雌激素改善维⽣素D受体基因敲除雌性⼩⿏的⾻、钙代谢
万⽅数据
５７４⽣理学报ＡｃｔａＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａＳｉｎｉｃａ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ２５，２００６，５８（６）：５７３—５７６
雌激素和维⽣素Ｄ都是重要的⾻、钙代谢调节激素。它们调节⾻、钙代谢的机理有相似的⽅⾯，也有不同的⽅⾯。同时，两者之间存在相互作⽤。⽬前，对雌激素和维⽣素Ｄ在调节⾻、钙代谢过程中的相互作⽤机理并不完全清楚。许多研究者认为雌激素是通过调节肠道维⽣素Ｄ受体（ｖｉｔａｍｉｎＤｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＶＤＲ）的表达来影响钙的吸收¨。３】，此外，雌激素还可以影响维⽣素Ｄ对成⾻细胞的作⽤Ｈ】。近年来，也有报道认为雌激素在调节钙吸收与⾻代谢⽅⾯还有完全不依赖于维⽣素Ｄ系统的途径瞪’６。。因为ＶＤＲ基因敲除（ｖｉｔａｍｉｎＤｒｅｃｅｐｔｏｒｇｅｎｅｋｎｏｃｋｏｕｔｍｉｃｅ，ＶＤＲ壬）⼩⿏不存在维⽣素Ｄ的基因组作⽤，所以它是研究雌激素与维⽣素Ｄ系统相互作⽤的理想动物模型。本研究利⽤ＶＤＲ。⼩⿏探讨雌激素调节钙和⾻代谢的机理。
ｌ材料与⽅法
１．１动物及分组ＶＤＲ４⼩⿏由哈佛⼤学Ｄｒ．Ｍａｒｉｅ教授赠送。以配制饲料喂养，饲料的主要成分是：维⽣素Ｄ２．２ＩＵ／ｇ、钙２％、磷１．２５％。⼩⿏３周龄时断奶、鉴定基因型。１２只３周龄的雌性ＶＤＲ⽜⼩⿏分成两组，雌激素组（ＶＤＲＫＯ—Ｅ）每⽇⽪下注射雌⼆醇０．２ｇｇ；溶剂对照组（ＶＤＲＫＯ—ｖｅｈｉｃｌｅ）每⽇⽪下注射⽣理盐⽔；⽤同窝野⽣型（ｗｉｌｄｔｙｐｅ，ＷＴ）⼩⿏作ＷＴ对照组（ＷＴ—ｖｅｈｉｃｌｅ），每⽇⽪下注射⽣理盐⽔。给药后⼀个⽉取样分析。
１．２⼩⿏基因型鉴定在⼩⿏断奶分窝时，剪取约０．５Ｃｍ的⿏尾。⽤酚⼀氯仿法抽取基因组ＤＮＡ。⽤ＰＣＲ法鉴定⼩⿏基因型。ｗＴ⼩⿏ＶＤＲ基因位点引物序列：正义链５’⼀ＡＧＣＣＧＧＣＡＧＧＣＣＴ—ＧＧＣＡＧＴＧＴＣ⼀３’；反义链：５’⼀ＣＣＡＣＣＴＧＣＣＴＣ—ＴＧＣＣＴＣＣＣＡＡＧ．３’；掺⼊的ｎｅｏｍｙｃｉｎ基因位点引物序列：正义链：５’⼀ＧＧＡＧＡＧＧＣＴＡＴＴＣＧＧＣ．ＴＡＴＧＡＣ⼀３’；反义链：５＇－ＣＧＣＡＴＴＧＣＡＴＣＡＧＣＣ—ＡＴＧＡＴＧＧ⼀３’。退⽕温度均为６３℃，均为３０个循环。
１．３⾎钙⽔平测定⿇醉⼩⿏，⼼脏穿刺取⾎，分离⾎清。使⽤全⾃动⽣化分析仪检测⾎清钙。１．４⾻密度测定使⽤ＸＲ⼀３６型双能Ｘ线⾻密度仪，将⼩⿏置于有机玻璃板上，⽤双能ｘ线⾻密度仪测量。扫描速度为６０．０ｍｍ／ｓ，步距为１．０ｍｍｘｌ．０ｍｍ，精确度和准确度均为１％。
土建工程１．５ｖｏｎＫｏｓｓａ染⾊固定过的胫⾻脱⽔塑料包
埋，制作⾮脱钙⾻切⽚。ｖｏｎＫｏｓｓａ染⾊，甲苯胺蓝复染。采⽤ＨＰＩＡＳ⼀１０００⾼清晰度彩⾊病理图⽂分析系统分析钙化⾻⼩梁⾯积（ｔｒａｂｅｃｕｌａｒａｒｅａ，Ｔｂ．Ａｒ，％）和未钙化的类⾻质⾯积（ｏｓｔｅｏｉｄｖｏｌｕｍｅ／ｂｏｎｅｖｏｌｕｍｅ，ＯＶ／ＢＶ，％）。
１．６统计学处理实验数据均采⽤ｍｅａｎ＿ＳＤ，⽤ＷｉｎｄｏｗｓＳＰＳＳ１０．０软件进⾏⽅差分析。
明月何时照我还上一句
２结果
２．１⼩⿏基因型鉴定结果
⼩⿏基因组ＤＮＡ的ＰＣＲ结果见图１。ｗＴ⼩⿏（＋“）只出现⼀条带（３８２ｂｐ）。ＶＤＲ。⼩⿏（⼀／⼀）也只出现⼀条带（２９０ｂｐ）。这是因为在ＶＤＲ⽜⼩⿏的基因组中，ｎｅｏｍｙｃｉｎ基因取代了ＶＤＲ基因的第三个外显⼦。杂合⼦（＋／⼀）出现两条带。
图１．基因型鉴定的ＰＣＲ结果
Ｆｉｇ．１．ＰＣＲｐｒｏｆｉｌｅｓｕｓｅｄｆｏｒｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ
ｍｏｕｓｅｇｅｎｏｔｙｐｅ．Ｏｎｅｂａｎｄｏｆ３８２ｂｐｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓｗｉｌｄｔｙｐｅｍｉｃｅ（＋“），ｗｈｉｌｅｏｎｅｂａｎｄｏｆ２９０ｂｐｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓＶＤＲｋｎｏｃｋｏｕｔｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓｍｉｃｅ（⼀／－）．Ｔｗｏｂａｎｄｓａｒｅｆｒｏｍｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｕｓｍｉｃｅ（＋／．）．
２．２⾎钙⽔平
工作收获外源性给予雌⼆醇⼀个⽉后，与溶剂对照组相⽐，雌激素组⼩⿏⾎钙⽔平显著增⾼［（２．８０±０．４１）ＶＳ（２．１０±０．３７）ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｐ＜０．０５，图２］，但仍然低于ＷＴ对照组⼩⿏［（３．１０±０．４８）ｍｍｏｌ／Ｌ］。
⼸
Ｅ
量３
Ｅ
⼸２
百
§１
ｂ
（，）０
ＷＴ－ｖｅｈｉｃｌｅＶＤＲＫＯ．．ｖｅｈｉｃｌｅＶＤＲＫＯ．．Ｅ
图２．⾎钙浓度测定结果
Ｆｉｇ．２．Ｓｅｒｕｍｃａｌｃｉｕｍｌｅｖｅｌ．Ｓｅｒｕｍｃａｌｃｉｕｍｌｅｖｅｌｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙａｕｔｏａｎａｌｙｚｅｒ．Ｔｈｅｖａｌｕｅｉｓ英语口语文章
ｍｅａｎｓ±ＳＥＭｏｆｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｓｆｒｏｍ６ｍｉｃｅｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ．＋Ｐ＜０．０５ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＶＤＲＫＯ—ｖｅｈｉｃｌｅ
ｇｒｏｕｐ?
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李冰燕等：雌激素改善维⽣素Ｄ受体基因敲除雌性⼩⿏的⾻、钙代谢
２．３⼩⿏⾻密度
外源性给予雌⼆醇⼀个⽉后，与溶剂对照组⼩⿏相⽐，雌激素组⼩⿏⾻密度显著增⾼［（０．０３７±０．０６）ＶＳ（０．０４８±０．００７）ｇ／ｃｍ２，Ｐ＜Ｏ。０５，图３］，但是仍然低于ＷＴ对照组。
２．４ｖｏｎＫｏｓｓａ染⾊
ＶＤＲ√。⼩⿏雌⼆醇处理⼀个⽉后，与溶剂对照组⼩⿏相⽐，钙化⾻⼩梁⾯积显著增加，未钙化的类⾻质⾯积显著缩⼩（图４）。
０．０８
ｔ
茜０．０６鸟鸣涧王维
穆旦赞美Ｘ
重０．０４
∞
⼝
墨０．０２
ｏ
∞
０
Ｖ＼ｍｖｅｈｉｃｌｅＶＤＲＫＯ－ｖｅｈｉｃｌｅＶＤＲＫＯ．Ｅ
图３．⾻密度测定结果
Ｆｉｇ．３．Ｂｏｎｅｄｅｎｓｉｔｙ．Ｔｈｅｖａｌｕｅｉｓ
ｍｅａｎｓ＋ＳＥＭｏｆｄｅｔｅｒｍｉｎａ—ｔｉｏｎｓｆｒｏｍ６ｍｉｃｅｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ．＋Ｐ＜Ｏ．０５ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＶＤＲＫＯ—ｖｅｈｉｃｌｅｇｒｏｕｐ．
图４．胫⾻钙化⾻⼩梁和类⾻质⾯积
Ｆｉｇ．４．Ｏｓｔｅｏｉｄｖｏｌｕｍｅａｎｄｍｉｎｅｒａｌｉｚｅｄｔｒａｂｅｃｕｌａｒａｒｅａ．Ａ：ＭｉｃｒｏｇｒａｐｈｓｆｒｏｍｕｎｄｅｃａｌｃｉｆｉｅｄｓｅｃｔｉｏｎｓｓｔａｉｎｅｄｂｙｖｏｎＫｏｓｓａｐｒｏｃｅｄｕｒｅ．Ｂｌｕｅａｒｅａｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓｏｓｔｅｏｉｄｓａｎｄｂｌａｃｋａｒｅａｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓｍｉｎｅｒａｌｉｚｅｄｔｒａｂｅｃｕｌａｒ．Ｓｃａｌｅｂａｒ，１００Ｕｍ．⽈：Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｏｓｔｅｏｉｄｖｏｌｕｍｅａｎｄｍｉｎｅｒａｌｉｚｅｄｔｒａｂｅｃｕｌａｒａｒｅａｍｅａｓｕｒｅｄｏｎｃｒｏｓｓ—ｓｅｃｔｉｏｎｓ
ｂｙｃｏｍｐｕｔｅｒｉｍａｇｅａｎａｌｙｓｉｓｓｏｆｔｗａｒｅ．Ｔｂ．Ａｒ，ｍｉｎｅｒａｌｉｚｅｄｔｒａｂｅｃｕｌａｒａｒｅａ；ＯＷＢＶ．ｏｓｔｅｏｉｄｖｏｌｕｍｅｒｅｌａｔｉｖｅｔｏｂｏｎｅｖｏｌｕｍｅ．Ａｌｌｖａｌｕｅｓａｒｅｍｅａｎｓ＋ＳＥＭｆｒｏｍ６ｍｉｃｅｐｅｒｇｒｏｕｐ．＋Ｐ＜０．０ｌｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇＶＤＲＫＯ—ｖｅｈｉｃｌｅｇｒｏｕｐ．
公孙胜人物简介３讨论
维⽣素Ｄ在机体⾻和钙代谢过程中起着重要的作⽤。从⽪肤和肠道吸收的维⽣素Ｄ经过肝脏和肾脏两次羟化后形成其活性形式——１，２５⼆羟基维⽣素ｎ。后者通过位于细胞核的ＶＤＲ发挥⽣理作⽤。ＶＤＲ－／－⼩⿏表现出低⾎钙、⾻质软化等佝偻病样表型。
雌激素是另⼀个对⾻和钙代谢具有重要调节作⽤的激素。它可以增加碱性磷酸酶和Ｉ型胶原蛋⽩的表达，调节甲状旁腺激素对成⾻细胞的反应性⼝】。⽽雌激素缺乏可以导致破⾻细胞活性增加、⾻转换加快、。肾脏钙排泄增加哺１和肠道钙吸收减少＂１。因
此，雌激素缺乏是引起绝经后⼥性⾻质疏松的主要 万⽅数据
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雌激素改善维⽣素D受体基因敲除雌性⼩⿏的⾻、钙代谢
作者：李冰燕，童建，张增利， LI Bing-Yan， TONG Jian， ZHANG Zeng-Li
作者单位：苏州⼤学放射医学与公共卫⽣学院，苏州,215123
刊名：
⽣理学报
英⽂刊名：ACTA PHYSIOLOGICA SINICA
82年属相年，卷(期)：2006,58(6)
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本⽂链接：/doc/69e8aeacb4daa58da1114a4a.html /Periodical_shenglxb200606009.aspx
