文章编号:1005-6947(2003)01-0047-03
·简要论著·
M T T法体外测定胃癌化疗药物敏感性
陈亚军1，叶古祥1，孙国娣2
(上海市杨浦区中心医院普外科，上海200090)
摘要：采用MTT法测定89例胃癌细胞对10种化疗药物的体外敏感性，并运用免疫组化法检测
30例肿瘤细胞的多药耐药基因(MDR1)。结果显示89例胃癌细胞对化疗药物的敏感性依次为52
FU>MMC>ADM>HCPT>CBP>CDDP>MXT>MTX>Ara2C>VP16。30例患者中15例MDR1阳
性。笔者认为以MTT法检测胃癌细胞对化疗的敏感性有助于指导临床选用肿瘤敏感性化疗药物，并
可避免盲目选用肿瘤非敏感性化疗药对机体造成的毒性反应。在检测肿瘤对化疗药物敏感性的同
时，应检测多药耐药基因，及时发现耐药病人，以便采用其他有效的治疗方法。醉过知酒浓
关键词：胃肿瘤/药物疗法；药物筛选试验，抗肿瘤;MTT法，肿瘤多药耐药基因
中图分类号:R735.2;R965.1 文献标识码:B
大多数胃癌患者术后需要化疗，有效的化疗药物与化疗方案有助于提高胃癌的总体疗效，因此建立体外抗癌药物敏感性试验来筛选化疗药物，一直是临床化疗中备受瞩目的问题。Mosman(1983)建立的噻唑兰(MTT)显色法优于其他体外化疗药物敏感性试验。本研究用MTT法检测胃癌对体外化疗药物的敏感性，并探讨与肿瘤多药耐药基因(MDR1)之间的关系，为临床选择化疗药物提供参考。
1 材料与方法
1.1 临床资料
孝的成语
本组89例，男54例，女35例。年龄平均为(58.3±12.8)岁。均病理证实为胃癌，其中腺癌52例，低分化腺癌26例，黏液细胞癌6例，印戒细胞癌5例。采用免疫组化二步法———优选即用型一抗加EnVision(DA KO公司提供的EnVision抗体)检测MDR1。
1.2 胃癌细胞制备
术中切取胃癌部分肿瘤组织于无菌条件下快速送实验室。用D2Hanks液反复冲洗3次,RPMI2 1640培养液(内含青、链霉素各200U/ml)适量浸泡10min，剪除脂肪、纤维及坏死组织，选取标本边
收稿日期:2002-03-05; 修订日期:2002-11-15。
作者简介：陈亚军(1964-)，男，安徽淮南人，上海市杨浦区中心医院副主任医师，主要从事胃肠道肿瘤方面的研究。缘生长良好无坏死的癌组织小块，再次用D2Hanks 液清洗，剪碎至约1mm×1mm×1mm大小。对于纤维结缔组织较多、质硬的肿块加入适量胶原酶消化,37℃1h，并不断摇动(对于肿瘤组织质地柔软、含纤维结缔组织较少的标本则无需用胶原酶消化)，然后用吸管反复吸吹，吸取细胞悬液用200目不锈钢筛研磨过滤，不断加RPMI21640液冲洗，收集滤液离心(1000r/min)10min，再洗2次，使癌细胞纯度>90%；并用台盼蓝染色法检测细胞活性，使活细胞数>90%。加入培养液制成细胞浓度为4×105/ml的细胞悬液。取96孔板，每块板除3个空白对照孔以外，每孔加入200(l细胞悬液,37℃5%CO2孵箱培养24h。离心10min(1000r/ min)，弃上清液。
1.3 体外化疗药物敏感性试验
取新鲜配制的培养基，将下列10种化疗药物分别制备成终浓度为0.1×药物血浆峰浓度(ppc),1. 0×ppc及10×ppc3种浓度的溶液，向各孔加入相应的药物，包括52氟尿嘧啶(52FU)，丝裂霉素(MMC)，甲氨喋呤(MTX)，阿霉素(ADM),CDDP, VP16，卡铂(CBP)，阿克拉(Ara2C)，米托恩(MXT)和羟基喜树碱(HCPT)。药物总体积为100μl,37℃5%CO2孵箱培养2d。取出后向96孔板的每孔中加入10mg/ml的MTT20μl，在同样条件下继续孵育4h。取出后离心(2000r/min)10min，弃上清；每孔加入200μl三联试剂,37℃保温过夜。在540nm下测(OD)值。
第12卷第1期2003年1月
恐怖拼音
中国普通外科杂志
Chine Journal of G eneral Surgery
风尘仆仆的意思 Vol.12 No.1
Jan. 2003
1.4 药物对肿瘤的抑制率
抑制率(IR)=[1∃(加药组OD值-不加细胞组OD值)/不加药物对照组OD值]×100%IR,> 50%为高度敏感,30%～50%为中度敏感,<30%为不敏感。
2 结 果
瓶子树89例胃癌体外药物敏感性试验结果见附表。敏感性依次为52FU>MMC>ADM>HCPT>CBP> CDDP>MXT>MTX>Ara2C>VP16。结果显示在0.1ppc时52FU最为敏感，抑制率为40.4%；在1.0 ppc时52FU和MMC最为敏感，抑制率分别为41.6%和38.2%；在10ppc时52FU及MMC仍为最敏感,52FU抑制率为46.1%,MMC抑制率为47. 2%。30例肿瘤标本采用免疫组化法检测MDR1，其中15例阳性。
附表 胃癌体外药物敏感性试验结果
药物
0.1×ppc
不敏感敏感敏感率(%)
1.0×ppc
不敏感敏感敏感率(%)
10×ppc
不敏感敏感敏感率(%)
MMC573236.0553438.2474247.2 ADM602932.6573236.0503943.8 M TX692022.5672224.7553438.2 Ara2C721719.1692022.5573236.0 CDDP612831.5553438.2494044.9 VP16692022.5632629.2612831.5 CBP593033.7553438.2533640.4 52FU533640.4523741.6484146.1 MXT711820.2612831.5553438.
2 HCPT612831.5593033.7494044.9 注：敏感是指高度敏感和中度敏感的病例数之和
3 讨 论
化疗是目前胃癌术后的主要治疗方法。但胃癌的化疗效果并不理想[1]，主要原因是胃癌细胞对化疗药物的敏感性较差，加之临床用药以经验性为主，使疗效难以显著提高。因此，化疗方案的个体化一直是临床十分关注的问题，人们一直希望如抗生素药敏试验一样，建立一种肿瘤化疗药敏试验来筛选最有效的化疗药，为临床化疗个体化提供依据。乞今已建立了多种肿瘤化疗药敏试验方法，但因成功率低和受试条件限制，都未能在临床推广应用。MTT药敏试验方法具有快速、简捷及不使用同位素等优点，且与临床有较好的相关性，是近来临床应用最为广泛的体外药敏试验[2,3]。
本文用MTT法检测了89例胃癌对10种化疗药物的敏感性，结果发现52FU和MMC有效率最高,52FU作为胃癌的首选药物已为大家共识[1,4]。近来，由于CDDP和ADM在其他消化系统肿瘤化疗中取得成功，尤其在食管癌、大肠癌中广泛应用，因此，有人建议胃癌用CDDP或ADM为主药的联合化疗[5]。本研究显示,CDDP与ADM在3种不同检测浓度下对胃癌细胞的抑制率均明显低于52FU与MMC。因此在胃癌的术后化疗中，若无药敏试验的条件，建议采用52FU/MMC的联合化疗方案为宜。
本组有18例患者对所试的10种化疗药物均耐药，其中15例经免疫组化检查MDR1均为阳性。其发生机制可能与这些患者肿瘤细胞高度表达P2糖蛋白(P2glycoprotein,P2gp)和多药耐药蛋白(mul2 tidrug resi
stane protein,MRP)有关。P2gp是由mdr基因表达的分子质量为170kD的跨膜蛋白，具有将胞内的药物泵到胞外的功能[1]，且因多药耐药基因(MDR1)的表达产物P2gp在癌组织中的表达阳性率远较癌周组织高[6]，从而导致耐药。对于这些患者，化疗是无益而有害的。因此，化疗前的药敏试验除可指导用药、避免盲目选用非敏感性化疗药对机体造成不必要的毒性反应外，同时亦能发现耐药的病例。在检测肿瘤对化疗药物敏感性的同时，建议检测多药耐药基因，可以及时发现耐药病例，以便采用其他有效的治疗方法。
本研究显示胃癌细胞对上述10种化疗药物敏感性都不很强。尽管药物浓度增加，但未见敏感性
84中国普通外科杂志 第12卷
大幅度提高。因此目前手术仍是胃癌的主要治疗方法。
然而本研究毕竟是体外试验，胃癌细胞在体内增殖与宿主的代谢、与体内的药物相互作用是非常复杂的，并受到多种因素的调控，所以化疗药物的选择尚需结合临床情况全面考虑。近年来新的化疗药物不断涌现，比如健择、草酸铂等，故受试的药物也要不断更新，才能为临床提供最佳的化疗药物和化疗方案。此外，临床化疗均采用联合用药，尚需建立联合化疗药敏试验，这样更贴近临床。
参考文献:
[1] 韩锐.肿瘤化学预防及药物治疗[M].北京：北京医科
大学中国协和医科大学联合出版社,1991.603-606.
[2] 曾庆华，吕新生，汤辉焕.M TT测定恶性肿瘤细胞对化两次英语怎么读
疗药物的敏感性[J].中国普通外科杂志,2000,9(6):
552-554.
[3] Hongo T,Yajima S,Sakurai M,e t a l.In vitro drug nsitiv2
ity testing can predict induction failure and early relap of child2
hood acute lymphoblastic leukemia[J].Blood,1997,89(3):
2959-2960.
[4] 周际昌.实用肿瘤内科学[M].北京：人民卫生出版社,
骨关节炎治疗1999.480-481.
[5] 汤钊猷.现代肿瘤学[M].上海：上海医科大学出版社,
1993.521.
[6] 俞悦，文跃进，郑肇撰.多药耐药基因MDR1在原发性肝
癌组织中表达的意义[J].肝胆外科杂志,1998,6(1):
56-57.
文章编号:1005-6947(2003)01-0049-02
·简要论著·
胃十二指肠血吸虫病12例报告大学生怎么赚钱
曹道成1，后强1，陶永康2
(1.马鞍山钢铁总公司医院外科，安徽马鞍山243000;2.安徽省马鞍山市人民医院外科，安徽马鞍山
243000)
摘要：为探讨胃十二指肠血吸虫病及其并发症的诊断及治疗。对12例胃十二指肠血吸虫病的
临床资料进行回顾性分析。胃十二指肠血吸虫病多以并发症就诊，主要并发症为胃癌及胃十二指肠
溃疡。12例中并发上消化道出血1例，溃疡3例，胃癌7例。笔者认为：胃十二指肠血吸虫病临床诊
断困难，其主要危害是并发症；合并胃癌者遵循胃癌的治疗原则，合并胃十二指肠溃疡者应强调手术
治疗。
关键词：血吸虫病；胃肠疾病
中图分类号:R532.21;R57 文献标识码:B
近年来，血吸虫病发病率明显下降，但局部地区仍有发病报告，长江流域的洪涝灾害使血吸虫病的发病率有上升趋势。近30年来笔者收治的胃十二指肠血吸虫病12例，为提高对该病的认识，现报告如下。
收稿日期:2002-04-01; 修订日期:2002-08-21。
作者简介：曹道成(1963-)，男，安徽巢湖人，马鞍山钢铁总公司医院副主任医师，主要从事消化道
肿瘤的基础及临床研究。1 临床资料
1.1 一般资料
本组男11例，女1例。年龄44～70岁。均有血吸虫疫水接触史。
1.2 临床表现及诊断
上腹隐痛不适11例，上消化道大出血1例。行胃镜检查9例，胃肠钡剂造影10例，仅1例胃镜黏膜活检见血吸虫卵沉积而确诊。余11例诊断为十二指肠球部溃疡1例，十二指肠球部溃疡穿孔1例，胃窦部溃疡2例，胃癌7例。
94
第1期 陈亚军，等:M TT法体外测定胃癌化疗药物敏感性
