ｆｉｇ５
。
Ｆｉｇ５ Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｐｅｄｕｎｃｕｌｏｓｉｄｅｏｎｍｙｏｃａｒｄｉａｌ
ｉｎｆａｒｃｔｓｉｚｅｉｎＭＩＲＩｒａｔｓ
蜂拥而至造句Ｐ＜０ ０５，
Ｐ＜０ ０１ｖｓＭＩＲＩＭｏｄｅｌ；＃＃Ｐ＜０ ０１ｖｓＳｈａｍｏｐｅｒａｔｉｏｎ．
３．４ 具栖冬青苷对急性心肌缺血／再灌注大鼠心脏脏器指数的影响 模型组大鼠心脏脏器指数相对假
手术组明显升高（
Ｐ＜０ ０５）。与模型组比较，卡托普利组、美托洛尔组、具栖冬青苷中、高剂量组ＭＩＲＩ大鼠心脏脏器指数降低，差异有显著性（Ｐ＜０ ０５），提示具栖冬青苷预处理能有效减轻心肌缺血／再灌注损伤后的心脏组织炎性水肿。见Ｆ
ｉｇ６
。Ｆｉｇ６ ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｐｅｄｕｎｃｕｌｏｓｉｄｅｏｎＨＷ／ＢＷｒａｔｉｏｉｎＭＩ
ＲＩｒａｔｓ
＃
Ｐ＜０ ０５ｖｓＳｈａｍｏｐｅｒａｔｉｏｎ； Ｐ＜０ ０５ｖｓＭＩＲＩＭｏｄｅｌ．
３．５ 具栖冬青苷对急性心肌缺血／再灌注大鼠生化指标的影响 与假手术组相比较，模型组血清ＳＯＤ活性降低，差异有显著性（Ｐ＜０ ０１）；同时，ＭＤＡ、ＣＴｎＩ水平增高，差异亦有显著性（Ｐ＜０ ０５），说明模型制备成功。与模型组相比，卡托普利组、美托洛尔组、具栖冬青苷中、高剂量组大鼠血清ＳＯＤ活性明
显提高，差异有显著性（Ｐ＜０ ０５或Ｐ＜０ ０１）；卡托普利组、美托洛尔组、具栖冬青苷低、中、高剂量组大鼠血清Ｍ
ＤＡ含量均降低，差异有显著性（Ｐ＜０ ０１或Ｐ＜０ ０５）；ＣＴｎＩ含量卡托普利组、美托洛尔组、具栖冬青苷高剂量组明显提高，差异有显著性（Ｐ＜０ ０５），见Ｔａｂ２。
·７
８４·中国药理学通报 ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ ２０２１Ａｐｒ；３７（４）
Ｔａｂ２ ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｐｅｄｕｎｃｕｌｏｓｉｄｅｏｎｌｅｖｅｌｏｆＳＯＤ，ＭＤＡａｎｄ
ＣＴｎＩｉｎＭＩＲＩｒａｔｓ（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
Ｇｒｏｕｐ
Ｄｏｓｅ／
初一历史思维导图ｍｇ·ｋｇ－１
ＳＯＤ／ｎｇ·Ｌ－１
ＭＤＡ／ｎｍｏｌ·Ｌ－１
ＣＴｎＩ／ｎｇ·Ｌ－１
Ｓｈａｍ－
９０．９１±３．４４
２．１９±０．０６
１０５．５９±１．４８
Ｍ—８１．０４±２．９４＃＃２．５０±０．１０＃＃１０９．８１±３．１６＃Ｃａｐｔ１２．５８５．９４±２．８４ ２．２４±０．０３ １０４．６０±１．３９ ＭＴ１５８７．７３±４．７２ ２．２２±０．１１ １０５．３７±１．８２ ２．５８２．６０±３．２８２．３４±０．１１ １０７．３９±２．２６
ＰＥ
５８５．７５±２．７２
２．３３±０．０４
１０６．６０±１．１３
１０
８７．９９±２．１３
２．２８±０．０６
１０３．８０±２．６５
＃Ｐ＜０ ０５，＃＃
Ｐ＜０ ０１ｖｓｓｈａｍｏｐｅｒａｔｉｏｎ； Ｐ＜０ ０５， Ｐ＜０ ０１ｖｓＭＩＲＩ
ｍｏｄｅｌ．
４ 讨论
心肌缺血／再灌注损伤的发生是一个复杂的病理生理过程，严重者可导致心律失常、心肌顿挫、微血管受损及不可逆的细胞坏死和凋亡等。造成急性心肌缺血后再灌注损伤的机制主要包括微循环障碍、炎症作用、心肌间质水肿、钙超载、白细胞侵入以
及酸中毒等方面［１５－１６］。心肌缺血／再灌注损伤程度
与心脏左室功能密切相关，血流动力学指标ＬＶＳＰ、ＬＶＥＤＰ、±ｄＰ／ｄｔｍａｘ是反应心脏收缩和舒张功能的重要指标。定量组织学方法测定心肌梗死面积是心肌缺血研究最直观的评价指标。Ｓ
ＯＤ、ＭＤＡ、ＣＴｎＩ是心肌损伤的标志物［
１７］
。心肌细胞受损、细胞膜完整性破坏后，心肌酶等便会外漏释放入血，临床常以此诊断心肌损伤程度。ＳＯＤ是机体内一种重要的抗氧化酶，ＭＩＲＩ时，ＳＯＤ活性降低，导致氧自由基大量堆积，从而造成心肌损伤，使血清ＣＴｎＩ含量升高，同时，脂质过氧化产物ＭＤＡ含量升高。基于中药救必应前期在心血管疾病治疗作用方面的研究报道，开展其主要活性成分具栖冬青苷抗ＭＩＲＩ药效学研究，为临床寻找更好的心肌保护药物提供参考。
本实验根据急性心肌缺血／再灌注损伤疾病的特点，通过结扎ＬＡＤ３０ｍｉｎ，再灌注２４ｈ制备大鼠急性心肌缺血／
再灌注损伤模型，选择临床一线治疗药物β 受体阻滞剂美托洛尔与血管紧张素转化酶抑制剂卡托普利作为动物实验的阳性对照药，从心电图、血流动力学、心肌梗死面积、心脏脏器指数、血清生化指标等方面探讨具栖冬青苷的心肌保护作用。结果表明，与ＭＩＲＩ模型组比较，具栖冬青苷预处理组①心电图ＳＴ段高度明显降低，提示具栖冬青苷预处理可缓解心肌缺血及再灌注后心肌组织损伤；②血流动力学指标明显改善，
糯米蛋糕表现为ＬＶＳＰ和＋ｄＰ／ｄｔｍａｘ升高，ＬＶＥＤＰ和－ｄＰ／ｄｔｍａｘ降低，提示具栖冬青苷预处理对ＭＩＲＩ大鼠左室收缩和舒张功能有
保护作用；③心肌梗死面积明显下降，提示具栖冬青苷可减少心肌细胞持续坏死；④心脏脏器指数降低，提示具栖冬青苷可减少缺血／再灌注后心肌组织的炎性水肿，降低炎症反应；⑤反应心肌损伤程度的ＣＴｎＩ水平降低，ＳＯＤ活性升高，心肌组织过氧化产物ＭＤＡ含量降低，提示具栖冬青苷预处理可降低心肌细胞损伤，且在众多指标的改善上并不弱于阳性药卡托普利和美托洛尔。综上可见，具栖冬青苷对急性心肌缺血／再灌注损伤有明显的保护作用。这种保护作用可能与具栖冬青苷预处理增强ＳＯＤ清除氧自由基能力，降低过氧化物ＭＤＡ的生成，抑制心肌细胞凋亡，抵抗缺血／再灌注损伤后的心肌细胞持续性坏死，保护保护心脏功能相关；其详细作用机制有待进一步研究。参考文献：
［１］ ＤａｍｌｕｊｉＡＡ，ＨｕａｎｇＪ，Ｂａｎｄｅｅｎ ＲｏｃｈｅＫ，ｅｔａｌ．Ｆｒａｉｌｔｙａｍｏｎｇ
ｏｌｄｅｒａｄｕｌｔｓｗｉｔｈａｃｕｔｅｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｎｆａｒｃｔｉｏｎａｎｄｏｕｔｃｏｍｅｓｆｒｏｍｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓｃｏｒｏｎａｒｙｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓ［Ｊ］．ＪＡｍＨｅａｒｔＡｓｓｏｃ，２０１９，８（１７）：ｅ０１３６８６．
［２］ ＷａｄｈｅｒａＲＫ，ＢｈａｔｔＤＬ，ＷａｎｇＴＹ，ｅｔａｌ．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｏｆｓｔａｔｅ
ｍｅｄｉｃａｉｄｅｘｐａｎｓｉｏｎｗｉｔｈｑｕａｌｉｔｙｏｆｃａｒｅａｎｄｏｕｔｃｏｍｅｓｆｏｒｌｏｗ ｉｎ ｃｏｍｅｐａｔｉｅｎｔｓｈｏｓｐｉｔａｌｉｚｅｄｗｉｔｈａｃｕｔｅｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＪＡＭＡＣａｒｄｉｏｌ，２０１９，４（２）：１２０－７．
［３］ ＦｒａｎｋＡ，ＢｏｎｎｅｙＭ，ＢｏｎｎｅｙＳ，ｅｔａｌ．Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａｒｅｐｅｒ
ｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ：Ｆｒｏｍｂａｓｉｃｓｃｉｅｎｃｅｔｏｃｌｉｎｉｃａｌｂｅｄｓｉｄｅ［Ｊ］．ＳｅｍｉｎＣａｒｄｉｏｔｈｏｒａｃＶａｓｃＡｎｅｓｔｈ，２０１２，１６（３）：１２３－３２．
［４］ ＮａｉｔｏＨ，ＮｏｊｉｍａＴ，ＦｕｊｉｓａｋｉＮ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓｔｒａｔｅｇｉｅｓｆｏｒ
ｉｓｃｈｅｍｉａｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙｉｎｅｍｅｒｇｅｎｃｙｍｅｄｉｃｉｎｅ［Ｊ］．ＡｃｕｔｅＭｅｄＳｕｒｇ
，２０２０，７（１）：ｅ５０１．［５］ ＰｉｃｋｅｌｌＺ，ＷｉｌｌｉａｍｓＡＭ，ＡｌａｍＨＢ，ｅｔａｌ．Ｈｉｓｔｏｎｅｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ
ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ：Ａｎｏｖｅｌｓｔｒａｔｅｇｙｆｏｒｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎａｎｄｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃ ｔｉｏｎｆｏｌｌｏｗｉｎｇｉｓｃｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．ＪＡｍＨｅａｒｔＡｓｓｏｃ，２０２０，９（１１）：ｅ０１６３４９．
［６］ ＣａｃｃｉｏｐｐｏＡ，ＦｒａｎｃｈｉｎＬ，ＧｒｏｓｓｏＡ，ｅｔａｌ．Ｉｓｃｈｅｍｉａｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ
ｉｎｊｕｒｙ：Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｄａｍａｇｅ／ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎａｎｄｎｏｖｅｌｓｔｒａｔｅｇｉｅｓｆｏｒｃａｒｄｉａｃｒｅｃｏｖｅｒｙ／ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＩｎｔＪＭｏｌＳｃｉ，２０１９，２０（２０）：５０２４．
［７］ 梁燕玲，董艳芬，罗集鹏．救必应乙醇提取物对应激性高血
压大鼠降压作用的实验研究［Ｊ］．中药材，２００５，２８（７）：５８２－４．
［７］ ＬｉａｎｇＹＬ，ＤｏｎｇＹＦ，ＬｕｏＪＰ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｓｔｕｄｙｏｎａｎｔｉｈｙｐｅｒ
ｔｅｎｓｉｖｅｅｆｆｅｃｔｏｆｅｔｈａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｏｆｃｏｒｔｅｘＩｌｉｃｉｓＲ
ｏｔｕｎｄａｅｏｎｓｔｒｅｓｓｉｎｄｕｃｅｄｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎｒａｔｓ［Ｊ］．ＣｈｉｎＴｒａｄｉｔＨｅｒｂａｌＤｒｕｇｓ，２００５，２８（７）：５８２－４．
［８］ ＭａＸ，ＣｈｅｎＧ，ＷａｎｇＪ，ｅｔａｌ．Ｐｅｄｕｎｃｕｌｏｓｉｄｅａｔｔｅｎｕａｔｅｓｐａｔｈｏ
ｌｏｇｉｃａｌｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓｏｆｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｌｉｋｅｓｙｎｏｖｉｏｃｙｔｅｓａｎｄｐｒｏｔｅｃｔｓａ ｇａｉｎｓｔｃｏｌｌａｇｅｎ ｉｎｄｕｃｅｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］．ＳｃａｎｄＪＲｈｅｕｍａｔｏｌ，２０１９，４８（５）：３８３－９２．
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８８４·中国药理学通报 ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ ２０２１Ａｐｒ；３７（４）
