扫描电镜与透射电镜样品制作详解

更新时间:2023-05-06 05:18:08 阅读：评论：0

相关仪器的信息：

透射电镜：JEOL(公司) JEM-1230（型号） TEM，产地：日本

超薄切片机：Reichert-Jung Ultracut E ultramicrotome，产地：奥地利

扫描电镜：Philips XL30 ESEM，产地：捷克

临界点干燥仪：Hitachi HCP-2 Critical point dryer，产地：日本

真空喷镀仪：Eiko IB5 ion coater，产地：日本

包埋剂：SPI-CHEM Spurr resin，产地：USA

TEM样品包埋块制作有关注意事项

一、取材：

1、动作迅速：组织离体后，应将其快速放入固定液中，使组织细胞尽可能保持原来的生活状态；

2、减少损伤：选择锋利切割器械，减少牵拉或挤压组织；

3、组织块大小：一般要小于1mm3。

二、固定：固定是指用化学固定剂或一些物理方法迅速杀死细胞

的过程，目的是尽可能保持细胞的原有生活状态，不发生位移，减少组织结构变化。固定剂的主要作用是使蛋白质、脂质等生物大分子发生某种交联。

1、用固定液固定的样品若漂浮在溶液表面，应通过抽真空的方法让样品沉入溶液中

2、使用锇酸的注意事项

I 通风橱中的锇酸溶液为2%的储备液，使用之前需用0.2MPBS或二甲砷酸盐缓冲液稀释成1%的锇酸溶液。

II 锇酸为剧毒、极易挥发的试剂，必须在通风橱中操作，废液必须收集在密闭容器中。第一次使用锇酸的同学，请务必获得老师或其它熟悉操作人员的指导。

三、漂洗：应彻底漂洗干净，减少固定液与固定液或与脱水剂之间的反应。

四、脱水：脱水是将组织中的游离水彻底清除的过程。由于常用的包埋剂大都是非水溶性树脂，只有将生物组织中的游离水清除干净，包埋剂才能浸入组织。

脱水过程中应注意：

I 逐级脱水而不能急剧脱水；

II更换溶液时动作要快，特别是不要让组织离开溶液，否则会在组织内外产生气泡；

III脱水过程中若要长时间停留或过夜，应放在70%脱水剂中，并在

4℃保存。

五、渗透：渗透就是用包埋剂逐渐取代组织中的脱水剂，使细胞内外

空隙被包埋剂所填充。包埋剂通常由树脂、硬化剂、增塑剂及催化剂4种试剂按一定比例配制而成。

包埋剂配制及使用过程中的注意事项：

I 所有容器及玻璃棒等应是清洁和干燥的；

II配制过程中应搅拌均匀，使用过程中应避免异物，特别是水、乙醇、丙酮等混入包埋剂；

III配制好的包埋剂应密封保存，避免受潮。剩余包埋剂可密封并储存在-10—-20℃冰箱中，延长其使用期。

表1 戊二醛溶液的配制

表2 0.2M磷酸缓冲液（PBS）的配制

A液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液	B液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液
Na2HPO4 28.4g 或Na2HPO4.H2O 31.61g 或Na2HPO4.2H2O 35.6g 或Na2HPO4.7H2O 53.63g 或Na2HPO4.12H2O 71.64g 加双蒸水至1000mL	NaH2PO4 24.0g 或NaH2PO4.H2O 27.6g 或NaH2PO4.2H2O 31.21g 加双蒸水至1000mL

按下表比例混合A、B液后，配成0.2mol/L的母液，其中pH7.0为常用配方

在缓冲液中加入葡萄糖，蔗糖或氯化钠等均能改变渗透压。

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标签：包埋剂组织过程

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