pH9．0Tris—EDTA和pH6．0Citrate在抗
原修复中的应用
2005年11月第34卷第11期ChinJPathol,November2005,V ol34,No.11
铺片时再把血管剖开，而且尽量小心，防止利器损伤内膜.
血管腔内的冲洗比较困难，需要多次浸泡以及反复冲洗，冲
柑橘园洗时用细于管腔的钝针头，匀速缓慢的推水流；在冲洗管
腔的间隔用PBS浸泡，可以I叫时以摇床摇晃，以尽量洗净残
小升初英语试卷
留的抗体.操作过程中避免强光照射，但一般的光线不造成
危害.在没有激光激发的情况下，一般的荧光素都可以保持
良好的稳定性.
本方法可用以观察内皮损伤后，不同时间点及加入了不
同的干预因素的情况下，血管修复的情况.例如加入的药物
或细胞也带有荧光标记，可以检测其在局部的表达及与血管
内皮各种细胞的关系；可以以抗其他成分如血小板，单核细
胞等的特异性抗体来检测内皮表面的炎症细胞浸润以及血
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栓形成等情况及其程度；也可以扩展到其他的组织如浆膜
等，任何平面的组织都可以在组织铺片上进行直接/间接免山西大学图书馆
疫荧光以观察整个表面的情况.
参考文献
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美少男之恋
2LampugnaniMG,ResnatiM.RaiteriM,eta1.llcontacts.JCell
Bio1.1992.1l8:l5l1.1522.
pH9.0Tris—EDTA和pH6.0Citrate在抗原修复中的应用
骆新兰刘艳辉庄恒国蔡秀玲许洁
甲醛是形态学和免疫组织化学的标准固定液.但是，经
甲醛固定的组织常引起蛋白质空问结构的改变而导致抗原决定簇的封闭.抗原决定簇是否充分暴露，是免疫组织化学成败的关键因素之一.抗原修复技术在石蜡切片免疫组织化学染色中是一种简单有效的增强方法，但目前尚没有单一的化学物质既能作为基本的修复液又能作为最佳的抗原修复液，为了确定理想的修复液，我们采用"组合实验"的方法，比较了0.05mol/LTris+0.001mot/IEDTApH9.0(简
称pH9.0Tris-EDTA)和0.01mol/LpH6.0Citrate微波热修
复及不修复的情况下，免疫组织化学染色的表达效果.
一
，材料与方法
1.组织来源：选取被检测的抗体能表达的正常或肿瘤
组织，所有组织均为我院手术切除的新鲜标本或活检小标本，组织用4%缓冲中性甲醛固定，常规脱水，透明，浸蜡和
包埋，连续切片15～20张(检测同一抗体所需)，切片厚
2m,60~C烤箱烤片1h.
2.试剂及显色试剂盒：孕激素受体(PR)，雌激素受体(ER),bB2,CD44,p27,p21,p53,Ki-67,p63,
bcl-6,bcl一2,CD3(F7.2.38),CD34,CD20cy，白细胞共同抗原(LCA),CD79a,CD45RO,CD45RA,CD68(KP1),CD68 (PGM1),CD23,ALK1,CD15,CD30，颗粒酶B(GranzymeB), CD5，髓过氧化物酶(MPO)，浆细胞(VS38C)，末端脱氧核
酸转移酶(TDT)，肌动蛋白(HHF35)，平滑肌肌动蛋白(SMA)，波形蛋白,MUM1,Calretinin，问皮细胞(Mesothelial Cell,MC)，细胞角蛋白5/6(CK5/6)，上皮抗原(Ber—EP4),
高考数学2022甲状腺髓过氧化物酶(TPO)，甲状腺转录因子.1(ITl1F一1),
妈妈的呼唤
作者单位:510080广州，广东省人民医院病理科
(收稿日期:2005-034)1)
(本文编辑：常秀青)
杨业P504,CD117，上皮膜抗原(EMA)，癌胚抗原(CEA)，细胞角
蛋白(CK),CD31，第八因子(F8/86)，第八因子(多克隆),
细胞角蛋白(高分子量,HMW.CK)，细胞角蛋白8(CK8),S一100,CK7,CK20,p16(E6H4)(以上抗体是Dako公司产品);
前列腺特异性抗原(PSA)，雄激素受体(AR)，嗜铬蛋白A
(C异A)，突触素(Syn),MMP-9，神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)，黑色素瘤(HMB45)(以上产品购自福州迈新生物
技术有限公司);CD3(PSI),CD10,CD56,CD44V6,p16
(6H12)(以上产品为Novocastra公司产品)；钙黏附蛋白E (E—cadherin,ECD)(美国Zymed公司产品),TI
A-1(苏州基因公司提供);ChemMateEnVisionTM/HRP试剂盒为Dako公
司产品.
3.实验仪器:National微波炉一台，功率为750W；自动
免疫组织化学染色仪一台(Dako公司).
4.实验方案的设置：以抗体说明书作为实验的蓝本，结
合本实验室的条件，再参考北欧的NordiQC和UKNEQAS免疫组织化学质控中心所提供的某些抗体的最佳修复方法和修复液设置实验方案，浓缩抗体采用成倍稀释的梯度进行预实验，实验结果采用双盲法进行评分，以阳性信号强，定位准确，背景无非特异性着色的修复方法和修复液作为该抗体最佳的预处理方法.
5.切片预处理及免疫组织化学的检测程序：切片常规
脱蜡至水化,3%HO处理10min，蒸馏水洗；微波高档预热
抗原修复液5min，此时液温约95℃～98~C，将切片置入已预热的抗原修复液中，先高档将抗原修复液煮沸，再将微波档
次调至Defrost档与中低档之间(功率约500W)，维持15～
20min(液温99~C～100~C)，待修复液回温后再行免疫组织化学的检测——用Dako自动免疫组织化学染色仪进行免疫组织化学染色(一抗孵育60min,PBS冲洗；二抗孵育30
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