长江社区支配不同咀嚼肌的初级运动神经元在三叉神经中脑核团和三叉神经运动核团中的空间分布
林晨官璐; 韩雯斐; 苏俭生; 孟博
【期刊名称】《《口腔颌面外科杂志》》
【年(卷),期】2017(027)005
【总页数】10页(P305-314)
【关键词】杞人忧天的反义词三叉神经中脑核; 三叉神经运动核; 咀嚼肌
活泼可爱的意思【作 者】林晨官璐; 韩雯斐; 苏俭生; 孟博
【作者单位】同济大学口腔医学院·口腔医院修复教研室 上海牙组织修复与再生工程技术研究中心 上海 200072; 华东师范大学脑功能基因组学教育部重点实验室 上海市脑功能基因组学重点实验室 上海 200062
【正文语种】中 文
儿拼音
【中图分类】R782
咀嚼是由头面部肌肉共同参与和协作的一种 节律性运动，主要受到来自位于外侧脑桥网状结构的三叉神经运动核团（trigeminal motor nucleus,Mo5）的控制,并且有研究发现其背外侧区与升颌肌群相关，腹内侧区与降颌肌群相关[1]。三叉神经中脑核（mencephalic trigeminal nucleus,Me5）， 是构成三叉神经感觉神经元的一个分支，在口运动环路中发挥重要作用。Me5主要参与支配同侧闭颌肌运动，不同的咀嚼肌群传入Me5的初级运动神经元分散在各个部位，但尚未有具体研究表明不同咀嚼肌在Me5脑区的具体定位[2]。
本实验以小鼠作为动物模型，使用逆行性荧光示踪技术，研究不同咀嚼肌群在Me5和Mo5的空间和位置分布，为进一步研究相关的面部运动和感觉神经环路奠定基础。
1 材料和方法
1.1 实验动物
8~12周龄雄性C57BL/6鼠，SPF级。由上海市斯莱克实验动物中心供应。
实验方法
1.3.1 实验模型 将逆行性荧光示踪剂Fluorogold（缩写FG，Fluorochrome公司，美国）溶于0.9%生理盐水溶液中，配成体积百分比浓度为4%的液体。使用2.5%氧气加2%异氟烷使小鼠进入麻醉状态。对照颌面肌肉解剖图谱分组找到颧肌（zygomaticus）、颞肌（temporalis）、咬肌（master）、二腹肌前腹（anterior digastric）、翼内肌（medial pterygoid）以及胸锁乳突肌（sternocleidomastoid），详见图1。分离皮层，将注射针头注入肌肉内，设置注射泵参数，每个部位共注射 Fluorogold 20 μL， 每 min注射量 1 μL，持续20 min。注射完毕后在肌肉内停留20 min后取出针头，缝合皮肤，将小鼠放回自由活动。
图1 小鼠面部肌肉分布示意图Figure 1 The schematic diagram of anatomy of facial muscles in the mou
1.3.2 免疫荧光 12 d后FG逆突触标记到初级运动神经元，腹腔注射过量水合氯醛麻醉小鼠，开胸，心尖穿刺，经体循环灌流固定。0.9%生理盐水快速灌流至肝脏发白，4%多聚甲醛溶液灌流15 min后取脑。将取出的脑组织置于4%多聚甲醛溶液中过夜，再用20%蔗糖脱水24 h沉底进行冰冻切片，厚度为40 μm/张。将切好的脑片分为4组，其中3组收集于抗
冻液中4℃保存，取其中1组对照小鼠脑图谱，选择Mo5和Me5所在脑区进行贴片，滴入抗荧光淬灭剂（ThermoFisher公司，美国）后封片。
1.3.3 数据分析 在荧光显微镜下观察脑片，对荧光部位的脑组织同时进行明场以及330 nm紫外光拍摄存档。使用Photoshop以及Illustrator软件将明场所合成脑片及其对应的荧光图像叠加在一起，进行编辑和标记，对照小鼠脑图谱分析标记神经元的分区，记录结果。所有图片右上角标注为脑平面所处空间位置，以前卤（bregma）为坐标原点，与前卤的距离，单位为毫米（mm）。
2 实验结果
2.1 单个肌肉在相关核团的荧光表达
2.1.1 咬肌（master） 结果发现，从咬肌注射后被标记的初级运动神经元同时出现在Mo5和Me5中。如图2，咬肌标记的初级运动神经元，最初位于滑车神经（第4对脑神经记为4n）上方，后向下转移，聚集在小脑上脚 （superior cerebellar peduncle,scp）下方（图 2F-2I）。 随着 4n 消失（图 2H-2I），仍可见支配咬肌的Me5初级运动神经元，从空
间上看咬肌的标记细胞贯穿整个Me5，图3可见，咬肌标记的Mo5神经元刚开始时集中在Mo5的中心区，腹外侧可见零星分布的少量标记细胞。随着向尾部的延伸，前庭蜗神经（第8对脑神经记为8n）和面神经（第7对脑神经记为7n）的出现，标记神经元增多（图3B），占据整个核团的外侧区，随着7n伸长，标记细胞减少，但都集中于背外侧区，腹内侧无任何标记神经元。
2.1.2 颞肌 （temporalis） 颞肌标记的神经元只出现在Me5和Mo5中（图4），但范围跨度小，Me5和Mo5都同时集中于Bregma-5.34 mm的脑平面上。此时小脑（cerebellum,Cb）出现，该平面同时存在三叉神经感觉根（nsory root of the trigeminal nerve,s5）、8n、7n和scp结构。Me5内标记神经元较少，Mo5内标记神经元较多，集中位于核团的背外侧区。
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2.1.3 翼内肌（medial pterygoid） 翼内肌标记的初级运动神经元只存在于Mo5内（图5）。如图5A示，翼内肌标记的Mo5神经元，初始位于核团的外侧区，随着7n和8n出现（图5B），标记细胞出现在核团的腹部，内外侧都有，其中靠近腹内侧的神经元多且比较集中。随着7n伸长（图5C），翼内肌标记的Mo5神经元大部分集中在核团的腹内侧区，另一部零散分布于外侧缘区，中间区域不存在任何表达的荧光细胞。
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图2 荧光示踪剂逆行性注入咬肌后在三叉神经中脑核团中的标记细胞分布（4n：滑车神经，scp：小脑上脚）Figure 2 Distribution of retrogradely FG-labeled neurons in the Me5 after FG injections into the master muscle(4n:trochlear nerve,scp:superior cerebellar peduncle)A：Bregma-4.60 mm冠状脑平面内标记的三叉神经中脑核神经元分布；B：Bregma-4.72 mm冠状脑平面内标记的三叉神经中脑核神经元分布；C：Bregma-4.84 mm冠状脑平面内标记的三叉神经中脑核神经元分布；D：Bregma-4.96 mm冠状脑平面内标记的三叉神经中脑核神经元分布；E：Bregma-5.02 mm冠状脑平面内标记的三叉神经中脑核神经元分布；F：Bregma-5.20 mm冠状脑平面内标记的三叉神经中脑核神经元分布；G：Bregma-5.34 mm冠状脑平面内标记的三叉神经中脑核神经元分布；H：Bregma-5.40 mm冠状脑平面内标记的三叉神经中脑核神经元分布；I：Bregma-5.52 mm冠状脑平面内标记的三叉神经中脑核神经元分布A:The FG-labeled neurons in the Me5 on the coronal plane of Bregma-4.60 mm;B:The FG-labeled neurons in the Me5 on the coronal plane of Bregma-4.72 mm;C:The FG-labeled neurons in the Me5 on the coronal plane of Bregma-4.84 mm;D:The FG-labeled neurons in the Me5 on the coronal plane of Bregma-4.96 mm;E:The FG-labeled neurons in the Me5 on the coronal plane of Bregma-5.02 mm;F:Th爱护环境作文
e FG-labeled neurons in the Me5 on the coronal plane of Bregma-5.20 mm;G:The FG-labeled neurons in the Me5 on the coronal plane of Bregma-5.34 mm;H:The FG-labeled neurons in the Me5 on the coronal plane of Bregma-5.40 mm;I:The FG-labeled neurons in the Me5 on the coronal plane of Bregma-5.52 mm
图3 荧光示踪剂逆行性注入咬肌后在三叉神经运动核团中的标记细胞分布(7n:面神经，8n:前庭蜗神经）Figure 3 Distribution of retrogradely FG-labeled neurons in the Mo5 after FG injections into the master muscle(7n:facial nerve,8n:vestibulocochlear nerve)A：Bregma-5.02 mm冠状脑平面内标记的三叉神经运动核神经元分布在背外侧区；B：Bregma-5.20 mm冠状脑平面内标记的三叉神经运动核神经元分布在背外侧区；C：Bregma-5.34 mm冠状脑平面内标记的三叉神经运动核神经元分布在背外侧区A:The FG-labeled neurons in the Mo5 on the coronal plane of Bregma-5.02 mm are visible in the dorsal-lateral region;B:The FG-labeled neurons in the Mo5 on the coronal plane of Bregma-5.20 mm are visible in the dorsal-lateral region;C:The FG-labeled neurons in the Mo5 on the coronal plane of Bregma-5.34 mm are visible in the dorsal-lateral region
2.1.4 二腹肌前腹（anterior digastric） 二腹肌前腹初级运动神经元只存在于Mo5内（图6A）。初始标记的神经元主要分布在外侧区，随着7n出现 （图6B）转移到腹内侧区，同时还有少量位于中心区偏内侧。直到8n出现（图6C），所有标记神经元都集中在腹内侧区，Mo5标记的区间一直伴有s5和scp的存在。
2.1.5 颧肌（zygomaticus） 如图7~9所示，该部分肌肉的初级运动神经元存在于在Mo5、Me5和面神经核团（7N）中。Mo5内标记细胞多且无特定分区，密集分布在Mo5的整个区间内，并且所在脑平面一直伴有7n、scp出现的标志。
在图8A中可见，标记的Me5神经元伴有4n出现，并逐渐增多，随着第四脑室（4th ventricle,4V）的出现，主要集中在scp下内方，一直延伸到4n消失的脑平面仍然可见被标记的神经元。
同时发现，在面神经核团（7N）中也存在该肌肉标记的初级运动神经元（图9）。对照脑图谱发现，从面神经核团开始出现的地方已存在颧肌标记的神经元，随着向尾端移动，其标记细胞数量并无减少。神经元主要集中于外侧区，并且靠近核团的背端，始终伴有前庭蜗神经神经根 （vestibular root of the vestibulocochlear nerve,8vn）和三叉神经脊束 （spi
nal trigeminal tract,sp5）的解剖标志。
图4 荧光示踪剂逆行性注入颞肌后在三叉神经中脑核团和三叉神经运动核团中的标记细胞分布（Cb：小脑，scp：小脑上脚，7n：面神经，8n：前庭蜗神经，s5：三叉神经感觉根）Figure 4 Distribution of retrogradely FG-labeled neurons in the Me5 and Mo5 after FG injections into the temporalis muscle(Cb:cerebellum,scp:superior cerebellar peduncle,7n:facial nerve,8n:vestibulocochlear nerve,s5-nsory root of the trigeminal nerve)A：Bregma-5.34 mm冠状脑平面内标记的三叉神经中脑核神经元分布；B：Bregma-5.34 mm冠状脑平面内标记的三叉神经运动核神经元分布在背外侧区 （Cb-小脑，scp-小脑上脚,7n-面神经，8n-前庭蜗神经，s5-三叉神经感觉根）A:The FG-labeled neurons in the Me5 on the coronal plane of Bregma-5.34 mm;B:The FG-labeled neurons in the Mo5 on the coronal plane of Bregma-5.34 mm are visible in the dorsal-lateral region
