PCR
Taq, Taq Plus,LAmp
【简述】这三个产品都属于Taq类别的产品,后两种是在Taq基础上开发出来的改良版的Taq酶,都属于低保真度类型的检测鉴定用酶。
【特点】
Taq,最常用的分子生物学试剂,扩增长度一般都为2kb以内。适用于一些基本的检测鉴定试验,非常常用,市场极大。
Taq Plus,改良版的Taq酶,提高了扩增效率和扩增能力,扩增产量高于Taq,对基因组或者cDNA等复杂模板适应度高于Taq。扩增长度为简单模板(质粒等)20kb以内,复杂模板(基因组或者cDNA)10kb以内。
LAmp,改良版的Taq酶,提高了Taq酶对长片段的扩增能力。性能和Taq Plus类似。(可以和Taq Plus替换使用)
【改良原理】
Taq酶虽然扩增能力很强,但是因其无校对活性,所以扩增错配较多,尤其是对于长片段扩增而言,错配碱基将导致Taq酶与模板的解离,因此其扩增长度往往只能到2kb。为了克服这一缺点,Vazyme将Taq酶改造,使其拥有了适度的校对活性,有效解决了这一问题。
【常见问题】
1. 扩增模板(纯度完整度)
2. 扩增引物(是否降解,是否成功使用过)
3. 扩增程序(标准程序参见说明书)
4. TA克隆的问题:如果用户扩增后续实验要做TA克隆,推荐用户使用Taq,因后两种酶做TA克隆的效率要低于Taq酶。
【产品优势】
技术壁垒相对简单,因此主要优势在于价格和稳定性。
AceTaq耿弇TM
【简述】这个产品也属于Taq类别的产品,是在Taq基础上开发出来的改良版的Taq酶,都属于低保真度类型的检测鉴定用酶。
【特点】
AceTaq,热启动版本的(Hot-Start)Taq酶。常温下以及预变性之前的升温阶段完全没有聚合酶活性。只有在95℃加热5分钟之后才能释放酶活转变为Taq酶。该产品较Taq而言,具有更高的扩增特异性。因此扩增条带更单一,扩增所需要的模板量更低(个位数拷贝的基因组也可正常扩增)。但是少数情况下,该酶的扩增效率略低(相对于Taq而言)属正常情况。扩增长度和taq酶一样,一般要求小于2kb。
【改良原理】
非特异性扩增对于Taq酶扩增而言,有两个负面效应:一是非特性扩增的存在会干扰后续实验;二是非特异性扩增的存在会减弱目标扩增的效率,导致目标扩增产无量降低甚至消失。简而言之,非特异性扩增时PCR反应的毒药。
PCR过程中非特异性扩增主要产生于反应体系配制和预变性升温阶段,只要让这一过程中Taq酶没有聚合酶活性就可以有效抑制非特异性扩增。Vazyme使用化学修饰的方法修饰了Taq酶,得到的AceTaq在常温下和预变性升温阶段完全没有酶活。和其他公司采用的单克隆抗体封闭酶活相比,化学修饰法对酶活的封闭更完全,热启动更严谨,因此扩增更特异。
【常见问题】
1. 扩增模板(纯度完整度)
2. 扩增引物(是否降解,是否成功使用过)
3. 扩增程序(标准程序参见说明书,预变性必须超过5分钟,用于充分释放酶活)
【产品优势】
特异性更高,检测下限更低(正常扩增需要的最低模板量)
PhantaTM
【简述】基于pfu的第三代超保真聚合酶,保真度是普通taq酶的50多倍。用于需要保真度的PCR扩增。
【特点】
1.快:极限速度1秒钟2.5kb。推荐用户15秒/kb
2.长:保真度越高的酶扩增能力越差,phanta克服了这一点。简单模板30kb,复杂模板10kb,广泛适用。
3. 保真度高:Taq酶的50多呗,Pfu的6倍
4. 扩增能力强:对模板的解读能力强,扩增产量高,广泛适用于各种类型模板。
【改良原理】
保真度越高的酶扩增能力越差,因此一般高保真酶对于长片段、复杂模板都无法有效扩增。Vazyme对pfu做了系统的蛋白工程改造,显著提高了pfu对模板的亲和力和行进性。此外,Vazyme对Phanta的反应缓冲体系进行了反复优化,并添加了扩增增强子,有效的去
除了高保真酶容易dUTP中毒的问题。因此,phanta聚合酶无论对于短片段还是长片段,简单模板还是复杂模板都具有优异的扩增能力。
【常见问题】
1. 扩增模板(纯度完整度)
2. 扩增引物(是否降解,是否成功使用过)
3. 扩增程序(延伸时间不能超过30秒/kb)
【产品优势】
保真度高、扩增速度快、长片段扩增能力强、扩增产量高、扩增特异性强、模板适应性广
PCR Enhancer
【简述】PCR扩增增强剂混合液,任何PCR用酶都适用
【特点】
1. 提高GC-Rich片段扩增能力
2. 提高具有高级结构的片段的扩增能力
3. 有时候可以让不能扩的便能扩,能扩的变得扩的更好;当然也有让能扩的变得不能扩的时候。建议用户在无法正常扩增时尝试。
【改良原理】
多种PCR增强剂混合物
【常见问题】
有时候可以让不能扩的便能扩,能扩的变得扩的更好;当然也有让能扩的变得不能扩的时候。建议用户在无法正常扩增时尝试。
使用后聚合酶的保真度可能会降低!建议用户酌情使用
【产品优势】
一个非常神奇的溶液,兼容所有的PCR用酶
RT-PCR
RNA Keeper Tissue Stabilizer怎么画鸟
【简述】细胞、组织日后用于RNA提取,推荐用户将其保存在该溶液中
【特点】细胞、组织高稳定性保存液,可以有效抑制存贮过程中RNA的降解。
【改良原理】莲衣
RNA是逆转录(RT)反应的模板,因此其质量直接决定逆转录是否成功。因为RNA酶非常强悍,因此RNA极易被降解,这将导致逆转录无法完成。为了保证RNA的完成性,新鲜细胞、组织离体后因迅速提取。如果无法立即提取,因将细胞组织用合适的方法保存,避免RNA的降解。该产品为多种RNA抑制剂的混合物,可高效抑制RNAa酶活性,进而提高细胞、组织保存成功率。新鲜组织在该溶液中可以实现:37 ℃保存1天,25 ℃保存1周,4 ℃保存4周,-20 ℃/-80 ℃长期保存后RNA无降解。
【常见问题】
作业规程
保存效果不佳
推荐用户将组织块剪碎之后再泡在该产品里。
【产品优势】
和进口的相比便宜{RNAlater,Ambion},而且性能非常稳定
RNA isolater Total RNA Extraction Reagent
【简述】总RNA提取试剂,也叫TRIZOL
【特点】系统成熟,重复性好,成本低
【改良原理】无改良
【常见问题】
1. 样品保存:新鲜的组织或细胞如果不是立刻提取需液氮速冻后-80度保存
2. 提取问题:A:组织、细胞样品不宜太多
B: 基因组污染:氯仿抽提步骤低温离心;上清吸取不宜太完全
C:组织样品破碎方式:最好为匀浆或者液氮研磨
【产品优势】
和进口的相比便宜,而且性能非常稳定
Murine Rna inhibitor
【简述】逆转录反应可能会用到的RNA酶抑制剂
【特点】
高抗氧化能力(非常稳定),重组表达(纯度非常高),无需高浓度DTT存在(与RT-PCR/qPCR反应体系高度兼容)
【改良原理】
1. 更换人来源的为鼠来源的
2. 可溶性重组表达
【常见问题】
暂无
山西省考试网
【产品优势】
和进口的相比便宜,而且性能非常稳定
HiScript Rever TranscriptaTM
【简述】在MLV(H-)基础上改造而成的高效逆转录用酶
常便【特点】
1. 热稳定性高,最高可耐受55℃的反应温度(有效消除RNA二级结构对逆转录反应的影响)
2. 高效逆转录,和同类产品相比在50℃拥有最高的cDNA产量
3. 增强了与RNA模板的亲和力,一方面可获得更多全长的cDNA产物;令一方面提高了逆转录灵敏度,可以检测低至1pg的总RNA
4. 具有更高的逆转录保真度,减少了逆转录过程中错配的可能性
【改良原理】
逆转录过程中最常见的问题就是RNA二级结构了。如果逆转录在较低的温度下进行,RNA的二级结构往往会导致逆转录反应的提前终止;如果逆转录反应在高温下进行,常规的逆转录酶又极容易失活。因此,Vazyme对MLV进行了系统的工程学修改。首先提高了其耐高温能力,这样逆转录反应就可以在更高的温度下进行,显著减弱了RNA高级结构对逆转录反应的影响。其次,我们提高了MLV对模板的亲和力,使得等多的全长cDNA可以被成功合成,因此HiScript具有非常高的灵敏度,可以有效检测低至1pg的总RNA,使得少量模板以及低拷贝基因的逆转录也能正常完成。最后,我们在MLV的基础上进一步提高了其逆转录保真度,减少了逆转录过程中错配的可能性。
【常见问题】
吃月饼英语1. RNA模板(纯度完整度)
2. 逆转录引物(是否降解,是否成功使用过)
戒骄戒躁的意思3. 逆转录程序(参见说明书要求)
4. cDNA扩增体系是否正常工作
【产品优势】
高温逆转录、检测灵敏度、逆转录保真度高
HiScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit
HiScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit ( For qPCR)
【简述】包含HiScript的第一链cDNA合成试剂盒
【特点】1. 酶的特点同HiScript
2. 试剂盒特点:
HiScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit:反应所需要的酶合并为Enzyme Mix,所需要的缓冲液及dNTP合并为2 X Reaction Mix,只需要加入模板和引物(用户自备,Oligo dT,随机引物或者基因特异性引物均可)即可开始反应。使用便捷。
HiScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit( For qPCR):反应所需要的酶合并为qRT Enzyme Mix,所需要的缓冲液、dNTP、引物合并为2 X qRT Mix,只需要加入模板即可开始反应。其中2 X qRT Mix中的引物为Oligo dT引物和随机引物的混合物,使逆转录cDNA更适合后续qPCR反应。
【改良原理】
HiScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit:合并组分,简化操作。反复测试提高稳定性。
HiScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit( For qPCR):
1. 合并组分,简化操作。反复测试提高稳定性。
2. Oligo dT或者随机引物单独进行逆转录时,RNA链的不同位置逆转录效率很不均匀,不利于qPCR对基因量的准确测定。该试剂盒提供了混合引物做为逆转录引物(经过反复优化),消除了逆转录的不均匀性。