第12卷第3期1999年8月
同 位 素
Jou rnal of Iso topes
V o l.12 N o.3
A ug.1999
牙龈组织TNF-Α含量的R I A及其与牙周炎相关关系的观察
赵敬杰 杨 霞 侯桂华 王维岳 王浩丹
(山东医科大学同位素室，济南250012)
贾红英李岩涛 (山东医科大学卫生统计教研室，济南250012) (山东医科大学口腔医院内科，济南250012)
摘要 选取了42例牙周炎患者和15例正常人作对照，采用放射免疫检测方法对牙周炎龈组织及正常龈组织中TN F2Α含量进行测定，并分析其与部分牙周临床指标的相关性。结果表明：牙
周炎组与对照组相比，有显著性差异。这说明TN F2Α参与了牙周病的发病过程。TN F2Α与临床指
社区用英语怎么说标的关系，进一步说明TN F2Α与牙周炎症程度及组织破坏有关。
温馨壁纸关键词 牙周炎 龈组织 TN F2Α 放射免疫分析
中图法分类号 R8171498 R781141
dnf刺客加点肿瘤坏死因子(TN F2Α)是一种具有多种生物学活性的糖蛋白，不仅能抗肿瘤，抗病毒，而且在炎症反应和免疫应答中发挥作用，被视为重要的炎症介质之一[1]。离体实验证明:TN F2Α能刺激骨吸收及抑制骨形成，也是刺激前列腺素与蛋白酶产生的主要因子[2]。这提示TN F2Α可能与牙周病变过程中的组织破坏有关，使其成为近年来牙周病学研究的一个热点。本工作拟采用R I A对牙龈组织中TN F2Α的含量进行检测，并将其与牙周临床指标进行相关分析，以阐明TN F2Α在牙周病中的作用，为进一步研究牙周病的发病机理及今后通过免疫调节或抗炎治疗牙周病提供实验及理论依据。
1 实验材料
111 研究对象
(1)对照组：即健康牙龈组(H)，共15例，其中男7例，女8例；年龄12～45岁，平均年龄2512岁。所取
牙龈色泽正常，质地坚实，无充血水肿，无探诊疼痛及出血等炎症表现。龈沟在2 mm以内，口腔卫生较好[3]。
(2)牙周炎组：共42例，测定牙牙龈松软红肿,X线检查牙槽骨有不同程度的水平吸收或角形吸收，牙周袋深度≥4mm，所测牙均无龋洞。根据年龄、临床症状、X线检查又分为两组，即成人牙周炎组(A P)与快速进展型牙周炎组(R PP)。A P：共30例，其中男16例，女14例；年
赵敬杰：男,27岁，实验师，实验核医学专业
收稿日期:1998211210 修改稿收到日期:1999205220
061同 位 素 第12卷
龄21～68岁，平均年龄4411岁。病例选择标准：患者均为成年人,30岁以上多见；病变可局限少数牙，也可散在分布；病变发展缓慢，病程长。R PP：共12例，其中女8例，男4例，年龄19～33岁，平均年龄2712岁。病例选择标准：年龄小于35岁；病损广泛，感染多数牙，无一致性分布；病史短，牙槽骨吸收速度快，迅速出现牙齿松动、移位,X线片示牙槽骨有严重的垂直及水平吸收[3]。
所有受试者皆无明显全身性疾病，近半年未做过任何牙周治疗,3个月内未用过抗生素、止痛剂及免疫制剂。
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112 主要仪器及试剂
TN F2Α放免药盒由中国原子能科学研究院同位素研究所提供;Χ25500计数器由美国B ackm an生产；美国杜邦RC3C大容量离心机；杭州仪表电机厂生产的06022F型组织匀浆机；美国WM 250 52 P振荡器；瑞士m ettler PM100电子天平；美国Series500超低温冰箱。
2 测定方法
211 龈沟液量的测定
取与龈沟液成分相似的正常人血清为标准，用5ΛL加样器分别取011、012、013……114、115、210、510ΛL的血清滴于定量分析滤纸，然后用游标卡尺测量其浸湿面积；每个点重复两次，取其平均值绘制标准曲线，用相关系数公式计算标准血清量与滤纸浸湿面积间的相关性，并求出回归方程。
龈沟液的收集：在行临床指标检查之前收集龈沟液。除去龈沟液收集部位的龈上牙石和菌斑，将患牙擦干，棉卷隔湿，气枪轻轻吹干牙面。取同样规格的滤纸条插入患牙近中颊侧或远中颊侧的牙袋内，有阻力感时停止插入，留置1m in后取出，放入空微离心管中。若滤纸上有血则弃去，重新选牙。用游标卡尺测量滤纸浸湿面积，依据标准曲线，计算出相应的龈沟液量。212 牙周袋深度(PD)和出血指数(B I)的测定
用标准刻度探针测定牙周袋深度和出血指数。牙周袋深度根据其探诊深度分为3度[4]: 度(PD≤2mm)：袋底至龈缘距离≤2mm,X线片示牙槽骨无吸收; 度(2mm<PD≤6 mm):X线片示牙槽骨吸收≤1 2根长; 度(PD>6mm):X线片示牙槽骨吸收>1 2根长。龈出血指数参考文献[4]的标准分为四度。 度：轻探龈沟时不出血; 度：轻探龈沟时出血，牙龈外观正常; 度：探龈沟时出血，牙龈变红，无肿胀; 度：牙龈有溃疡或其它症状。
213 龈组织TNF-Α含量的测定
21311 牙龈标本的采集和处理 对照组的牙龈组织取自阻生齿及正畸牙拔除后切取的远中颊侧或近中颊侧正常龈组织。牙周炎组取自改良翻瓣术或牙周炎所致松动牙拔除术后切取的病变部位龈组织。将手术切取的牙龈组织置于冷生理盐水中，冼净血污和碎屑，吸干后放入塑料冷冻管中，立即置于液氮中冷冻保存。组织提取液的制备：从液氮中取出牙龈组织，解冻后电子天平精确称重；将龈组织用眼科手术剪剪碎，置于试管中，加入双蒸水使液体中组织含量为50g L；在冰水浴中用组织匀浆机以30s×2次、14000r m in匀浆，然后将组织匀浆液以3000r m in离心10m in，取上清液立即进行TN F2Α的检测。
21312 TN F2Α含量的测定方法 取012mL标准品、样品分别置于标准管、样品管中。除T 管、N SB管外，其余反应管均加入011mL TN F2Α抗体，充分混匀,4℃反应3h；然后各管中加入125I2TN F2Α011mL，充分混匀,4℃反应17h后，除总T管外每管加免疫分离剂500mL，充
图1 标准血清量与滤纸浸湿面积的关系
上升天蝎女分摇匀，室温放置15m in 后以3500r m in 离心
15m in ，弃上清液后测各管沉淀物放射性计数。
数
据处理采用logit 2log 模型，由计算机完成。
3 结 果
311 龈沟液量的测定
标准血清量与滤纸浸湿面积之间关系示于图
1。由图1可知标准血清量与滤纸浸湿面积间有显
择字组词著正相关，相关系数r =0.9905,P <0.01，回归
方程为y =6.02x +2.627。由于龈沟液成分与血
清相似，故可以从滤纸上龈沟液的浸湿面积换算
出相应的龈沟液量。
312 龈组织中TNF -Α的含量
检测结果列于表1。由表1可知:H 、A P 、R PP
三组TN F 2Α含量呈现递增趋势；病变组与对照组
之间TN F 2Α含量有显著性差异,A P 与R PP 之间
TN F 2Α含量无显著性差异。表1 龈组织中TNF -Α的含量(x θ±s )
组别
例数TN F 2Α含量 Λg ·g -1t 检验P H
152.293±0.4482.4241)<0.05A P
虐待小说304.232±0.9283.0362)<0.01R PP 124.570±1.0130.0623)>0.05
注:1)A P 与H 比较;2)R PP 与H 比较;3)R PP 与A P 比较
图2 牙周炎组龈沟液量与TNF -Α含量的关系313 TNF -Α含量与部分牙周临床指标的关系
31311 与龈沟液量的关系 结果示于图2。由图
2可知：牙周炎组龈沟液量与TN F 2Α含量呈正相
关(r =0.734,P <0.05)，即随龈沟液量的增加,
TN F 2Α含量亦增加。
31312 与牙周袋深度(PD )的关系 结果列于表
2。由表2可知：随牙周袋的不断加深，龈组织中
TN F 2Α含量逐渐增高。经t 检验:PD >6mm 时,
TN F 2Α含量与正常组(PD ≤2mm )相比，有显著
性差异(P <0.01);2mm <PD ≤6mm 时,TN F 2Α
含量与正常组相比，差异无显著性(P >0.05)。PD
>6mm 与2mm <PD ≤6mm 相比,TN F 2Α含量有显著性差异。说明当袋深超过6mm 时,TN F 2Α
161 第3期 赵敬杰等：牙龈组织TN F 2Α含量的R I A 及其与牙周炎相关关系的观察
261同 位 素 第12卷 水平显著提高。
表2 PD与龈组织中TNF-Α含量的关系
PD mm例数TN F2Α含量 Λg·g-1t检验P
≤2152.293±0.448
2<PD≤6142.983±0.5671.872>0.05 >6284.884±0.7288.678<0.01
31313 与龈沟出血指数(B I)的关系 结果列于表3。由表3可知：经t检验,B I=3和B I=4时,TN F2Α含量与B I=1或2相比，均有显著性差异(P<0.01)，但B I=3与B I=4的TN F2Α含量相比无显著性差异。
表3 B I与龈组织中TNF-Α含量的关系
B I例数TN F2Α含量 Λg·g-1t检验P
1或2182.393±0.467
3223.889±0.3534.267<0.01
4175.089±0.8695.343<0.01
4 讨 论
牙周病绝大部分是细菌感染性疾病，革兰氏阴性菌(G-)是牙周病主要致病菌[5]。内毒素是G-菌所独有的一种致病物质。越来越多的证据表明[6]，内毒素诱导的病理生理效应并不仅仅通过内毒素直接发挥损伤作用，还可以激活宿主防御细胞(包括T、B淋巴细胞，巨噬细胞等)产生和释放大量中介物质，介导并加重牙周组织的破坏过程，其中肿瘤坏死因子是主要的炎性介质之一。
目前国内外对龈组织中TN F2Α的检测多采用E lis A方法[7]，放免测定法的报道尚未见到。本工作选用放免法对龈组织中TN F2Α的含量进行检测，以期提高检测的灵敏度和准确度，并为今后TN F2Α成为临床牙周监测指标提供一种可行的方法。TN F2Α放免检测结果表明，正常龈组织中存在低水平的TN F2Α，牙周炎时其含量显著增高，这与E lis A法[7]基本一致。另外R PP组比A P组有增加趋势，这可能与R PP组龈下菌斑中含有更多的G-厌氧菌有关，但两者间TN F2Α的含量无显著性差异，这可能与
个体量少有关。口腔的特殊环境决定了在正常的牙龈组织中也存在着少量的巨噬细胞，它们产生低水平的TN F2Α对维持口腔粘膜的完整性有重要意义。当外界刺激达到一定程度时，其含量明显增多，便会产生破坏作用。
通过对TN F2Α含量与龈沟液量、牙周袋深度、龈出血指数等临床指标进行相关分析，结果表明：龈沟液量与TN F2Α呈正相关关系(r=0.734,P<0.05)，由此表明该因子与牙周炎症程度有关；牙周袋深度(PD)在一定程度上反映了牙周组织的破坏情况。破坏水平不同,TN F2Α的含量也不相同。实验结果表明2mm<PD≤6mm时,TN F2Α含量较正常组(PD≤2mm)增加，但无显著性差异;PD>6mm时,TN F2Α含量明显增加，与正常组及2mm<PD≤6mm组
相比，均有显著性差异。这是因为随着牙周袋深度增加,G -厌氧菌数量及内毒素含量相应增多，会产生更多的TN F 2Α，从而导致牙周组织破坏加重，形成更深的牙周袋。TN F 2Α在其间可能发挥了重要的作用。出血指数(B I )是反映牙龈炎症状态的一个敏感指标。当B I =3或4时,TN F 2Α含量均比B I =1或2时明显增加，差异有显著性。这可能与牙周病变部位增多的巨噬细胞释放出更多的TN F 2Α有关。TN F 2Α与以上临床指标的相关性分析，有助于阐明TN F 2Α在牙周病变过程中的炎性介导及组织破坏作用，为今后TN F 2Α作为牙周监测指标及临床开辟炎性疾病治疗的新途径提供理论依据。
目前的研究仅能证明TN F 2Α与牙周病的发生、发展有关，但其具体机制尚不清楚，因此
TN F 2Α在口腔炎性疾病中的生理、
病理作用方式、部位及其分子机制尚需进一步探索。参 考 文 献
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FACT OR ΑIN GINGIVAL AND PER I ODONT IT IS
Zhao J ingjie Yang X ia Hou Gu ihua W ang W eiyue W ang H aodan
J ia Hongying L i Yan tao
(S hand ong M ed ica l U n iversity ,J inan 250012)
Abstract 42p eri odon titis p atien ts and 15health con tro ls are lected to determ ine the
am oun t of tum o r necro sis facto r 2Α(TN F 2Α
)
in inflam ed gin ival and the no rm al gingival by R I A .T he elati on s betw een TN F 2Αand clin ical p aram eters are analyd .T he resu lts show that the level of TN F 2Αin inflam ed gingival is h igher than that in the con tro ls (P <0.01).T he relati on sh i p betw een TN F 2Αand clin ical p aram eters indicate that the level of TN F 2Αpo sitively co rrelate to the degree of p eri odon titis and group dam agem en t .It indicates TN F 2Αm ay be one of the m echan is m in the p athogenesis of p eri odon titis dia .
Key words p eri odon titis gingival TN F 2Α radi o i m m unoassay (R I A )361 第3期 赵敬杰等：牙龈组织TN F 2Α含量的R I A 及其与牙周炎相关关系的观察
炒牛肚
