健康研究
Health Rearch
第41卷第1期
2021年2月
Vol.41 No.1Feb. 2021
dl ： 10.19890/jki.Asn1674-6449.2021F)1.008
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基础理-及/制研2
蔡海荣，王平，金百冶.mibNA-29o 在前列腺癌中的表达及其临床意义[J].健康研究,2021,41( 1) &30-34.
miRNA-29c 在前列腺癌中的表达及其临床意义
蔡海荣1>2，王 平3，金百冶3
(1.浙江大学医学院，浙江杭州310002#2.浙江台州市立医院泌尿外科， 浙江台州318000#3.浙江大学医学院附属第一医院泌尿外科，浙江杭州310006)
荷包蛋面
摘要：目的 通过检测mibNA-29o 在前列腺癌患者中的表达量，探讨其对前列腺癌诊断的意义。方法 收集40例
庚信
列腺癌 血清及其癌和癌 、30例 列 生 血清、30例健康 血清，采用 光定量PCR 法
检测mibNA-29o 的表达水平。结果 mibNA-29o 在前列腺癌、前列腺增生及健康对照血清中的表达量分别为
(0. 357±0, 012)、(0. 836±0, 023)和(0. 818±0, 015)，在前列腺癌患者血清中miRNA-29c 的表达量显著低于前列腺 生患者及健康
，差异有统计学意义(P<0.05), 列
生和健康对照组中表 统计学意义(P>
0.05)。前列 癌患者血清中mibNA-29o 的表 Gleason 评分、临床分期及有无远处转移上差异具有统计学
意义！P<0. 05)，而不同血清前列腺抗原(PSA )水平的患者间差异无统计学意义!P>0. 05) ；mmNA-29c 在前列腺癌
组织中的表达量明显低于其癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)%结论miRNA-29c 在前列腺癌中低表达，可
能参与前列腺癌的发生、发展
， 为前列腺癌早期诊断和预 的指标。
关键词：前列腺癌;miRNA-29c ；实时定量PCR #肿瘤标志物
中图分类号:R737
文献标志码:A 文章编号：1674-6449( 2021) 01-0030-05
Expression and clinical signiPcancc of miRNA-29c in prostate cancer
CAI Hairong 1，2，WANG Pbg 3，JIN Baiya 3
(1. Zhejiang University School oo Medtne ，Hangzho 310002，China ； 2. DepaCment
O Urology ，Taizhoc Montpal Hospital ， Taizhof318000，China ； 3. Degartment f Urology ，
The Fir s i 弘四,/。/，Zhejiang Univer s P o ScCool f Medt,n r ，Hangzho o 310006，China )
Abstract : Objective To investigate the significance of miRNA-29c in diagnosing prostate cancer by detecting the
expression of miRNA-29c in prostate cancer patients. Methods We detected the expression of miRNA-29c in adjacent ii s uesand eum eom 40 paiieniswiih peosiaiecanceeand iheeum miRNA-29c eom 30 paiieniswiih benign peosiaiic
hyperplasia and 30 healthy controls using real-—me fluorescence quantitative PCR. Resiilts The rum microRNA -29c Uvels in prostate cancer ，benign pro s tatic hyperplasia ，and healthy controls were 0.357±0.012，0.836±0.023，and 0.818±
0.015，respectively ，showing a significant lower level of miRNA-29c in the rum of prostate cancer patien — than in benign
prostate hyperplasia or the healthy controls (P<0.05) . There was no swys/cally significant expression of microRNA -29c in
收稿日期：2019-12-05
基金项目：国家自然科学基金(81772270)
作者简介：蔡海荣(1980 -"，男，浙江温岭人，硕士，副主任医师％通讯作者：金百冶(1964 -"，男，浙江杭州人，博士，主任医师％
第1期蔡海荣，等:miRNA-29c在前列腺癌中的表达及其临床意义31
benign postage hyperplasia and healthy controls(P>0.05).The rum miRNA-29c in prostate cancer patients were smtisticaVy significant(P<0.05)in terms of ddferent Gleason scores,clinical stage and distant metastasis,while the dRferences between patients with various rum prostate antigen(PSA)dvels were no-smtisticaVy significant(P>0.05). The expression of miRNA-29c in prostate cancer tissues was significantly lower than its adjacent tissues(P<0.05). Conclusions miRNA-29c was lowly expresd in prostate cancer and may be invaded in the development and progression of prostate cancer,which can be ud as an early diagnosis and prognostic indicator of prostate cancer.
Key words:Prostate cancer；miRNA-29c；oal-Ume fuorescenco quantitative PCR;tumor marker
前列腺癌(postaia cancar,PC)是男性中最常见的恶性肿瘤之一，其发病率呈逐年上升趋势。据美国最新2019年研究调查数据显示，前列腺癌在美国十大癌症新发病率中上升至第1位，其所致死亡数高居美国男性癌症相关死亡第二位⑴；同样，前列腺癌在我国的发病率亦呈逐年上升趋势。目前临床主要
是通过检测前列腺特异性抗原(postaie spacific antigen,PSA)表达水平来进行筛查和早期诊断，然而PSA作为前列腺癌早期诊断的标志物缺乏敏感性和特异性。因此，积极寻找新的诊断标志物来联合PSA作为前列腺癌早期诊断标记，是当前研究的热点叫
MicoRNA(miRNA"是一类调节蛋白编码的内源性小分子单链RNA，其主要通过与信使RNA的特定序列结合，从而抑制翻译或剪切RNA转录物来对基因进行转录后表达的调控(3]%miRNA-29c在许多实体肿瘤如神经胶质瘤、肝细胞癌、胃癌、结肠癌、膀胱癌中均呈低表达，并且起到抑癌基因作用。然而,miRNA-29c在前列腺癌中的作用和潜在机制尚不明确。本文通过检测miRNA-29c在前列腺癌患者中的表达量，探讨其在前列腺癌中的诊断价值。
1材料与方法
1.1研究对象选择选取本院泌尿外科2015年1月一2017年1月收治的40例前列腺癌患者，纳入标准:①经病理切片证实;②首次诊断％排除标准:①他处具有原发性肿瘤;②术前具有放化疗治疗;③不配合实验者。患者年龄48-82岁，平均(64.5±9.8)岁，其中年龄"60岁26例，＜60岁14例。将肿瘤按2016AJCC TNM分期进行分期：I期17例, .期7例，/期11例,0期5例；将前列腺癌按病理Gieason：高癌26例(Gieason2-6
分)冲分化腺癌8例(Gdason7分)，低分化腺癌6例(Gdason8~10分)。同期选取前列腺增生(BPH)患者30
例，平均年龄(61.9±8.44)岁；健康体检男性30例，平均(42.13±9.22)岁。所有患者疾病确诊前后均未进行任何治疗。
1.2主要试剂和仪器RNA抽提试剂Tizol购自Invitrogen公司，逆转录试剂盒、SYBR Premia ExTaq 试剂盒均购自TaKaRv公司，miRNA-29c、U6逆转录引物和PCR上下游引物均由广州Ridobia生物科技有限公司提供。实时荧光定量PCR仪器购自美国BD-Rad有限公司。
1.3标本收集和处理收集40例前列腺癌患者血清及其癌和癌旁组织、30例前列腺增生患者血清及30例健康体检男性血清。前列腺癌患者新鲜静脉血2mL，以2000r/min在离心机上离心10min，吸取其上清液移至2mL离心管中，再以12000r/min 离心2min，吸取上层无细胞血清200i L至2mL EP中，放置-800冰箱中保存待测％用TRIzol试剂盒，根据操作说明提取各血清样本中的总RNA，并测定总RNA浓度及纯度，取吸光度比值为1.8-
2.1的样品用于后续试验。前列腺癌及癌旁组织标本直接放入液氮中保存备用；同样使用TRIzol试剂盒提取癌及癌旁组织标本的总RNA。取400ng总RNA,TaKaRv逆转录反应试剂盒酶进行逆转录反应，反应体系为10i L，包括5xP/meSc/pi Buffer2 i L,PrimeScapt RT Enzyma Mia I0.5(jl L,O-gv dT Pemer(50j M)0.5j L,Random6mers(100j M) 0.5j L，补无酶水至10j L反应条件为37015 min(反转录反应),8505S(反转录酶的失活反应)，40，产物置于-200冰箱保存备用。
1.4miRNA-29c的表达水平测定根据TRIzol试
操明提的RNA,RNA 浓度；然后依据逆转录试剂盒操作说明，以U6作为内参，将样本分别逆转录成为cDNA；再以U6作为内参,SYBR©Premia E t Taq II聚合酶、miRNA-29c 引物和SYBRGoen荧光染料进行实时定量逆转录
32
健康研究2021 年
聚合酶链反应(qRT-PCR ), miRNA-29c 引物序列:
上游序列 5qUGACCGAUUUCUCCUGGUGUUC 一3役下
游序列 5/-UAGCACCAUUUGAAAUCGGUUA-3/ $ 其中
以U6作为内参引物，其上游引物为5-CTCGCT-
TCGGCAGCACA - 3-下游引物为 5 — AACGCT- TCACGAATTTGCGT-3-相对表达量计算公式为 RQ=2 - △△CT %
1. 5 统计学处理 应用SPSS 2
2. 0统计软件对实
验数据进行 ，计量资料2组间比较用t
验， 间比较采用方差 % P<0. 05为差异具
有统计学意义％
:P<0. 001
图1 miRNA-29c 在前列腺癌！PCA )、良性前列腺 增生(BPH "和健康 (NC )血清中的 表达量
2结果
2. 1 miRNA-29c 的表达水平 前列腺癌患者、BPH 者
和健康体检者血清中miRNA-29c 的表达量分别为
(0. 357±0. 012)、(0. 836±0.023)和(0. 818±0.015)% 前 列腺癌患者血清中miRNA-29c 的表达水平
于
BPH 和健康体者，差异均有统计学意义(P<0.001)；
BPH 组和健康
血清中的mibNA-29c 表达水平
差异无统计学意义(P 〉0.05)%见图1%
表1
不同临床病理参数前列腺癌患者的血清miRNA-29c 表达水平比较
2.2 血清miRNA-29c 表达变化与PC 患者临床病
理相关参数的相关性 对前列腺癌患者临床病理相
关参数进行 (表1), 提：
Gleason
、 期 否
的患者间血清miRNA-29c 表
平差异有统计学意义(P<0. 001)，不
血清前列腺抗原(PSA )水平的 间差异无统计学
义( P >0.05) %
临床参数
例数(n)
miRNA-29c 的表达量
年龄/岁
"60
<60
血清 PSA/(n/mL )A "10
<10
Gleason 评分/分"7<7
期I 期，.期/期$0期转无有
骨0.375
0.645
260. 356±0. 01514
0. 358±0. 018 1.5080.061
330.382±0.0227
0.396±0.017
18.428
<0.001
140.284±0.036260.465±0.026
11.499<0.001
240.366±0.021160.296±0.015
19.990
<0.001
320.341±0.0138
0.241±0.011
P
2.3 前列腺癌患者癌组织中的miRNA-29c 表达水
平 RT-PCR 检测结果显示，miRNA-29c 在40例前
列腺癌实体 癌 中的表达水平分
别为(0. 86±0. 038)、( 1. 38±0. 072) ,2 间差异具
有统计学意义(P<0. 05)，见图2%
P<0.05
图2 miRNA-29c
在前列腺癌及其癌旁组织中的表达水平
第1期蔡海荣，等:miRNA-29c在前列腺癌中的表达及其临床意义33
3讨论
迄今为止，前列腺癌的发病机制仍然没有明确，早期前列腺癌患者接受及时有效的治疗后，大部分能得到比较好的恢复，但由于前列腺癌早期无明显的临床特征，出现症状时，往往已经处于晚期。临床上对前列腺癌早期筛查主要是通过检测前列腺特异性抗原(PSA)，且PSA是前列腺癌诊断及预后的常用指标，诊断前列腺癌的PSA标准临界值为4ng/L，然而当PSA值为4~10ng/mL时(即PSA灰区)，前列腺癌的检出率不超过30%⑷，同时PSA又容易导致对前列腺癌的诊断和治疗过度[5]；此外PSA在前列腺增生及前列腺炎患者中有时同样会出现一定程度的升高，这就使其在临床上的应用产生局限性。
miRNA是一种内源性非编码RNA，主要通过特异性结合靶基因mRNA的3，-UTR序列，从而起到调控目的基因的表达及翻译作用,miRNA参与机体内60%以上的基因调控网络[6]。作为转录后调控序列，miRNA参与机体的各种生理功能，在肿瘤发生、发展过程中发挥着重要作用[7_9]%某些miRNA 表达与多种恶性肿瘤相关，起着抑癌基因及癌基因的作用，有些甚至与恶性肿瘤的诊断预后相关(10-1)%miRNA-29家族包括miR-29—b/c,miR-NA-29c位于第1号染色体，是此家族主要成员，miRNA-29a/b/c只是2个或者3个碱基不同，miR-NA-29a和miRNA-29c主要通过RNA诱导沉默复合体！RNA induced silencing complex RISC)机制发挥作用,miRNA-29b主要通过其他机制调节靶基因的表达[12]。该家族成员在恶性肿瘤细胞的表达都出现异常且执行抗肿瘤的作用，其成员在功能上具有重叠的地方，如转录调控、细胞凋亡、表观遗传修饰等[13]%虽然成熟的miR-29a/b/c序列高度相同，然而miRNA-29家族中不同亚型各自发挥其独特的功能[14]%miRNA-29c在许多实体肿瘤如乳腺癌、胞癌、癌、癌等中表，起到抑癌基因作用“5-7]%如在三阴性乳腺癌癌前病变中，miRNA-29c及其下游通路起到重要调节作用[18]；在胃癌中，miRNA-29c可以通过和RCC2靶向结合，降低其表达，从而起到抑制胃癌增殖的能力[19]；在膀胱癌中，miRNA-29c通过调控靶基因CDK6起到抑制其增殖与侵袭的作用[20]；此外，Zhang等(21)研究发现在结直肠癌中miRNA-29c呈表，SPARC确为miRNA-29c的，其沉默可降低肠癌细胞增殖和迁移％最近研究发现miRNA-29c列癌的展起制用，如Li等[22]研究发现上调的miRNA-29c通过抑制前列腺癌中的SLC2A3基因表达来抑制其细胞增殖和糖酵解％
在本研究中，我们发现miRNA-29c在前列腺癌患者血清中的表达量显著低于BPH患者和健康对照者，而BPH患者和健康对照者间无显著性差异%进一步分析发现Gleason评分"7分、//0期、有骨转移的前列腺癌患者的miRNA-29c表达量明显低于＜7分、I/II期、无骨转移的患者，可见miRNA-29c的表达水平随着临床分期的增加而进一步下降，而与血清前列腺抗原(PSA)水平无明显相关%因此，可以通过检测血清miRNA-29c的表达水平来区分前列腺癌患者与健康者，为临床上对前列腺癌患者的早期诊断提供可靠依据％此外，miRNA-29c 在Gleason评分及临床分期越高的前列腺癌患者中表达越低,Gleason评分代表前列腺癌的肿瘤分化程度，积分为2、3、4分者属于高分化腺癌；5、6、7分者属于中分化腺癌;8、9、10分者属于低或者未分化癌，据miRNA-29c能参与列癌的发生、发展过程及侵袭转移过程％
综上所述，目前对于前列腺癌的早期诊断，缺乏灵敏度和特异度较高的诊断标志物，需要寻找具有较高灵敏度及特异度的诊断标志物来进一步提高前列腺癌患者的诊断率。本研究结果提示miRNA-29c 列癌血清中表，miRNA-29c的表达与前列腺癌临床分期、病理学分级和远处转移等具有相关性，低表达的miRNA-29c可能参与了前列癌的生、展，列癌
的早期诊断及预后判断中具有一定价值％
参考文献：
(1]MPH L S R,MPH D M K,PHD J DA.Cancer statistics,2019(J].
CA Cance eJ C iin，2019，69!1):7-34.
(2]FELGUEIRAS J,SILVA J V,FARDILHA M.Prostate cancer：the
need for biomarkerr and new therapeutic taraets(J].J Zhejiang Univ-Sc B,2014,15(1)：16-42.
(3]O'DONNELL K A,Wentzel E A,Zeller K I,et al.c-Myc-ogulated
miceoRNAs moduiate E2F1eTpee s ion(J].Natuee，2005，435
(7043):839-843.
(4]STAMEYTA，JOHNSTONEIM，McNEALJE，etai.Peeopeeatiee
eum peostatespecieicantigen ieeeisbetween2and22ngcm1coe-eeiatepooeiy with post-eadicaipeostatectomy canceemoephoiogy:
34健康研究2021年
peosiaiespecioicaniigen cueeeaiesappeaeconsianibeiween2and9 ng/mL[J).J Urology,2002$167(1)：103-111.
(5)STEUBER T,VICKERS A J,SERIC A M,et al.Comparison of
oeeeand ioiaeooemsooeumhuman ka e ikeein2and peosiaie-specioic antigen for prediction of locally advanced and recurrent prostate cances[J).din Chem,2007,53(2):233-240.
[6)FABRIS L,CEDER Y,CHINNAIYAN AM,et al.The potential of
miceoRNAsaspeosiaiecanceebiomaekees[J).EueUeoe,2016,70
(2)：312-322.
[7)MOTTJL,KOBAYASHIS,BRONKS F,eiae.miR-29eegueaies
Mcl-1protein expression and apoptosis[J).Oncogene,2007,26
(42)：6133.
[8)ZHAO J J,LI J,LWI T,et al.microRNA expression profile and
id+niioicaiion oomiR-29asapeognosiicmaek+eand paihog+n+iicoac-ioebyiaeg+iingCDK6in maniec+e eymphoma[J).Beood,2010,115
(13)：2630-2639.
[9)BRACONIC,KOGURET,VALERIN,+iae.miceoRNA-29can
reaulate expression of the long non-coding RNA gene MEG3in hepa-ioce e ueaecancee[J).Oncogene,2011,30(47)：4750.
[10)PETRI A,LIDOW M,KAUPPIEN S.MicroRNA silencing in
pamates:towards development of novel therapeu—cs[J).Cancer
Res,2009,69(2)：393-395.
[11)KUMAR B,LUPOLD S E.MicroRNA expression and function in
prostate cancer：a review of current knowledge and opportunities for
disccvera[J).Ayan J Androl,2016,18(4)：559.
[12)WANG Y,ZHANG X,LI H,et al.The role of miRNA-29family
b cancer[J).Eur J Cell Biol,2013,92(3):123-128.
[13)KRICGEL A J,LI Y,FANG Y,et al.The miR-29family：ge
nomics,cell biology,and relevancy to renal and cardiovascular ia-
宝宝不会说话
.呼]J).Phy/m Genomics,2012,44(4)：237-244.
[14)SCHMITT M J,MARGUEC,BEHRMANNI,eia.miRNA-29：a
microRNA family with tumor-suppressing and immune-modulatmg
properties[J).Eur s Mol Med,2013,13(4)：572-585.
[15)LI W,YI J,ZHENG X,et al.miR-29c plays a suppressive role in
breast cancer by tarveting the TIMP3/STAT1/FOXO1pathway[J).
Clin epigenetics,2018,10(1):1-14.
[16)WU H,ZHANG W,WU Z,et al.miR-29c-3p reaulates DNMT3B
and LATS1meWylation to inhibit tumor progression in hepatocellu
lar carcinoma[J).Eell Death Dis,2019,10(2):1-18.
[17)JIANG H,LI Z N,CHENG XH,et al.miR-29c suppress cell
invasion and migration by directly tarveting CDK6in gastric carci-
noma[J).Eueeeemed phaema9o,2019,23(18)：7920-7928. [18)BHARDWAJ A,SIGHH,RAJAPAKSHE K,et al.Reaulation of
miRNA-29c and its downstream pathways in preneoplastic progres
sion of wiple-neaative breast cancer]J).Oncotaryet,2017,8(12):
19645.
[19)MATSUO M,NAKADA C,TSUKAMOTO Y,et al.mib-29c is
downregulated in gastro carcinomas and reaulates cell prolmeration
by tarve-ng RCC2[J).Mol cancer,2013,12(1):1-9.
[20)ZHAO X,LIJ,HUANG S,eia.miRNA-29ceegu aiesce'
geowih and ineasion byiaegeiingCDK6in b addeecancee[J).AmJ
Teans'Res,2015,7(8):1382.
[21)ZHANGS,JINJ,TIANX,eia.hsa-miR-29c-3p eegu aiesbio-
logical function of colorectal cancer by Wryeting SPARC[J).0111-文章推荐
tarvet,2017,8(61)：104508.
[22)LIJ,FUF,WANX,eia.Up-eegu aied miRNA-29cinhibiisce'
汉字草书proliferation and glycolysis by inhibiting SLC2A3expression in
peo<iaiecancee[J).Gene,2018,665:26-34.
(上接第21页)
[6)杨洋，王树玉•男性不育影响因素的研究进展[J).中国优生与遗
,2011,19(10):131-132.
[7)阎一鑫，郝娜，张文华，等•兰州地区4537例不育男性患者精液
质量分析[J)•中国生育健康杂志,2017,28(2):174-177.
[8)周侃，陈志刚，陈月婵•石河子地区6178例男性精液质量评估及
其与年龄的相关性探讨[J)冲国优生与遗传杂志,2018,26(4)：104-106.
[9)肖宇，张慧娜，黄永刚，等•不育门诊男性体质量指数与精液质量
的相关性研究[J) •中华生殖与避孕杂志，2013,33(10":677-681.
[10)BICNICK J M,KASHANIN J A,DEICERT C M,et al.Deue:cc
of increasing body mass index on men and reproductive hormonal parameters in a multi一institutional cohoa of sub fertile men[ J).抗美援朝70周年
Feral S—rii,2016,106(5)：1070-1075.
[11)MAC KENZIC K M,ANGEVIE D MAnfertility in mice expod in
utero to benze(a)pyrene[J).Eiol Reprod,1981,24(1):183-191.
[12)CHIA S E,XU B,ONG C N,et al.Effect of cadmium and cigarette
smoking on human men quality[J)Ent0Fertil Menopausal Study, 1994,39(5):292-298.
[13)武俊青，李玉艳，高尔生，等•吸烟对精液质量常规指标影响的研
究[J) •中华流行病学杂志,2012,33(12):1228-1232.文档恢复
[ 14)HARLEVA,AGARWALA,GUNES S O,eia.Smokingand mae infertility:an evidence-bad review[J).Worll J Mens Heal—, 2015,33(3):143-160.
[15)王东•电磁辐射对精子质量的影响及其相关机制研究[D)•西
安：第四军医大学,2015.
[16)梁荣喜，薛恩生，林礼务，等•精索静脉曲张超声分型与手术前后
精液质量变化对比研究[J) •中华男科学杂志,2008,14(4)：347 -350.
