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湖北中医药大学学报
Journal of Hul>ei University of Chine Medicine
2021年4月第23卷第2期
带字伤感图片April 2021 ,V〇1.23,No.2
痔疾洗液联合红光治疗对大鼠肛周创而模钡术后恢复的
影响
黄淦圣，方静，司徒光伟，徐飞，周凯亮，陈燕，刘国保，胡玮，邹贤军
(武汉市第八医院肛肠科，湖北武汉430010)
摘要：目的观察痔疾洗液联合红光治疗大鼠肛周创面模型的疗效及其病理机制。方法大鼠按随机数字表法分为空白对照组、模型对照组、痔疾洗液组、红光治疗组和痔疾洗液+红光治疗组。制备大鼠 肛周创面模型，各组分别予以对应治疗。2周后观察大鼠一般情况，测定各组创面愈合率以及创面上皮化的 动
物数量；使用实时荧光定量核酸扩增检测系统(qPCR)检测大鼠血清IL-8、TNFa、TGF-p i、EGF的表达 及变化；酶联免疫吸附法（£1^8八)检测大鼠皮肤组织儿-8、11处'£1、丁〇?-01、£〇?表达及变化。结果与模型对照组比较，痔疾洗液组和红光治疗组创面愈合率明显改善（户<0.05)，创面上皮化动物数量明显增多 (P<0.05)；涛疾洗液+红光治疗组创面愈合率贝'J进一步改善（P O.01 )，创面上皮化的动物数量进一步增多 (PC0.01)。模型对照组中的丨L-8、TNFct的表达显著上调（P<0.01)，TGF-p i、EGF/p-EGFR的表达显著下调 (P<0_01 )；与模型对照组比较，痔疾洗液组和红光治疗组的丨L-8、TNFct的表达显著下调(P<0.05),TGF-p l、EGF/p-EGFR的表达显著上调(P<0.05)；痔疾洗液+红光治疗组的IL-8、TNFa、TGF-p i、EGF/p-EGFR趋势 则进一步增强（P<0.01)。结论痔疾洗液联合红光治疗对大鼠肛周创面模型术后有较好的治疗和改善作 用，其作用机制可能与减轻机体炎症反应，促进皮肤愈合、再生有关。
关键词：肛周创面模型；痔疾洗液；红光；炎症因子；生长因子
中图分类号：R266 文献标识码：A doi：10.3969/j.issn. 1008-987x.2021.02. 03
基金项目：湖北省卫生计生委联合基金(项目编号:WJ2018H0051)。
作者简介：黄淦圣（I981-)，男，武汉市第八医院肛肠科主治医师，研究方向：肛肠良性疾病。
通信作者：郎贤军（ 1972-)，男，武汉市第八医院肛肠科副主任医师，研究方向：肛肠良性疾病,***********************
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(稿件修回日期：2020-06-27编辑：林飞）
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Effect of Hemorrhoid Lotion combined with red light therapy on postoperative recovery of perianal wound model in rats
HUANG Gansheng,FANG Jing,SITU Guangwei,XU Fei,ZHOU Kailiang,CHEN Yan,LIU Guobao,HU Wei,ZOU Xianjun (Department of Proctology,Wuhan No.8 Hospital,Wuhan430010 )
Abstracts：Objective To obrve the effect and mechanism of Hemorrhoid Lotion combined with red light therapy on postoperative recovery of perianal wound model in rats.Methods 60 Wistar rats were randomly divided into control group, model group,Hemorrhoid Lotion group,red light treatment group,Hemorrhoid Lotion combined with red light treatment group. After successful modeling,each group was given corresponding treatment once a day for 14 concutive days.The general condition of rats was obrved,and the number of w ound epithelialization and wound healing rate were meas
ured.The expression and changes of interleukin-8 (IL-8 ),tumor necrosis factor-a(TNF-a),transforming growth factor-p1 (TGF-p1 )and epidermal growth factor(EGF)in rat rum were detected by real-time fluorescence quantitative nucleic acid amplification(qPCR)；the expression and changes of IL-8,TNF-a,TGF-p1and EGF in rat skin were detected by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)in rat skin.Results Compared with model control group,the wound healing rates of Hemorrhoid Lotion group and red light treatment group were significantly incread(P<0.05), and the number of animals with wound epithelialization significantly enhanced(尸<0.05 )，the effects were further enhanced in Hemorrhoid Lotion combined with red light treatment group(^O.O l)；the expression of IL-8 and TNF-a was significantly up-regulated,while the expression of TGF-pi and EGF was significantly down-regulated in model group(尸<0.01 );compared with model group，the expressions of IL-8 and TNFa in Hemorrhoid Lotion group and red light treatment group were significantly down-regulated(^<0.05), while the expression of TGF-p1and EGF/p-EGFR was significantly up-regulated(^O.O S)；the trend of IL-8,TNF-a,TGF-p1and EGF/p-EGFR was further enhanced in Hemorrhoid Lotion combined with red light treatment group(P<0.01 ).Conclusion Hemorrhoid Lotion combined with red light therapy apparatus has a good therapeutic and improvement et'fect on perianal surgery in rats,and its mechanism may be related to reducing inflammatory reaction and promoting skin healing and regeneration.
Keywords：postoperationof perianal wound model；Hemorrhoid Lotion；red light therapy；inflammatory factor；growth factor
肛周术后的创面容易发生组织液、血液、分泌物渗 出，由于其部位的特殊性，这些混合液体刺激肛周组织，在创面恢复期极易导致术后感染的发生，形成二次伤 害，给患者增加痛苦。肛周的持续刺激，会导致该部位 瘙痒、红肿、疼痛，甚至形成肛周湿疹，迁延难愈。本实 验通过在大鼠肛周组织制造深至肌层的创口，用人工 制成粪便混悬液感染创口并产生炎性创面，模拟肛周 术后的组织病理形态，观察痔疾洗液联合红光治疗对 大鼠肛周创面模型的疗效，并探讨其对机体炎症和皮 肤愈合、再生的作用机制，以期为临床改善肛周术后创 面恢复提供实验依据。
1材料与方法
l.i动物
选用SPF级Wistar大鼠60只（购自卜.海斯莱克实验 动物有限责任公司，生产许可证号：SCXK(沪）2017 - 0005 )，体质量200〜240 g，雌雄各半。
1.2药物、试剂与仪器
痔疾洗液（贵州拜特制药有限公司）；凡士林（泰 坦探索平台，批号：01155953)。FastSYBRGreen
Master mix(美国 Life Technologies公司，批号：1311034)；大 鼠白介素8( IL-8 )ELISA检测试剂盒（上海酶联生物科 技有限公司，批号：ml037351 )；大鼠肿瘤坏死因子a (TNFa)EL1SA检测试剂盒（上海酶联生物科技有限公 司，批号：ml002859)；大鼠转化生长因子p i(TGF-p i) ELISA检测试剂盒(上海酶联生物科技有限公司，批号：ml002856 )；大鼠磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR) ELISA试剂盒（上海酶联生物科技有限公司，批号：ml059423 )。红光治疗仪（上海名元实业有限公司，型 号：CHX-630E)。
1.3动物分组与模型制备
60只大鼠按随机数字表法随机分为5组：空白对 照组、模型对照组、疼疾洗液组、红光治疗组和痔疾洗 液+红光治疗组，每组12只。除空白对照组外，其余各 组制备肛周创面模型：采用异氟烷吸人诱导麻醉，成
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功后对大鼠肛周局部备皮，制造i个圆形创面，直径约 1.6cm，创口深至肌层，止血后再取粪便混悬液(人类新 鲜粪便l〇g，加生理盐水5mL，混匀，3000r/min离心15 min，取上清液）lm L均匀喷洒于创面：用纱布和凡士 林包裹创面，48h后去除包裹物，观察到创面脓性分泌 物和臭粪味即为造模成功。
1.4治疗方法
大鼠肛周创面模型制备成功后，痔疾洗液组每日予 以痔疾洗液1〇m L熏洗创面；红光治疗组予以红光照射（激光参数：波长630nm，输出功率5500mW，光斑直 径约120mm，距皮损部位约100~150cm)15min；痔疾 洗液+红光治疗组予以寿疾洗液10m L熏洗肛周后，再 以红光照射15min。均每天1次，持续治疗14天。模型 对照组不予任何治疗。
1.5观察项目及方法
1.5.1大鼠肛周创面组织形态的观察：于治疗前利用透 明膜法测量创面面积大小。末次治疗24h后，观察各组 大鼠创面脓肿情况和肉芽组织形态，再次测量创面面 积大小，按照公式计算大鼠创面愈合率：创面愈合率= (治疗后创伤面积-治疗前创伤面积)/治疗前创伤面积x100%；并计数至创面治疗结束各组创面完全上皮化 的大鼠数量。
1.5.2大鼠血清IL-8、TNFa、TGF-p i、EG F表达水平的 测定：采用实时荧光定量核酸扩增检测系统测定血清 中的IL-8、TNFct、TGF-p i、E G F的表达水平。将大鼠麻 醉后，于股动脉取全血，放置2 h后离心取血清，于-80^ 冻存。首先提取出血清中的总RNA，然后将其逆转录 合成cDN A，再进行PCR扩增，结果采用公式2^计算，求出基因表达的相对倍数。各基因引物见表1。
1.5.3 大鼠肛周组织IL-8、TNFcx、TGF-p l、p-EGFR的测 定：动物处死后，采集其创面皮肤，用PBS漂净，使用液 氮淬冻后于-80^保存。按照试剂盒使用说明书检测组 织中的 IL-8、TNFa、TGF-p l、p-EGFR的含量。
表1大鼠源目的基因引物序列
目的基因引物序列
引物长
度(bp)
IL-8Sen:5'-CAAGGCTGGTCCATGCTCC-3,
Antin: 5'-TGCTATC A CTTCCTTTCTGTTGC-3;
216
TNFa Sen:5, - CATGGATCTCAAAGACAACCAA-3，Antin:5,-CTCCTGGTATGAAATGGCAAAT-3,
198
EGF S e n d - AGGGGAG/LAAGAGACTGGGA-y Antin:5, -TGCATCGTTCGGAGAG-
GCTCTC-3f
220让自己美好
TGF-pi Sen:5, -CACGTGGAGCTGTCCACTT-3,
Antin:5,-GAACCCGTTGATGTCCATGCT-3,
208
GAPDH S e n d -TCCCGCTAACATCAAATG-3,
Antin: 5; -GAGGGAGTTGCATATTTCAT-3;
192
1.6统计学方法
应用SPSS22.0软件进行数据分析，计量数据以均
曲折历程数±标准误（i± S)表示，组间对比用单因素方差分析法
(ANOVA)，两组间比较采用LSD检验。P<0.05认为有
显著性差异./^O.Ol认为有极显著性差异。
2结果
2.1各组大鼠肛周创面一般状态的观察
模型对照组创面边缘肉芽组织较少，有明显水肿、
渗液，基底潮红，局部可见脓性分泌物。与模型对照组
比较，痔疾洗液组和红光治疗组创口边缘出现上皮化,
肉芽组织局部生长，创口情况改善；痒疾洗液+红光治
疗组创口边缘出现明显上皮化，肉芽组织生长十分活
跃，色鲜红、柔软，水肿明显减轻，创口情况显著改善。
与模型对照组比较，痔疾洗液组和红光治疗组创面
愈合率明显升高(/><〇.〇5 )，创面上皮化的动物数量明显
增多（P<0.05)，痔疾洗液+红光治疗组则更为明显
(尸<0.01 )。
表2各组大鼠创面愈合率和创面上皮化的比较± .s)
组别n
创面愈合率
(%)
创面上皮化
大鼠数量(只）
模钽对照组1211.47±7.44 2.00±0.00
寿疾洗液组1219.42±9.70A 4.00±0.00A
红光治疗组1220.85±8.504 5.00±0.00A
痔疾洗液+红光治疗组1275.28±7.9(T8.00±0.0(T
与模型对照组比较,A^<0.05, AAP<0.01。
2.2 大鼠血清中丨L-8、TNFa、TGF-p i、EG F的比较
与空白对照组比较，模型对照组IL-8、TNFa显著增
高（PcO.Ol ),TGF-p i、EGF显著下调（P<0.01)。与模型
对照组比较，痔疾洗液组和红光治疗组IL-8、TNFa明显
降低(P<0.05 )，TGF-p1、EGF明显上调(P<0.05 )，涛疾洗
液+红光治疗组则更为明显(户<〇.〇1 )。
表3各组大鼠血清中的IL-8、TNFa、TGF-pi、EGF的比较（.t ± .0
组别n IL-8TNFa TGF-pi EGF
空白对照组12 1.07±0.01 1.08 土0.29 1.14土0.21 1.07±0.21
模型对照组128.49±0.24**8.17±0.12“0.29±0.32"0.17±0.52*'
痔疾洗液12 5.10±0.12A 5.44 土0.37A0.53±0.38A0_44 士0.38A
红光治疗组12 6.02±0.21A 6.18土0.15A0.49 士0.52A0.36 士0.92A
痔疾洗液+
红光治疗组
12 3.19±0.35^ 4.02±0.20^0.73 土0.2(T0.81 土0.2(T
与空白对照组比较，** RO.01；与模型对照组比较,AP<〇.〇5, AA/^0.01。
2.3 大鼠肛周组织中 IL-8、TNFa、TGF-p i、p-EGFR
的比较
与空白对照组比较，模型对照组IL-8、TNFa含量显
著增高（/"<0.0〇, TGF-p i、p-EG FR含量显著下调
(■PO.Ol )。与模型对照组比较，痔疾洗液组和红光治疗
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组lL-8、TNFa显著降低(P<0.05)，TGF-p i、p-EGFR显著 上调（P<0.05)，痔疾洗液+红光治疗组则更为明显(戶<0.01)。
表4各组大鼠皮肤组织中的丨L-8、TNF(t、TGF-pi、p-E G F R的比较
(pg/m L，无± s)
组别n I L-8TNFa TGF-pi p-EGFR
冷藏
空白对照组1224.37±6.8126.08士6.8271.31±0.3169.27士0.11
模塑对照组1269.79±7.44**71.37±5.23" 20.09±0.22“23.18±0.18"
痔疾洗液1247.50±3.82A45.41±7.24^31.15±0.38A29.28±0.18A 红光治疗组1250.89 士5.41A51.38±6.58A31.89±0.32A30.12±0.42A 痦疾洗液+
红光治疗组
1230.29±6.95^ 31.04±7.31^64.43±0.3(T59.31 ±0.10^与空白对照组比较，*〒<〇.〇1；与模铟对照组比较，APcO.05，AA外套用英语怎么说
尸<0.010
3讨论
肛周术后创面为开放性、污染性创面，创面愈合至 关重要。中医对肛周术后的创面治疗多采用清热解
毒、消肿止痛、提脓去腐、生肌收口的治法。痒疾洗液具有 清热解毒，燥湿敛疮，消肿止痛的功效，临床常用来治 疗湿热蕴结所致的外痔肿痛。张振波〜研究发现，肛肠 疾病手术后使用痒疾洗液治疗，可减轻患者疼痛、切口 渗出物、出血、水肿及切口愈合时间，降低患者不良反 应发生率，提高治疗效果。王平[2]证实，涛疾洗液外洗 可以缓解肛肠疾病的疼痛和促进创面愈合。在本研究 中，将痔疾洗液联合红光治疗大大提高了创面的愈合 率和上皮化。创面上皮化是活体创面愈合的重要指标 之一，迅速上皮化有利于创面更早地再次供皮3联合 治疗组创面上皮化的动物数量越多，说明这组动物恢 复得更快。
现代医学认为，控制炎症，促进皮肤再生是提高肛 周术后创面恢复的关键。相关数据[w表明，中西医结 合治疗肛周疾病能够加快患者的康复。肛周术后的恢 复与炎性因子(丨L-8、TNFct)和生长因子(TGF-p l、EGF)密切相关。IL-8是一种新型白细胞趋化激活细胞因子(趋化因子），由多种类型的细胞在炎症刺激下产生，并 在体外对白细胞，特别是中性粒细胞发挥多种功能>71。Hamda等[8H正实，IL-8通过募集和激活中性粒细胞在急 性炎症中起着致病作用。TNFcx是促炎细胞因子，会产 生发热、炎症、组织破坏，在某些情况下还会导致休克 和死亡。阻断肿瘤坏死因子在促进炎症性肠病患者的 恢复中非常成功:91。TGF-p i是一种调节细胞生长和分 化的生长因子，在炎症、组织修复、胚胎发育等都发挥 重要调节作用3研究表明在促进组织修复的生物学功 能t,TGF-p l既能促进成纤维细胞的生长，又能促进细 胞外基质如胶原蛋白的表达，有利于细胞修复”°]cJwata 等h li表明表皮和真皮CD271
+细胞通过产生TGF-p i、EGF等生长因子促进伤口愈合过程。EGF作为一种对 组织修复具有重要调控作用的修复因子，不仅可以促 进创面组织修复细胞，还可以促进表皮细胞的增殖、爬 行和成纤维细胞的增殖，促进创面再上皮化，加速创面 愈合[12]。本实验结果显示，痨疾洗液和红光治疗均能 显著降低血清中IL-8、TNFcx含量（/><0.01 )，显著上调 TGF-p i、EG F的含量（/><0.0〇，对肛周组织中IL-8、TNFct、TGF-p l、p-EGFR作用趋势相同（户<0.01 )，而涛疾 洗液联合红光治疗可以进一步增强这些趋势，表明该 联合疗法可以通过降低炎性因子的表达，减轻机体的 炎症反应，改善创口的恢复情况，并且增加生长因子的 表达量，促进创伤面成纤维细胞的生成、新生毛细血管 数量增加，进而加快创伤面肉芽组织的形成，促进伤口
愈合。痔疾洗液联合红光治疗可以有效地改善大鼠肛 周创面模型的炎症反应，促进皮肤的再生和愈合，帮助 肛周术后创面更好的恢复。
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