人PBMCs最常用的分离方法是:把用生理盐水1:1稀释过的血液铺到密度为1.077的离心介质上,然后离心。介质主要为LymprepTM,NycoprepTM及OptiprepTM。
20世纪90年代,Ford和Rickwood用混合法分离了PBMCs,简化了如上操作流程。结合混合法利用OptiprepTM分离人PBMCs是目前最经济、最简便、分离效果最好的方法。
所需溶液
A.OptiprepTM(用前轻轻摇匀)
B.留学人员免税车Tricine-buffered saline (TBS): 0.85% NaCl, 10 mM,Tricine-NaOH, pH 7.4。
操作流程::
1.把全血与OptiprepTM按8:1体积比混合,并轻轻混匀,混匀要彻底。
注:如果20ml血液则需要2.5ml OptiprepTM。具体体积根据离心管的大小而定。
TBS铺到混合液的顶部,在20℃下1500g离心30min。
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简历怎么写 注:TBS可以用任何其它的缓冲液替代。
3.从凹液面下大约1cm下的细胞沉淀中收集PBMCS。整个过程见如下图片。
4.用两倍体积的生理盐水稀释收集到的细胞。然后在250-500g下离心5-10min来沉淀细胞。
相关图片:
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原始文献:黑葡萄干的功效与作用
参考文献
论文评审
1. Ford, T. C. & Rickwood, D. (1990) J. Immunol. Methods, 134, 237-241.
2. Kaden, J., Schönemann, C., Leverenz, S. & Koch B. (1994) Allergologie Jahrgang, 17, 429-433.
3. Ford, T. C. & Rickwood, D. (1992) Clin. Chim. Acta, 206, 249-252.
实习单位审核意见Optiprep报价:250ml 1503.0元
每分离20ml血液需要2.5ml,花费15.03元