宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，近年来其发病趋于年轻化，主要是由高危型人乳头状瘤病毒持续感染所致。宫颈癌的发生发展从量变到质变，从渐变到突变的过程较为缓慢，一般从宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）发展为浸润癌需要10～15年[1-3]。这是一个可以干预和阻断的时期[4]，为早期发现、早期诊断、早期治疗CIN 及宫颈癌提供了绝佳时机。随着宫颈癌筛查技术的发展，宫颈癌的发病率和死亡率明显下降。为寻求最佳的筛查方法，2014年本院在采用液基薄层细胞学检查（thin-prep cytology test，TCT）的基础上，引进了武汉呵尔医疗科技发展有限公司研发的SPICM-DNA型全自动DNA定量分析系统。本研究于2019年1—6月对参与宫颈癌筛查的13 078例女性进行了宫颈细胞DNA定量分析，其中符合组织活检标准者
共747例，均在阴道镜下行多点活检，现将结果报道如下。
１ 资料与方法
1.1 研究对象 选择2019年1—6月在本院进行宫颈癌筛查的13 078例女性，年龄25～65岁，平均（41.53.5）岁。纳入标准：①在本院接受宫颈癌筛查，知情并同意参与本研究；②既往无子宫全切术、宫颈锥切术；③7d内未使用抗生素；④有性生活史；
⑤24h内未发生性行为。排除标准：①存在宫颈癌病变；②具有宫颈治疗史；③合并其他肿瘤；④妊娠期女性；⑤72h内进行阴道清洗或使用阴道内药物；
⑥在月经期内者。
1.2 方法
1.2.1 标本采集及处理 标本采集前3d不做阴道冲洗和阴道治疗。窥阴器暴露宫颈后，用特制的宫颈
宫颈细胞DNA定量分析用于筛查宫颈病变的临床价值田澄，王志强，金玉兰*（首都医科大学附属北京妇产医院病理科，北京 100006）
摘 要：目的 探讨宫颈细胞DNA定量分析技术在宫颈病变筛查中的临床价值，寻求有效的意义不明的非典型鳞状上皮细胞（atypical squamous cell of undetermined signification，ASC-US）分流方法。方法 对2019年1—6月于首都医科大学附属北京妇产医院参与筛查的13 078例女性进行液基薄层细胞学检查（thin-prep cytology test，TCT）和细胞DNA定量分析，计算两种方法的阳性检出率及病理诊断宫颈上皮内瘤变（cervical intraepith小学生劳动教育
elial neoplasia，CIN）Ⅱ级以上病变的敏感性和特异性，对TCT诊断为ASC-US及以上的病例结合细胞DNA定量分析结果进行选择性活检。结果 TCT阳性检出率为14.60%，DNA定量分析阳性检出率为15.30%。TCT和DNA定量分表示天气的谚语
析诊断CINⅡ级以上病变的敏感度分别为92.20%、93.50%，特异度分别为77.30%、64.60%。TCT 检查为ASC-US且DNA定量分析为阳性的84例患者活检发现21例CINⅠ级，11例CINⅡ级。结论 TCT结合DNA定量分析技术可提高宫颈癌和癌前病变的筛查阳性率，降低漏诊率。ASC-US伴有DNA倍体异常者，检出CIN的风险增高。
关键词：宫颈细胞DNA定量分析；液基薄层细胞学检查；常规细胞学；宫颈病变；宫颈癌
中图分类号：Ｒ７３７．３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８－１０７０（２０２１）０３－０２８１－０４
doi:10.3969/j.issn.1008-1070.2021.03.014
Clinical significance of DNA quantitative analysis technology of cervical cells in cervical lesion screening
Tian Cheng, Wang Zhiqiang, Jin Yulan*(Department of Pathology, Beijing Obstetrics and Gynecology Hospital, Capital Medical University, Beijing 100006, China)
*Corresponding author
Abstract: Objective To explore the clinical value of DNA quantitative analysis technology of cervical cells in cervical lesion screening and ek an effective ASC-US triage method. Method Liquid-bad cytology and DNA quantitative analysis of cells were performed on 13 078 women participated in the screening, and the positive detection rate of both methods and the nsitivity and specificity of pathological diagnosis of lesions above CINⅡlevel were calculated. ASC-US with conventional cytolo
gical diagnosis combined with quantitative cellular DNA analysis was performed lective biopsies. Result The positive rate of conventional cytology was 14.60%, and the positive rate of DNA quantitative analysis was 15.30%. Combined TCT with DNA quantitative analysis, the nsitivity of lesions above CINⅡwas 92.20% and 93.50%, and the lesion specificity of above CINⅡwas 77.30% and 64.60%, respectively. Combining ASC-US with DNA quantitative analysis, we found 21 cas CINⅠand 11 cas CINⅡin 84 cas biopsies. Conclusion Combined TCT with DNA quantitative analysis technology could improve the positive rate of screening for cervical cancer and precancerous lesions and reduce the rate of misd diagnosis. And the detection risk of CIN lesions was incread in ASC-US with DNA ploidy abnormalities. Keywords: DNA quantitative analysis of cervical cells; Thin-prep cytology test; Conventional cytology; Cervical lesions; Cervical cancer
*通信作者
刷从宫颈外口插入宫颈管内，毛刷均匀分布在宫颈上稍加用力，顺时针或逆时针旋转5～6圈后取出，将刷头放入装有固定液的标本收集管内，拧紧管盖后轻轻摇晃3～5次并室温保存。细胞实验室收到标本后进行制片和染色，每例制成两张薄层细胞片，一张进行巴氏染色做常规细胞学诊断，另外一张进行Feulgen染色做细胞DNA定量分析。
1.2.2 宫颈细胞DNA定量分析系统 采用武汉呵尔医疗科技发展有限公司研发的SPICM-DNA型全自动DNA定量分析系统及其所提供的试剂盒，通过全自动扫描系统，将玻片全部细胞扫描至计算机当中，进行细胞DNA定量分析。
1.2.3 TCT 沉降式液基薄层细胞学制片进行巴氏染色，结果由有细胞学诊断资质的病理医师负责判读。
1.3 诊断标准
1.3.1 TCT诊断 采用2014年TBS（The Bethesda System）报告分级系统进行诊断，结果包括：正常或良性；非典型鳞状上皮细胞，不除外高度鳞状上皮内病变（atypical squamous cells-cannot exclude HSIL，ASC-H）；意义不明的非典型鳞状上皮细胞（atypical squamous cell of undetermined signification，ASC-US）；低度鳞状上皮内病变（low-grade squamous intraepithelial lesion，LSIL）；高度鳞状上皮内病变（high-grade squamous intraepithelial lesion，HSIL）；鳞状细胞癌（squamous cell carcinoma，SCC）。将结果≥ASC-US定义为阳性。
1.3.2 细胞DNA定量分析 Feulgen染色片用SPICM-DNA型全自动DNA定量分析系统进行扫描处理，该系统结果判定方法为未见DNA倍体异常的细胞，DNA指数＜
2.5的细胞为阴性；可见DNA倍体异常细胞，DNA指数≥2.5的细胞为阳性。凡是有DNA指数≥2.5细胞的玻片，必须经技术员在显微镜下逐一核实后方可报告，以免误诊。
1.3.3 活检标准及病理诊断 SPICM-DNA型全自动DNA定量分析系统软件提供的建议活检标准：①DNA指数≥
2.5的阳性细胞数量≤2个且TCT 诊断结果为ASC-US及以上；②TCT诊断结果为LSIL及以上级别；③DNA指数≥2.5的阳性细胞数量≥3个。凡符合以上标准的病例均在阴道镜下进行多点（4点以上）活检，组织病理诊断报告分为正常、CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级、癌。单纯出现ASC-US的病例，3～6个月复查，以病理诊断为金标准。
２ 结果
2.1 TCT和DNA定量分析筛查结果 参与宫颈癌普查的13 078例女性中，TCT诊断阴性者11 163例，TCT诊断阳性者1915例（14.60%），其中ASC-US 841例（6.43%），ASC-H 74例（0.56%），LSIL 845例（6.46%），HSIL 137例（1.04%），SCC 18例（0.13%）；细胞DNA定量分析诊断阴性者11 076例，细胞DNA定量分析诊断阳性者2002例（15.30%），其中DNA指数≥2.5的阳性细胞数量≤2个的患者1485例，DNA指数≥2.5的阳性细胞数量≥3个的患者517例。
2.2 TCT和DNA定量分析结果与病理诊断结果比较 符合本研究组织活检标准的患者共有747例，均在阴道镜下行多点活检，组织病理学检查诊断为正常宫颈组织430例（57.6%）、CINⅠ级99例（1
3.2%）、CINⅡ级118例（15.7%）、CINⅢ级75例（10%）、宫颈癌25例（3.3%）；747例患者的宫颈DNA定量分析阳性率为52.3%（391/747），TCT检查为ASC-US且DNA定量分析为阳性的84例患者活检发现21例CINⅠ级，11例CINⅡ级。TCT和DNA定量分析两种方法对CINⅡ级以上病变的检出率分别为29.10%、27.30%，诊断敏感度分别为92.20%、93.50%，特异度分别为77.30%、6
4.60%，见表1、表2。
表1 TCT和DNA定量分析结果与病理诊断结果的比较
宫颈活检组织病理诊断例数
TCT检查DNA定量分析
正常ASC-US ASC-H LSIL HSIL癌阴性阳性宫颈炎4303902551000325105 CINⅠ级9919211937301782 CINⅡ级1181411273828012106 CINⅢ级7530174510273宫颈癌250000718025合计7474265768898918356391
３ 讨论
3.1 DNA定量分析用于宫颈癌筛查的优势 SPICM-DNA全自动DNA定量分析系统是在液基薄层制片的基础上进行Feulgen染色，通过全自动扫描系统将玻片全部细胞图像扫描至计算机当中，之后进行细胞DNA定量分析，测定细胞DNA倍体是否异常。因在细胞恶变过程中DNA含量的改变要早于形态学改变，故该方法更能较早地诊断癌前病变。本研究中TBS阳性检出率为1
4.60%，DNA定量分析阳性检出率为1
5.3%，TCT检查为ASC-US且DNA定量分析为阳性的84例患者活检发现21例CINⅠ级，11例CINⅡ级。因此宫颈细胞中一旦出现非整倍体细胞伴ASC-US要引起重视，以免漏诊。DNA定量分析用于宫颈细胞检查在国内外均有报道[5]。细胞学诊断为ASC-H、LSIL、HSIL和病理诊断为CINⅡ级及以上的患者，宫颈细胞多有DNA非整倍体突变。本研究结果与这些报道一致，提示DNA定量分析较常规细胞学方法在宫颈癌的早期诊断方面更具优势，可弥补细胞学诊断中病理医师人工阅片、视觉疲劳及技术有限的缺陷，减少误诊、漏诊[5]，尤其适合在缺乏病理医师的基层医院大力推广。
3.2 DNA定量分析用于ASC-US分流诊断的可行性分析 ASC-US在TBS报告中最为常见，特点是检查结果重复性差，既可以是良性病变，也可以是不同级别的CIN，甚至是早期浸润癌[6]，但宫颈癌及其癌前病变检出率极低，病变转归差异显著，临床上较难选择处理方法。细胞学随访会导致部分病例丢失，也可能出现假阴性诊断，而无选择地进行阴道镜下活检会给临床带来较繁重的工作压力，因此，
探索一项区分活检和随访的合理指标是临床亟待解决的问题[7-9]。国内既往研究显示通过细胞DNA定量分析可以合理选择活检病例[8, 10-11]。本研究对ASC-US患者结合DNA定量分析进行有选择的活检，结果显示ASC-US伴DNA倍体异常者，检出CIN病变的风险增高，与既往报道一致[12-14]。全自动DNA倍体定量分析是一种定量的自动化检测方法，自动化的全视野扫描可以很大程度缓解人工阅片的压力，量化的DNA指数参数还可尽量避免筛查过程中人为因素的影响，能够客观、精确地测定细胞核DNA倍体，能够在宫颈细胞出现形态改变前筛查出有恶变趋势的病变样本[15]。人工阅片诊断的主观性较强，配合DNA定量分析可进一步提升诊断的准确性，减少大量炎性反应性改变导致的假阳性病例。
综上所述，DNA定量分析具有敏感度高和重复性好的优点，是宫颈癌早期筛查的首选，可用于大规模宫颈癌的筛查。如果将宫颈细胞DNA倍体定量检测联合TCT 检查进行筛查，小学教研工作计划
可明显降低宫颈癌及癌前病变的漏诊率，还可用于ASC-US的分流诊断，避免过多的阴道镜活检。参考文献：
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NA倍体分析技
表2 TCT和DNA定量分析的敏感度与特异度
检查方法
宫颈活检组织病理诊断
CINⅡ级以上检出率（%）敏感度（%）特异度（%）阴性（例）阳性（例）合计（例）
TCT检查29.1092.2077.30阴性40917426
阳性120201321
合计529218747
DNA定量分析27.3093.5064.60阴性34214356
阳性187204391
合计529218747
注：活检结果以CINⅡ级及以上判定为阳性，TCT检查以ASC-US及以上判定为阳性；敏感度=真阳性例数/阳性例数100%；特异度=真阴性例数/阴性例数100%。
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（收稿日期：2020-10-14；修回日期：2020-12-31）
（本文编辑：杨倩）
结肠癌组织中5-甲基胞嘧啶表达与患者临床病理特征的相关性研究
闫新欣1，张明智2*，隋海娟3（1. 航天中心医院老年医学一科，北京 100049；2. 锦州医科大学附属第三医院，辽宁锦州 121000；3. 锦州医科大学，辽宁锦州 121001）
摘 随笔散文
要：目的 探讨结肠癌组织中5-甲基胞嘧啶（5-methylcytosine，5-mC）表达与患者临床病理特征的相关性。方法 采用结肠癌组织芯片（HColA160Su02），包含2006年1月至2010年12月确诊的93例结肠癌患者的手术标本，进行免疫组化检测，根据5-mC表达强度分为高表达组46例和低表达组47例。采用二元logistic回归法分析5-mC表达与患者临床病理特征的相关性。结果 与5-mC低表达组比较，高表达组存活率更高，无进展生存期更长（P＜0.05）。二元logistic回归分析显示，结肠癌组织中5-mC的表达与患者术后存活状态及无进展生存期有关（P＜0.05）。结论 结肠癌组织中5-mC的表达与术后存活情况以及无进展生存期有关，可能成为判断结肠癌患者预后的新型标志物。
关键词：5-甲基胞嘧啶；结肠癌；无进展生存期；微卫星不稳定
中图分类号：Ｒ４４６．８ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８－１０７０（２０２１）０３－０２８４－０４
doi:10.3969/j.issn.1008-1070.2021.03.015
Study on the correlation between 5-methylcytosine and the clinicopathologic characteristics of postoperative patients of colon cancer
Yan Xinxin1, Zhang Mingzhi2*, Sui Haijuan3(1.Department of Geriatric, Aerospace Central Hospital,
Beijing 100049, China; 2. The Third Affiliated Hospital of Jinzhou University, Liaoning Jinzhou 121000, China; 3.Jinzhou Medical University, Liaoning Jinzhou 121001, China)
*Corresponding author
Abstra服务器系统
ct: Objective To investigate the correlation between 5-methylcytosine(5-mC)and the clinicopathologic characteristics of postoperative patients of colon cancer. Method The histological and clinicopathological data of 93 patients with sporadic colon cancer were collected, and the 5-mC expression was determined qualitatively by immunohistochemistry. They were divided into high expression group(46 cas)and low expression group(47 cas). Logistic regression was ud to analyze the correlation between 5-mC and clinic pathological characteristics. Result The number of survival cas in the group with high expression of 5-mC was more than that in the group with low expression, and the progression-free survival period was longer(P＜0.05).The survival status and progression-free survival period had an independent correlation with the expression of 5-mC(P＜0.05). Conclusion The expression of 5-mC in colon cancer is related to survival and progression-free survival. Patients with high expression of 5-mC have longer survival and lower mortality, which may be a new marker for the prognosis of colon cancer patients.
Keywords: 5-大血小板比率
Methylcytosine; Colon cancer; Progression-free survival; Microsatellite instability
结肠癌是消化道最常见的恶性肿瘤之一[1]，早期通常无明显的临床症状，增加了早期诊断的难度[2]，10%～15%的结肠癌在诊断时已发生脑转移[3]。目前，结肠癌已成为世界第三大肿瘤死亡原因[4]。随着精准医疗技术的发展，结肠癌的诊治取得了明显进步[5]，但晚期结肠癌的5年生存率仍偏低[6]。肿瘤的发生是由癌基因表达和抑癌基因失活导致的，DNA 甲基化参与了该调控过程。表观遗传学参与了结肠癌的发生发展[7]。最典型的表观遗传修饰是DNA甲基化，由S-腺苷蛋氨酸通过DNMTs从CG二核苷酸的胞嘧啶碱基的5个位置上获得，形成5-甲基胞嘧啶（5-methylcytosine，5-mC）[8]。5-mC的特点是
*通信作者
