酵母双杂交实验方法
一）酵母感受态细胞的制备
1. 于YPDA平板上划线培养酵母Y2H Gold菌株，30℃培养约3d；
2. 挑取单菌落（2-3mm）接种于YPDA液体培养基中，30℃、250rpm摇培8-12h；
3. 接种0.5μL至5mL YPDA液体培养基中（1:1W的接种比例），30℃、250rpm摇培至OD600 = 0.15~0.3（16-20h）；aiming
4. 700g离心5min，弃上清后用10mL YPDA（2倍体积）重悬；
5. 30℃、230rpm摇培至OD600 = 0.4~0.5（3-5h）；
6. 将10mL菌液分装成2管5mL感情淡了的句子，700g离心5min，用3mL ddH2O重悬（茶叶的保质期有多久0.6倍体积）；
7. 700g离心5min，用150μL 1.1×TE/LiAc重悬（0.05倍体积）；公众号尺寸
8. 转移至1.5mL离心管后，高速离心15s；
9. 用60μL 1.1×TE/LiAc重悬（0.02倍体积）。
二）酵母感受态转化方法
1. 感受态春日诗配画细胞转化体系：
感受态细胞 50μL
Yeastmaker Carrier DNA（10ng/μL） 5μL
质粒DNA 100ng*
新乐洗衣机*共转化时，prey的质粒DNA量两倍于bait
于50μL 酵母感受态细胞中依次加入5μL Carrier DNA、100ng 质粒DNA，共转化时，猎物蛋白（未知蛋白）质粒DNA量为诱饵蛋白的2倍。消防安全管理
2. 混匀后加入500μL PEG/LiAc，30℃孵育30min，每10min轻微混匀；
3. 加入20μL DMSO，42℃水浴15min，威客兼职每5min轻微混匀；
4. 10000rpm离心15s，用1mL YPD Plus重悬；
5. 10000rpm离心15s，用1mL 0.9% NaCl重悬；
6. 涂布于二缺培养基，30℃培养。
