•方法研究・掌声的拼音
高中h胶体金法检测2019新型冠状病毒特异性IgM和
IgG抗体假阳性结果原因分析
张淑艳】，袁小美】，李宁一】，刘杰2
(1.解放军总医院京东医疗区医技保障科，北京101149；2.解放军总医院第七医学中心检验科，北京100700)
摘要：目的探讨胶体金法检测2019新型冠状病毒(2019-novel coronavirus,2019-nCoV)特异性IgM和IgG抗体造成假阳性的干扰因素。方法收集2020年6月22日至2020年10月20日来我院就诊的2414例患者采用胶体金法检测的2019-nCoV血清特异性IgM和IgG抗体结果，对其中10例假阳性血清补体灭活处理后用化学发光法重新检测并对结果进行分析。结果10例2019-nCoV特异性抗体假阳性的病例全部为IgM假阳性，IgG抗体无假阳性；10例IgM假阳性病例血清补体灭活后4例IgM抗体转为阴性；10例IgM假阳性血清采用化学发光法检测后8例IgM抗体转为阴性。结论胶体金法检测2019-nCoV特异性IgM抗体干扰因素多，临床应充分考虑假阳性的情况。应结合患者临床表现、影像学检查结果、疫区接触史、核酸检测结果等因素进行综合考虑，避免假阳性结果对临床诊断的误导。
关键词：新型冠状病毒；胶体金法；IgM抗体；IgG抗体
中图分类号：R3739文献标识码：A
An Analysis of the Caus of Fal Positive Results of Colloidal Gold Method in the Detection of2019Novel Coronavirus
Specific IgM and IgG Antibodies
ZHANG Shuyan1,YUAN Xiaomei1,LI Ningyi1,LIU Jie2
(1.Department of Medical Technology Support,Jingdong Medical District of Chine PLA General Hospital,Beijing101149,China；
2.Department of Laboratory Medicine,Seventh Medical Center of Chine PLA General Hospital,Beijing100700,China)
Abstract：Objective Toanalyzeandexploretheinterferencefactorscausingfalpositivereactionsof co l oidalgold method in the detection of2019novelcoronavirus(2019-novelcoronavirus,2019-nCoV)specific IgM and IgG antibodies.Methods The results of the2019-nCoV rum specific IgM and
IgG antibodies detected by the co l oidal gold methodof2414patientswhovisitedourhospital from June22,2020to October20,2020were collected for the study,and10cas of fal positive rumcomplementwerere-detectedbychemiluminescence methodafterinactivationtreatmentand theresultswereanalyzed.Results A l the10fal positive cas of2019-nCoV specific antibody were falpositivesforIgM,and no fal positivesforIgG antibodies wasobrved.4cas of IgM antibodiesturnednegativeafterinactivationtreatmentofthe10fal positive cas of IgM rum complement and8cas of IgM antibody turned negative after chemiluminescence detection of the 10fal positive rum cas of IgM.Conclusion There are multiple interference factorsin the detection of2019-nCoV-specific IgM antibodies by the co l oidal gold method,andthefalpositive
DOI：10.11748//bjmy.issn.l006-1703.2021.02.033
收稿日期：2020-11-17；修回日期：202-0-20
作者简介：张淑艳、刘杰为共同第一作者。
张淑艳（1973—），女，主任技师。主要从事临床免疫学检验相关研究。E-mail:
刘杰，主任技师。E-mail：
正月十六习俗通讯作者：刘杰。
occurrence should be fully considered in the clinical tting.More comprehensive considerations should be given to the patient'clinical manifestations,imaging examination results,contact history in the epidemic area,nucleic acid test results and other factors to avoid misleading clinical diagnosis byfalpositiveresults.
Key words:Novel coronavirus；Colloidal gold method；IgG；IgM
国家卫生健康委办公厅发布的《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第六版）》中以实时荧光反转录PCR和病毒基因测序为2019-新型冠状病毒（2019-novel coronavirus,2019-nCo V）肺炎病原学确诊依据［］。核酸检测由于受标本取材等因素影响检出率低（仅为30%~50%）［3，另外对仪器设备、检测场地和环境条件的要求也较高。2020年3月3日国家卫生健康委员会发布《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第七版）》中，要求确诊病例在原有核酸检测和测序基础上增加“2019-nCoV特异性IgM和IgC 抗体检测”作为临床确诊依据⑷。与病毒核酸检测相比，血清特异性抗体检测操作简单便捷，可以作为病毒核酸检测的有效补充，胶体金法作为经典的免疫学定性检测方法，为了较高的灵敏度，弥补核酸检测检出率低的问题，调低了检测的临界值，故存在“假阳性”的可能［］。本研究采用胶体金法，对我院2020年6月22日至2020年10月20日共2414例血清样本中的2019-nCoV特异性IgM和IgC抗
体进行检测并对假阳性标本进行方法学比对分析，旨在探讨造成假阳性的影响因素，为避免假阳性对临床诊断造成误导提供参考依据。
材料和方法
1研究对象
收集2020年6月22日至2020年10月20日来我院就诊的患者2414例。其中男1350例，女1064例，年龄3~101岁，平均年龄50.3±19.3岁。
2仪器与试剂
2.1试剂采用三种厂家2019新型冠状病毒抗体（IgM+IgG）检测试剂盒，厂家分别为：北京英诺特生物技术有限公司、珠海丽珠试剂股份有限公司和南京诺唯赞医疗科技有限公司。对照试剂为郑州安图生物工程有限公司产品。
联想壁纸22仪器高速离心机（北京京立离心机有限公司），生物安全柜（江苏安泰自动化科技公司），Autolumo A2000Plus全自动化学发光分析仪（郑州安图生物工程有限公司）。
3检测方法
3.1样本采集与处理所有研究对象采静脉血3mL，标本静置15min后3000r/min于生物安全柜内离心15min，取血清备用。
32方法胶体金方法采用免疫层析技术原理，按试剂盒内操作说明书进行操作，肉眼判断结果；Autolumo A2000Plus全自动化学发光分析仪为磁微粒化学发光法，发光物质为鲁米诺。
结果
1三种不同厂家试剂盒检测结果
2414例样本中，用三种不同厂家试剂盒（均采用胶体金法）共检出10例IgM抗体阳性。结果见表1.
表1三种不同厂家试剂盒（胶体金法）10例IgM抗体阳性检测结果
序号临床诊断
抗体检测结果
英诺特（唐山）珠海丽珠南京诺唯赞
1恶性肿瘤IgM(-)IgG(-)IgM(+)IgG(-)IgM(-)IgG(-) 2肿瘤术后化疗I g M(+)I g G(-)I g M(+)I g G(-)I g M(+)I
g G(-) 3肝内多发囊肿I g M(-)I g G(-)I g M(+)I g G(-)I g M(-)I g G(-) 4肺部感染IgM(+)IgG(-)IgM(-)IgG(-)IgM(-)IgG(-) 5慢阻肺IgM(+)IgG(-)IgM(-)IgG(-)IgM(+)IgG(-) 6胆总管结石IgM(+)IgM(-)I g G(-)I g G(-)I g M(-)I g G(-) 7腹痛IgM(-)IgG(-)IgM(+)IgG(-)IgM(+)IgG(-) 8恶性肿瘤IgM(-)IgG(-)IgM(-)IgG(-)IgM(-)IgG(-) 9孕妇I g M(+)I g G(-)I g M(+)I g G(-)I g M(-)I g G(-) 10住院筛查IgM(-)IgG(-)IgM(-)IgG(-)IgM(+)IgG(-)
2补体灭活后抗体检测结果min孵育补体灭活后再次检测，4例IgM抗体阴性，对上述10例抗体阳性患者的血清标本56°C306例血清标本IgM抗体仍为阳性。结果见表2。
表210例阳性样本56C30min孵育补体灭活后抗体检测结果
序号临床诊断
抗体检测结果
英诺特（唐山）珠海丽珠南京诺唯赞
法制征文1恶性肿瘤IgM(—)IgG(—)IgM(—)IgG(—)IgM(—)IgG(—)
2肿瘤术后化疗IgM(+)IgG(—)IgM(+)IgG(—)IgM(+)IgG(—)
模的拼音
3肝内多发囊肿IgM(—)IgG(—)IgM(—)IgG(—)IgM(—)IgG(—)
4肺部感染IgM(+)IgG(—)IgM(—)IgG(—)IgM(—)IgG(—)
5慢阻肺IgM(—)IgG(—)IgM(+)IgG(—)IgM(—)IgG(—)
6胆总管结石IgM(—)IgG(—)IgM(—)IgG(—)IgM(—)IgG(—)
7腹痛IgM(—)IgG(—)IgM(+)IgG(—)IgM(—)IgG(—)
8恶性肿瘤IgM(—)IgG(—)IgM(—)IgG(—)IgM(—)IgG(—)
9孕妇IgM(—)IgG(—)IgM(—)IgG(—)IgM(—)IgG(—)
为民请命的意思10住院筛查IgM(—)IgG(—)IgM(—)IgG(—)IgM(+)IgG(—)
3全自动化学发光分析仪检测结果
10例IgM抗体阳性血清在Autolumo A2000Plus全自动化学发光分析仪进行检测，结果显示8例IgM抗体阴性,2例仍为阳性。结果见表3。
表3两种不同检测方法10例阳性样本抗体检测结果比较序号临床诊断
抗体检测结果
化学发光法胶体金免疫层析法
1恶性肿瘤IgM(+)IgG(—)IgM(+)IgG(—)
第二个青春2肿瘤术后化疗IgM(—)IgG(—)IgM(+)IgG(—)
3肝内多发囊肿IgM(—)IgG(—)IgM(+)IgG(—)
4肺部感染IgM(—)IgG(—)IgM(+)IgG(—)
5慢阻肺IgM(—)IgG(—)IgM(+)IgG(—)
6胆总管结石IgM(—)IgG(—)IgM(+)IgG(—)
7腹痛IgM(—)IgG(—)IgM(+)IgG(—)
8恶性肿瘤IgM(+)IgG(—)IgM(+)IgG(—)
9孕妇IgM(—)IgG(—)IgM(+)IgG(—)
10住院筛查IgM(—)IgG(—)IgM(+)IgG(—)上述10例阳性血清患者采集咽拭子进行新型冠状病毒核酸检测，结果全部为阴性，进一步结合流行病学史、胸部CT结果以及临床表现排除新型冠状病毒感染，10例IgM抗体阳性结果均为假阳性。
讨论
病毒感染机体后，病毒的特定蛋白会刺激免疫系统引起免疫应答产生特异性抗体，最早出现的是特异性IgM抗体，然后是IgG抗体。-gG抗体是机体再次免疫应答产生的主要抗体，提示病情进入恢复期或存在既往感染。2019-nCoVIgM抗体从感染的第7天到第9天呈直线上升，随后逐渐下降，IgG 抗体从感染第7天到第18天呈直线上升状态
特异性IgM和IgG抗体是一对出现有序，此消彼长的标志物。-gM/IgG的动态变化有助于在病毒核酸检测阴性的情况下进行2019-nCoV感染的诊断。
本研究报告的10例假阳性结果中全部为IgM 阳性IgG阴性，显示2019-nCoV IgM的假阳性率明显高于IgG，与张亚楠⑺研究结果一致。在类风湿患者、其他疾病以及正常人血清中，常含有不同浓度的类风湿因子，通常为IgM型，是造成2019-nCoV IgM的假阳性的重要原因之一。表2结果显示，10例阳性血清标本56C30min孵育后有4例IgM抗体转为阴性，分析认为是由补体干扰造成的假阳性。因为来自哺乳动物的固相特异性抗体和标记二抗均可以激活人补体系统。在固相吸附及结合过程中，抗体分子
发生变构、F1段的补体C1q结合位点被暴露出来，这样C1q就成为一个中介物将二者交联起来，从而出现假阳性结果8。
本研究显示10例IgM抗体阳性血清在全自动化学发光分析仪检测，结果显示8例IgM抗体呈阴性，2例阳性，与李晓非等凹报道的2019-nCoV IgM 和IgG化学发光法临床特异性和灵敏度均高于胶体金法的研究结果一致。分析认为原因有两方面：①两种方法对信号的识别灵敏度有差别，化学发光法通过对光子进行收集读取发光度值进行结果判断，而胶体金法是通过肉眼进行判断，易受主观因素影响。②胶体金法在检测2019-nCoV特异性抗体时
需先对IgM或IgG抗体进行捕获后再识别是否为2019-nCoV特异性抗体，部分捕获抗体位点被人体中非特异性抗体占据从而影响灵敏度造成假阳性，而化学发光法基于双抗原夹心法直接对2019-nCoV 抗体进行特异性识别，不受人体内其他非特异性抗体影响，所以化学发光法临床特异性和灵敏度均高于胶体金法.
根据文献[0]报道，孕妇及肿瘤患者血液处于高凝状态，纤维蛋白原升高，干扰试剂包被的特异性抗原容易造成假阳性；另有文献[1]报道，长期服用某种药物或血清中含有异常蛋白或特殊物质，如甲胎蛋白、补体等也会造成假阳性.化学发光法检测的2例IgM抗体假阳性病例均为肿瘤患者，分析认为2019-nCoV IgM抗体假阳性与患者的用药和血清中甲胎蛋白异常升高有关.
胶体金法检测2019-nCoV IgM特异性抗体假阳性的出现，从技术本身而言是无法避免的.国家卫生健康委临床检验中心建议，正确利用及观察IgM/ IgG的动态变化，至少需要两次以上的动态检测以避免因标本中免疫测定干扰物质存在造成假阳性结果，以免对临床诊断进行误导误判[2].
综上所述，胶体金法检测2019-nCoV特异性抗体具有快速、便捷，以及灵敏度和特异性高等优点，可弥补核酸检测条件要求高、耗时长、阳性率较低的不足之处，可作为疾病诊断的重要补充检测手段，但临床上采用抗体检测结果进行疾病评估时，应充分考虑假阳性的情况，并结合患者临床表现、影像学检查结果、疫区接触史、核酸检测结果等因素进行综合考虑从而对是否感染新冠病毒做出正确判断.参考文献
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