黄毛黄侧耳的生物学特性和驯化栽培
对黄毛黄侧耳(Phyllotopsis nidulans)的生物学特性及其驯化栽培进行研究,结果表明:菌丝生长的最适温度为25 ℃,最适pH为6,试验范围内最适碳源为果糖,最适氮源为蛋白胨,碳氮比对菌丝生长影响不明显;在分别以硬杂木屑、玉米芯和两者混合主料的培养料上均能形成子实体,在木屑和玉米芯混合的培养料上生物转化率最高。
黄毛黄侧耳; 生物学特性; 驯化; 栽培; 生物转化率
黄毛黄侧耳(Phyllotopsis nidulans),别名黄毛侧耳,隶属于担子菌门(Basidiomycota)、层菌纲(Agaricomycetes)、伞菌目(Agariales)、口蘑科(Tricholomataceae)、黄侧耳属(Phyllotopsis)[1]。主要在中国、日本、北美洲、俄罗斯(远东地区)、英国、芬兰、印度和格鲁吉亚有分布;中国主要分布在黑龙江、吉林、甘肃、新疆、青海、西藏、广西、广东、四川、山西等省区[2-7],主要生长于蒙古栎、阔叶树倒木和针叶树上,群生或丛生,引起木材白色腐朽,黄毛黄侧耳子实体菌盖宽2~7 cm,扁半球形或肾形,黄色至黄褐色,有粗毛,边缘波状,内卷或反卷。菌褶橘黄色,稍稀,近直生至延生。菌肉白色至淡黄色,薄,无菌柄[8]。NOZAKI等[9]研究表明,黄
毛黄侧耳提取物对工业染料有脱色作用。国内外对该真菌的报道多是对其分布及形态学的描述,据文献记载该种可以食用[10],但野生菌市场中很少有售,未见有对其驯化和生物学特性的相关报道。
1 材料与方法
1.1菌株
由黑龙江省丰林国家级自然保护区野生的黄毛黄侧耳(P. nidulans)的子实体分离得到,由吉林农业大学食药用菌工程研究中心图力古尔教授鉴定。
1.2培养基质
菌种保藏及测试用培养基(改良PDA培养基): 200 g马铃薯,20 g葡萄糖,3 g磷酸二氢钾,1.5 g硫酸镁,20 g琼脂,加蒸馏水定容至1 L。
马铃薯葡萄糖琼脂培养基:200 g马铃薯, 20 g葡萄糖,20 g琼脂,加蒸馏水定容至1 L。
栽培培养料配方:
配方1: 78%硬杂木屑,20%麦麸,1%石灰,1%石膏;
配方2: 78%玉米芯,20%麦麸,1%石灰,1%石膏;
配方3: 39%硬杂木屑,39%玉米芯,20%麦麸,1%石灰,1%石膏。
1.3方法
在进行温度、pH、氮源、碳源、碳氮比等对黄毛黄侧耳菌丝生长影响的试验中,每种处理10个重复,接种后25 ℃恒温(温度试验除外)黑暗条件下培养10 d,测量第5~10 天的菌丝日生长长度,计算菌丝生长速度。
1.3.1温度对菌丝生长的影响
改良PDA培养基,pH 值为6,0.1 MPa蒸汽灭菌0.5 h。用打孔器在平皿上取直径0.5 cm的菌种块,接种在改良PDA培养基平板中央。温度梯度为5、15、17、19、21、23、25、27、29、31和35 ℃。
1.3.2pH对菌丝生长的影响
接种方法同1.3.1。pH梯度为5、5.5、6、 6.5、7、7.5、8、8.5。用1 mol/L的NaOH和HCl调节pH。
1.3.3氮源对菌丝生长速度的影响
接种方法同1.3.1。在配好的无氮源培养基(20 g/L葡萄糖、20 g/L琼脂,pH=6)中,分别用硝酸铵、尿素、谷氨酸、蛋白胨、酵母膏、硝酸钾、氯化铵、硝酸钠作为氮源,纯氮用量为0.2%。
1.3.4碳源对菌丝生长速度的影响
在配好的无碳源培养基中(2 g蛋白胨、 20 g/L琼脂,pH=6)中,分别以淀粉、葡萄糖、玉米粉、蔗糖、麦芽糖、果糖、乳糖作为碳源,纯碳用量为0.2%。
1.3.5碳氮比对菌丝生长速度的影响
用不加入马铃薯的琼脂葡萄糖培养基,葡萄糖用量不变的情况下调节蛋白胨加入量,碳氮比梯度分别为10∶1、15∶1、20∶1、25∶1、30∶1、35∶1、40∶1。
1.3.6栽培试验
按配方1、2、3配好栽培培养料后,调节含水量在60%左右,采用17 cm×33 cm聚丙烯袋分装,平均每袋干料重450 g,121 ℃灭菌1.5 h,冷却后接种,置于25 ℃恒温培养箱内培养。观察并记录菌丝生长等情况。原基形成后在袋子上划口,于(23±1) ℃、湿度为85%~95%条件下进行出菇管理。计算生物学转化率。
生物学转化率=(子实体鲜重/培养料干重)×100%
金宇昌,等:黄毛黄侧耳的生物学特性和驯化栽培
2 结果与分析
2.1温度对菌丝生长速度的影响
菌丝生长受温度影响明显,最适温度为25~29 ℃,5 ℃和35 ℃菌丝生长缓慢(表1)。
2.2pH对菌丝生长速度的影响
菌丝在pH 5~8.5的培养基中均可生长,当pH 5~6.5时菌丝浓密、粗壮,pH 7~8.5次之,当pH大于7时菌丝长势明显较差(表2)
2.3氮源对菌丝生长速度的影响
不同的氮源菌丝生长速度不同,除尿素外,菌丝在其他氮源的培养基中均能生长。为硝酸铵和氯化铵时,菌丝生长速度快,但较稀疏。为蛋白胨时,菌丝浓密、健壮(表3)。
2.4碳源对菌丝生长速度的影响
菌丝在供试碳源中均能生长,乳糖中生长缓慢,果糖中生长速度最快,菌丝也较其他碳源粗壮。在供试碳源中,菌丝生长的最适碳源为果糖(表4)。
不同小写英文字母表示在P<0.05水平上差异显著; +++:菌丝长势浓密健壮;++:生长较浓密;+:生长稀疏
Different lower ca letters reprent a significant difference at P< 0.05. *+++: Very den; ++: moderately den; +: diffu2.5碳氮比对菌丝生长速度的影响
碳氮比对菌丝生长速度的影响不明显,当碳氮比在20∶1时,菌丝的生长速度最快,菌丝浓密、健壮(表5)。
2.6栽培
黄毛黄侧耳的菌丝稀疏,满袋后呈现树根状的几条主脉,各主脉间连续性差。试验中发现3种配方的培养基均能形成子实体。配方2菌丝长势强,菌丝浓密、粗壮,但生长速度较慢;配方1和3菌丝长势较弱,后者菌丝生长较快,且最早形成原基。配方3的生物转化率最高,为37.8%(表6)。
3 讨论
利用玉米芯生产食用菌应该是玉米产地的首选,栽培食用菌之后再作为沼气生产原料或直接作为燃料。目前,玉米芯多直接用作燃料,不仅浪费了资源,而且增加了CO 2 的排放。通过食用菌转化是实现循环经济产业模式的更有效途径。
本试验成功地对野生黄毛黄侧耳实现了人工驯化栽培,在试验范围内找到了其最适碳源、氮源、温度、pH,使今后大规模的生产成为可能。同时,黄毛黄侧耳与侧耳属的亲缘关系
较近,其成功驯化对不同属间的杂交育种提供有利材料。
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Selected Biological Characteristics and Artificial
Cultivation of Phyllotopsis nidulans
JIN Yuchang, LI Yu *
Engineering Rearch Center of Chine Ministry of Education for Edible and Medicinal Fungi,
Jilin Agricultural University, Changchun, Jilin 130118, China
Selected biological characteristics, and the artificial cultivation of a Phyllotopsis nidulans strain isolated from a P. nidulans fruit body collected in Fenglin National Nature Rerve in Heilongjiang Province, are described. Optimal temperature and pH values for mycelial growth were 25 ℃ and pH 6, respectively. Of the compounds tested, fructo and peptone were the preferred carbon and nitrogen sources respectively, but varying C∶N ratios between 10∶1 and 40∶1 had no significant effect on mycelial growth. Three test cultivation substrates all supported fruit body formation, and the highest biological efficiency ( 37.8%) was recorded using a formula consisting of 39% sawdust, 39% corncobs, 20% wheat bran, 1% lime and 1% gypsum.