P504s、CK—HMW、p63、S—100蛋白与前列腺癌
病理分级的关系
段凯军李青
(河南省商丘市第四人民医院病理科商丘476100)
摘要：目的：探讨前列腺癌病理分级与琢-甲酰基辅酶A-消旋酶、人高分子量细胞角蛋白、p63蛋白及S-100蛋白的关系。方法：收集2017年1月〜2020年10月前列腺穿刺活检标本，前列腺癌标本92例，纳入PCa组；良性前列腺增生标本80例，纳入BPH组。所有标本均行免疫组化检测琢-甲酰基辅酶A-消旋酶和人高分子量细胞角蛋白、p63、S-100蛋白的表达，光镜下观察前列腺癌患者病理组织学形态，进行Gleason分级评分。比较琢-甲酰基辅酶A-消旋酶、人高分子量细胞角蛋白、p63、S-100蛋白在PCa 组、BPH组中的表达阳性率，以及在不同Gleason分级中的表达强度，采用Spearman相关性分析琢-甲酰基辅酶A-消旋酶水平、人高分子量细胞角蛋白、p63、S-100蛋白表达强度与Gleason分级的相关性。结果：琢-甲酰基辅酶A-消旋酶在PCa组中表达阳性率高于BPH组，人高分子量细胞角蛋白、p63、S-100蛋白在PCa组中表达阳性率低于BPH组(P均<0.05)；PCa组中Gleason评分W 7分者琢-甲酰基辅酶A-消旋酶表达强度低于Gleason评分〉7分者(P<0.05)，人高分子量细胞角蛋白、p63、S-100蛋白在PCa组不同Gleason分级中的表达强度差异无统计学意义(P〉0.05)。Spearman相关性分析结
果显示，Gleason分级与琢-甲酰基辅酶A-消旋酶表达强度呈正相关性(1=0.632,P<0.05)，与人高分子量细胞角蛋白(r=0.212,P〉0.05)、p63(r=0.197,P〉0.05)、S-100蛋白(1=0.244,P>0.05)表达强度无显著相关性。结论：琢-甲酰基辅酶A-消旋酶、人高分子量细胞角蛋白、p63、S-100蛋白在前列腺癌的鉴别诊断中有重要应用价值，琢-甲酰基辅酶A-消旋酶可作为评价前列腺癌病情与预后的重要参考指标。
关键词：前列腺癌；病理分级；琢-甲酰基辅酶A-消旋酶；高分子量角蛋白；p63蛋白；S-100蛋白
Relationship Between P504s,CK-HMW,p63Protein and S-100Protein and Pathological Grades of Prostate Cancer
DUAN Kai-jun,LI Qing
(The Department of Pathology,the Fourth People's Hospital of Shangqiu,Henan,Shangqiu476100) Abstract:Objective:To explore the relationship between pathological grades of prostate cancer and琢-formyl coenzyme A-racema,Human high molecular weight cytokeratin,p63protein and S-100protein.Methods:From January2017to October2020,92 prostate cancer specimens were included in PCa group;80benign prostatic hyperplasia specimens were included in BPH group.The expressions of琢-formyl coenzyme A-racema,Human high molecular weight cytokeratin,p63protein,
S-100protein were detected by immunohistochemistry.The histopathological morphology of prostate cancer patients was obrved under light microscope,and Gleason grading was performed.The levels of琢-formyl coenzyme A-racema,the positive rates of Human high molecular weight cytokeratin,p63 protein and S-100protein expression in PCa group and BPH group,and the expression intensity of the indicators in different Gleason grades were compared.The correlation between琢-formyl coenzyme A-racema,Human high molecular weight cytokeratin,p63protein, S-100protein expression intensity and Gleason grades were analyzed by Spearman correlation analysis.Results:The positive rate of 琢-formyl coenzyme A-racema expression in PCa group was higher than that in BPH group,while the positive rates of Human high molecular weight cytokeratin,p63protein and S-100protein expression in PCa group were lower than tho in BPH group(all P<0.05). The expression intensity of琢-formyl coenzyme A-racema of patients with Gleason score W7points in PCa group was lower than that of patients with Gleason score>7points(all P<0.05);but there was no significant difference in the expression intensity of Human high molecular weight cytokeratin,p63and S-100protein in different Gleason grades of PCa group(P>0.05).Spearman correlation analysis showed that Gleason grade was positively correlated with琢-formyl coenzyme A-racema expression intensity(r=0.632,P<0.05),but not with Human high molecular weight cytokeratin(r=0.212,P〉0.05),p63(r=0.197,P〉0.05)and S-100protein(r=0.244,P〉0.
美女照片大全05). Conclusion：琢-formyl coenzyme A-racema,Human high molecular weight cytokeratin,p63protein and S-100protein have important application value in the differential diagnosis of prostate，琢-formyl coenzyme A-racema can be ud as an important reference index for evaluating the dia condition and prognosis of prostate cancer.
Key words:Prostate cancer;Pathological grades；琢-formyl coenzyme A-racema;Human high molecular weight cytokeratin;p63 protein;S-100protein
中图分类号：R737.25文献标识码：B doi:10.13638/j.issn.1671-4040.2021.04.004
前列腺癌是我国发病率位居前二的男性恶性肿瘤，由于发病隐匿、早期症状不明显，多数患者确诊时已为晚期。随着直肠超声前列腺穿刺活检技术及血清前列腺特异性抗原(PSA)的应用，前列腺癌的早期检出率已显著提升叭前列腺穿刺活检是诊断前列腺癌的可靠手段，但活检获得的样本量有限，且在病变不典型的情况下，单凭光镜镜检、苏木精-伊红染色(HE染色)，很难对微小病灶做出明确诊断叫前列腺癌病理诊断强调肿瘤细胞异形性、浸润现象及腺体结构异常，而前列腺癌的病理形态差别不大，
光镜下进行病理诊断较为困难，故需要免疫组化协助诊断叫本研究分析免疫组化指标琢-甲酰基辅酶A-消旋酶（P504s）、人高分子量细胞角蛋白（CK-HMW）、p63蛋白、S-100蛋白与前列腺癌病理分级的关系，探讨其对前列腺癌诊断的意义。现报道如下：
1资料与方法
1.1一般资料收集我院2017年1月〜2020年10月前列腺穿刺活检标本，前列腺癌标本92例，纳入PCa组；良性前列腺增生标本80例，纳入BPH 组。纳入标准：经组织形态学检查，参考免疫组化结果最终确诊为前列腺癌或良性前列腺增生；首次就诊病例。PCa组年龄46~79岁，平均（66.21±7.62）岁；Gleason分级评分［4］：^7分44例，＞7分48例。BPH组年龄47~82岁，平均（65.73±7.79）岁。两组年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。
1.2检测方法所有标本行免疫组化检测P504s，CK-HMW、p63、S-100蛋白的表达，光镜下观察PCa 组标本病理组织学形态，进行Gleason分级评分。1.
2.1常规病理观察将获取的标本采用体积分数为10%的甲醛液固定，石蜡包埋，连续切片，行常规HE染色。根据HE染色切片中肿瘤组织学形态，观察切片中组织形态结构、排列方式及肿瘤浸润情况、间质变化。
1.2.2免疫组织化学检测采用免疫组化实验（SP）法进行检测。试剂盒：链霉菌抗生素蛋白-过氧化物酶与生物素标记的第二抗体与底物色素混合液；抗体：小鼠抗CK-HMW单克隆抗体、DAK-p63抗体、兔抗人P504s单克隆抗体（13H4）、兔抗人S-100多克隆抗体，均来自Dako公司。染色步骤：石蜡切片进行脱蜡、水化，并采用自来水冲洗；按照第一抗体相关要求，对组织进行抗原修复；去除磷酸缓
冲盐溶液，过氧化物酶阻断试剂滴于切片，孵育10 min（室温）；去除血清，第一抗体滴加在切片上，孵育60min（室温）或过夜（4°C），磷酸缓冲盐溶液冲洗3min，反复冲洗3次；去除磷酸缓冲盐溶液，将生物素标记的第二抗体滴加于切片上，孵育10min （室温），再采用磷酸缓冲盐溶液冲洗3min，反复冲 洗3次；去除磷酸缓冲盐溶液，链霉菌抗生素蛋白-过氧化物酶滴加于切片，孵育10min（室温），磷酸缓冲盐溶液冲洗3min，反复冲洗3次；去除磷酸缓冲盐溶液，将新鲜配制的DAB显色试剂滴加于切片上；采用自来水冲洗，终止显色，再以苏木素复染，磷酸缓冲盐溶液返蓝；对切片进行梯度乙醇脱水处理，二甲苯透明化，并采用中性树胶封固。
1.2.3免疫组织化学结果评估［5］由2名病理医师对免疫组织化学结果进行判断。显微镜下随机选择5个视野，计算各视野中阳性细胞数占上皮细胞总数百分比，并结合染色强度进行评分。阳性细胞占比＜1%记0分，阳性细胞占比2%~25%记1分，阳性细胞占比26%~50%记2分，阳性细胞占比51% ~75%记3分，阳性细胞占比〉75%记4分。染色强度：无染色记0分，弱染色记1分，中等染色记2分，强染色记3分。阳性细胞占比评分与染色强度评分相乘为总分，根据总分分为：-,0〜1分;+,2〜4分；++,5~8分;+++,9~12分。
1.3观察指标比较P504s,CK-HMW、p63、S-100蛋白在PCa组、BPH组中的表达阳性率，及P504s, CK-HMW、p63、S-100蛋白在不同Gleason分级中的表达强度；采用Spearman相关性分析P504s, CK-HMW、p63、S-100蛋白表达强度与Gleason分级的相关性。
1.4统计学方法以SPSS20.0统计学软件及Origin8.0软件进行数据处理及绘图。计数资料采用频数表示，进行字2检验；等级资料比较采用秩和检验；相关性检验采用Spearman分析。所有检验均为双侧检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1P504s、CK-HMW、p63、S-100蛋白表达情况比较P504s在PCa组中表达阳性率高于BPH组，CK-HMW、p63、S-100蛋白在PCa组中表达阳性率低于BPH组（P均＜0.05）。见表1。
表1P504s、CK-HMW、p63、S-100蛋白表达情况比较［例（%）］组别n P504s CK-HMW p63S-100 PCa组9289(96.74)4(4.35)4(4.35)45(48.91) BPH组8010(12.50)80(100.00)80(100.00)70(87.50)字2124.301156.687156.68728.755
P<0.001<0.001<0.001<0.001 2.2P504s在PCa组不同Gleason分级中的表达强度比较PCa组中，Gleason评分W7分者P504s表达强度低于Gleason评分＞7分者（P V0.05）。见表2。
表2P504s在PCa组不同Gleason分级中的表达强度比较［例（%）］Gleason分级n-++++++日分442(4.55)18(40.91)24(54.55)0(0.00)
>7分481(2.08)10(20.83)18(37.50)19(39.58) Z 3.914
P<0.001
2.3CK-HMW蛋白在PCa组不同Gleason分级中的表达强度比较CK-HMW蛋白在PCa组不同
Gleason分级中表达强度差异无统计学意义（P> 0.05）。见表3。
龙江书院表3CK-HMW蛋白在PCa组不同Gleason分级中的表达强度比较［例（%）］Gleason分级n-++++++日分4441(93.18)0(0.00)3(6.82)0(0.00)
>7分4847(97.92)1(2.08)0(0.00)0(0.00)
Z 1.128
P0.259
2.4p63蛋白在PCa组不同Gleason分级中的表达强度比较p63蛋白在PCa组不同Gleason分级中表达强度差异无统计学意义（P>0.05）。见表4。
表4p63蛋白在PCa组不同Gleason分级中的表达强度比较［例（%）］Gleason分级n-++++++日分4441(93.18)2(4.55)1(2.27)0(0.00)
>7分4847(97.92)1(2.08)0(0.00)0(0.00)
Z 1.106
P%%%%%%%%%%%%%%%%%0.269
2.5S-100蛋白在PCa组不同Gleason分级中的表达强度比较S-100蛋白在PCa组不同Gleason分级中表达强度差异无统计学意义（P>0.05）。见表5。
表5S-100蛋白在PCa组不同Gleason分级中的表达强度比较［例（%）］Gleason分级n-++++++日分4420(45.45)7(15.91)15(34.09)2(4.55)
>7分4827(56.25)8(16.67)12(25.00)1(2.08)
Z 1.374
P%%%%%%%%%%%%%%%%0.170
2.6P504s,CK-HMW、p63、S-100蛋白表达强度与Gleason分级的相关性Spearman相关性分析结果显示，Gleason分级与P504s表达强度呈正相关性（P V0.05），与CK-HMW、p63、S-100蛋白表达强度无显著相关性（P>0.05）。见表6。
表6P504s,CK-HMW、p63、S-100蛋白表达强度与Gleason分级的相关性
爱国主题黑板报
指标P504s CK-HMW
p r p
p63S-100
p r p
Gleason
分级
0.632<0.0010.212>0.050.197>0.050.244>0.05 3讨论
前列腺穿刺活检技术是诊断前列腺癌的金标准，但前列腺癌区别于其他脏器腺癌，其生物学行为及形态结构较为独特。前列腺癌较少出现单核、多核瘤巨细胞，也少见显著的核异型，主要表现为核仁增大，故传统的恶性指标如核分裂、核异型、血管淋巴管及包膜侵犯对其诊断价值不高冋。前列腺癌病理诊断主要观察肿瘤细胞异型性、浸润情况及腺体结构异常改变，由于其病理形态复杂、差别微小，故在光镜下诊断较为困难，需结合免疫组化进行判断叫
P504s是一种前列腺癌细胞标志物，存在于胞质过氧化物中。既往研究采用基因芯片筛选发现，P504s与正常前列腺上皮组织无反应，而在前列腺癌中过表达叫P504s在前列腺癌免疫组化染色后，可在低倍镜下区分于正常组织。据文献报道，前列腺癌88%以上胞质内P504s弥漫性强阳性表达［9］。本研究中，P504s在PCa组中表达阳性率为96.74%，显著高于BPH组的12.50%，与既往研究一致叫且有充分研究证实，P504s的表达与前列腺癌的生物学行为有密切关系，P504s高表达可在一定程度上提示恶性程度高、预后不佳叩。Gleason分级系统是目前应用最广泛的前列腺癌组织病理学分级系统，是根据低倍镜下观察到的腺体生长方式、分化程度、间质浸润状态来评分，可作为前列腺癌诊断、预后的预测指标，与前列腺癌患者病情发展、转归、预后有密切关系［12］o本研究结果显示,P504s在Gleason评分W7分的患者中表达强度小于Gleason评分>7分的患者；Spearman相关性分析结果显示，Gleason 分级与P504s表达强度呈正相关性，表明P504s与前列腺癌病理分级密切相关，P504s的表达可能在肿瘤的发生、发展、远处转移中发挥重要作用。
潇洒霸气的句子基底细胞缺失是前列腺癌诊断的重要形态学依据问。CK-HMW是基底细胞的重要标志物，在前列腺腺体基底细胞中存在，故CK-HMW高表达提示基底细胞完好未被侵犯，可作为前列腺癌诊断、分期的辅助指标网。p63是一种核蛋白，可在具有增殖功能的基底细胞层中选择性表达，故通常只在前列腺良性病变或正常前列腺组织中表达，而在前列腺癌中不表达或低表达，其诊断意义与CK-HMW基本类似问。S-100蛋白是一种酸性钙离子结合蛋白，是病理诊断中较为常见的免疫组化标志物。研究显示，S-
100蛋白具有广泛的细胞内外生物学作用，在细胞外具有巨噬细胞激活、白细胞趋化、细胞增殖调节作用，这一功能使其在肿瘤的发生、发展中发挥重要作用。S-100蛋白可与p53蛋白相互作用，促进p53蛋白依赖的细胞凋亡，因此是一种肿瘤抑制因子［16~18］o 本研究结果显示,CK-HMW、p63、S-100蛋白在PCa 组中表达阳性率分别为4.35%,4.35%、48.91%，在BPH组表达阳性率则为100.00%、100.00%、87.50%，表明CK-HMW、p63、S-100蛋白均可作为鉴别前列腺良恶性病变的指标。CK-HMW、p63、S-100蛋白在不同Gleason分级中的表达强度差异无统计学意义，且Spearman相关性分析结果显示，Gleason分级与三者表达强度均无显（下转第49页）
癌的治疗疗效网。同时本研究两组在治疗期间均产
生了不同程度的不良反应，但发生率比较无明显差
异，这可能与本研究中两种药物的间歇性用药有关。 有学者在研究报告中指出，间歇性内分泌治疗不仅
能有效抑制雄激素的产生，使病情得到控制，而且使
用激素少，能明显减轻用药不良反应，并可降低治疗 费用，进而提高患者的治疗依从性问。综上所述，转
移性前列腺癌患者术后联合使用戈舍瑞林和比卡鲁
胺可明显降低患者血清PSA 和f-PSA 水平，提高疗 效，且安全性高。
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(收稿日期:2020-10-24)
(上接第14页)著相关性，表明CK-HMW 、p63、
S-100蛋白并非可有效预测前列腺癌病情发展、预
后的生物标志。
综上所述,P504s ,CK-HMW 、p63、S-100 蛋白在 前列腺癌的鉴别诊断中有重要的应用价值,P504s 可作为评价前列腺癌病情与预后的重要参考指标。
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(收稿日期：2020-12-26)
