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英汉缩略语名词对照 (1)
中文摘要 (3)
林语堂苏东坡传英文摘要 (6)
论文正文：SM22-Cre特异性敲除SCAP基因导致小鼠胚胎血管平滑肌细胞增殖障碍研究 (10)
前言 (10)
第一部分 SM22-Cre特异性敲除SCAP基因小鼠的构建与基因型鉴定 (12)
1 材料和方法 (13)
2 结果 (20)
3 讨论 (24)
第二部分 SCAP基因缺失引起小鼠胚胎血管平滑肌细胞增殖障碍的分子机制研究 (26)
1 材料与方法 (28)
2 结果： (34)
就是什么词性3 讨论 (40)
全文总结 (42)
参考文献 (44)
文献综述：动脉血管平滑肌的发育与损伤 (48)
参考文献 (53)
致 谢 (56)
怎样长高男生攻读硕士学位期间发表的论文 (57)
攻读硕士研究生期间参加的学术会议 (58)
1 英汉缩略语名词对照
脾虚如何调理英文缩写 英文全称 中文全称
cDNA complementary DNA 互补DNA
DEGs differentially expresd genes 差异表达基因
DEPC diethylpyrocarbonate
傲慢英文焦碳酸二乙酯 DNA deoxyribonucleic
acid 脱氧核糖核酸 ddH 2O石湖居士是谁
double distilled water 双蒸水 ER Endopplasmic
reticulum 内质网 TSC2 Tuberous
Sclerosis Complex 结节性硬化症2 GO Gene
Ontology 基因本体 KEGG
Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes 京都基因与基因组百科全书 H 2O 2 Hydrogen
peroxide 过氧化氢 HMGCoAR 3-hydroxy-3-methylglutaryl
coenzyme A reducta 3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A 还原酶 LDLr Low-density
lipoprotein receptor 低密度脂蛋白受体 Insig Insulin-induced
高中足球教案gene 胰岛素诱导基因 mM mmol/L
毫摩尔/升 PBS
phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 RT-PCR Quantitative
Rever Transcription PCR 逆转录定量PCR pH
power of hydlogen 酸碱度 RNA ribonucleic
acid 核糖核酸 RNA-q RNA
quencing 转录组测序
RNa ribonuclea
核糖核酸酶RPM revolutions
per
minute
转/分
RPKM Reads Per Kilobas per
Millionreads 每百万 reads 中来自于某基因每千碱基长度的reads 数
SCAP SREBP cleavage activating
protein 固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白
SRE Sterol-regulatory element 固醇调节元件
GSK3 glycogen syntha kina3 糖原合成酶激酶3 SREBPs Sterol regulatory element
binding proteins
固醇调节元件结合蛋白S1P Site 1 proteina 位点1蛋白酶
S2P Site 2 proteina 位点2蛋白酶
TAE Tris/acetate
electrophoresis
buffer
兰州电机厂Tris/乙酸电泳缓冲液WT wild
type
野生型
μg Microgram
微克
μmol Micro
mole
微摩尔
μl Microliter
微升
CRE Cyclization
Recombination
Enzyme
Cre重组酶
VSMC Vascular
smooth
muscle
cell
血管平滑肌细胞
AKT protein kina B 蛋白激酶B
PI3K Phosphoinositide
3-kinas
磷脂酰肌醇激酶
PCNA SM22αProliferating Cell Nuclear
Antigen
smooth muscle 22 alpha
增殖细胞核抗原
平滑肌22α
SM22-Cre特异性敲除SCAP基因导致小鼠胚胎血管平
滑肌细胞增殖障碍研究
摘要
目的：甾醇调节元件结合蛋白裂解活化蛋白，又称SREBP裂解活化蛋白或SCAP，是一种由SCAP基因编码的人类蛋白。能够探测胞内胆固醇的水平，通过负反馈机制调节胆固醇摄取和内源性合成基因的表达水平来维持内环境胆固醇的稳态。SCAP主要与脂糖代谢及相关疾病有关，如非酒精性脂肪肝、主动脉粥样硬化。对于SCAP研究的不断扩展深入发现，SCAP的表达在细胞增殖、分化，胚胎发育等领域也有重要作用。本课题通过Cre-Loxp系统构建特异性敲除血管平滑肌SCAP基因的小鼠，试图探讨 SM22-Cre小鼠特异性缺失SCAP基因对于胚胎血管平滑肌细胞增殖和发育的影响，并初步探讨其可能的分子机制。
方法：1）体内实验：本研究选用的建模小鼠是平滑肌特异性表达Cre酶（SM22-Cre）和SCAP flox/flox转基因工具小鼠作为杂交繁殖对象。将雌性SCAP flox/flox小鼠与雄性SM22-Cre小鼠合笼交配繁殖，得到平滑肌特异性敲除SCAP基因小鼠杂合子（SM22-Cre;SCAP flox/+），剪取小鼠尾巴约5mm，提取尾DNA做定量PCR鉴定小鼠基因型，并用Western blot鉴定SCAP基因敲低的程度与特异性；再将雌雄SM22-Cre/SCAP flox/+小鼠交配繁殖，得到三种基因型子代小鼠，分别是SM22-Cre/SC
AP flox/+，SM22-Cre/SCAP flox/flox，SM22-Cre/SCAP+/+，其中，
基因型SM22-Cre/SCAP flox/flox为SCAP特异性敲除纯合子，基因型SM22-Cre/SCAP flox/+为SCAP特异性敲除杂合子，基因型SM22-Cre/SCAP+/+为野生型；于小鼠胚胎期E12.5、E14.5、E16.5d、E18.5d取小鼠胚胎，剪取胚胎后肢和尾部做定量PCR用于基因型鉴定，统计各基因型小鼠比例；在体视显微仪下观察子代小鼠胚胎大体形态发育，拍照记录；取野生型和SCAP纯合子小鼠（SM22-Cre/SCAP+/+；SM22-Cre/SCAP flox/flox）E14.5d胚胎连续切片，血管层面做IHC检测SCAP，观察SCAP特异性敲效果；连续切片做H.E.染色，观察血管壁厚度；免疫组化检测PCNA、PI3K、Akt等表达情况，观察血管增殖情况；2）体外实验：用不同浓度SCAP SiRNA转染VSMCs细胞，以检测VSMCs的SCAP基因干扰程度；在干扰了SCAP基因表达的VSMCs 上检测检测细胞增值率；Western Blot检测血管平滑肌细胞干扰SCAP 基因后SCAP,PCNA,PI3K,AKT蛋白水平的表达情况。
结果：1.通过Cre/Loxp重组系统获得SM22-Cre;SCAP flox/+小鼠模型，经普通定量PCR检测SCAP mRNA表达量证明SCAP基因敲低，模型稳定可用，同时通过Wstern Blot检测小鼠主动脉、肝脏、肾脏的SCAP蛋白表达量，确认模型小鼠SCAP基因敲低的平滑肌特异性。
2.模型小鼠交配繁殖，得到子代胚胎小鼠，发现SCAP敲除纯合子小鼠的出生率为零，仅有基因型为SM22-Cre/SCAP flox/+的杂合子和基因型为SM22-Cre/SCAP+/+的野生型小鼠出生。通过对小鼠不同
胚胎时期的解剖发现，随时间推移，SCAP敲除纯合子逐渐降低，直至胚胎期E18.5天，纯合子下降为0。
