Subcellular localization of onion epidermal cells：
别人体
1、 Prepare 1/2MS medium, no sugar；
鬼迷心窍的意思2、 Tear the onion inner epidermis with pointed tweezers，place them up on the 1/2MS medium and above 30min；
3、 按照说明制弹；金弹的制备
金粉的准备：
养鹅取直径为0.6um的金粉30mg于1.5ml的灭菌离心管中，加入1ml体积分数为70%的乙醇，充分涡旋5min后于室温静置15min。室温12000rpm离心3s，弃上清，重复此步骤2次。弃上清后使乙醇挥发殆尽，用灭过菌的去离子水冲洗2-3次。加入500ul灭菌水重悬金粉颗粒（使金粉浓度为60ug/ul），于4℃中储存备用。
包裹质粒(6枪)：
将制备好的金粉悬浊液放在冰上，待其溶化后充分涡旋5min，然后取50ul到新的离心管中备
用。将配置好的质粒DNA溶液轻轻加在金粉液的管壁上，再将50ulCaCL2溶液（2.5M）和20ul亚精胺溶液（0.1M）加到离心管盖子上混匀，小心盖上管盖，然后迅速竖直涡旋1-10min，使溶液充分混合，室温放置1min，然后12000rpm离心3-5s后移除上清；接着用150ul无水乙醇洗涤金粉沉淀；然后12000rpm离心3-5s并移除上清；最后，加入无水乙醇85ul，使金粉沉淀完全重悬，置于冰上备用。
4、 冠词用法按照说明打枪；
①在超净工作台上，用75%的乙醇将基因枪表面和真空室消毒擦净，并将阻挡网、破裂膜、载体膜等浸泡在无水乙醇中消毒10min，然后置于灭菌的滤纸上，在超净台上吹干；
②将破裂膜安装到托座上，然后将托座顺时针拧到气体加速器上，并用扳手拧紧；
③取12.5ul包被质粒DNA的金粉悬液，均匀涂布于载体膜中心，然后置于超净台上吹干；
④将载有微弹的载体膜嵌入到固定环中，使有颗粒的一面朝下，将阻挡网装入阻挡网的托座上，并将托座和固定环安装好，然后将盖子旋紧后插入轰击室中的第一层；
海城县⑤将洋葱表皮置于培养基中央；轰击距离可设为6cm、9cm；
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⑥打开气瓶阀门，观察副表压力是否大于破裂膜的破裂压力，如果小于则顺时针旋转氦气调节阀，保证氦气表指针的压力读数高于破裂膜压力200psi；
⑦打开稳压电源和基因枪电源等开关；
打开真空泵开关，再打开VAC档进行抽真空；
待真空度达到26-28mmHg时，迅速把开关拨到hold档，锁定真空；
待Fire键亮起时，立即按住Fire键保持不动；
此时主机表头的压力开始缓缓上升，等达到破裂膜压力时会听到啪的一声，立即松开Fire，转化完成；
把真空开关拨到VENT档，释放真空，待真空度显示为0时，关闭主机电源、变压器、气瓶阀门，再打开仓门，取出样品，并清洁仓内的转化材料；
学习态度的成语将氦气瓶的总开关先旋紧，再逆时针旋松氦气表调节阀，打一次空枪，待氦气表指针回零后关闭基因枪的电源总开关。
5、 黑暗培养过夜；观察。
