细胞传代、换液、给药和种板

细胞传代

[实验器材] 0.25%胰酶、胎牛血清、F-12培养基、PBS、培养瓶、5ml白枪头、15ml、50ml离心管

[实验步骤]

1、 取出细胞，显微镜下观察细胞形态和密度，确定细胞生长状况，是否需要传代或换液；

2、 将培养基、PBS、胰酶培养基等元旦画画图片 预热及超净台消毒结束后，将试剂及细胞等喷酒精后移入超净台，将废

液缸喷足酒精移入超净台，取酒精棉放入超净台；

3、 点燃酒精灯，将瓶口拧松，过火消毒；

4、 在确定细胞生长状况良好公元前356年 且没有污染的情况下，

5、 用适量PBS清洗细胞表面，并弃去PBS；

6、 加入适量胰酶消化细胞，此时可将细胞置于37C细胞培养箱内消化；待消化完全后，用胰酶2倍体积

的完全培养基中止消化，将细胞移入离心管1000rpm，5min离心；

7、 弃上清，加适量完全培养基吹打混匀细胞(沿壁轻轻吹打24次左右)，按合适比例进行细胞传代，在盖上

标记好鹅雏 细胞名称、代初一英语作文范文15篇 数及传代日期并放入孵箱；

8、 收拾物品张学良几个老婆 ，整理实验台，做试验记录，打开超净台和细胞间紫外，30min后关闭

细胞的换液

[实验器材]培养基、胎牛血清、50ml离心管、5ml白枪头、PBS(白枪头、离心管提前高压)

[实验步骤]

1、将培养基、PBS、离心管放入超净工作台，紫外灯照射30min。将胎牛血清从-20℃放入37℃水浴锅内，

完全溶解后拿出。

2、用50ml离心管配置适当浓度酵母粉的作用 的血清培养基。

3、将细胞拿出，吸去培养基，用3mlPBS洗2次，各瓶加入4ml血清培养基。

4、整理洁净台！

细胞的给药

[实验器材]培养基、胎牛血清、50ml离心管、5ml白枪头、PBS(白枪头、离心关于微笑的名言 管提前高压)、皮质酮、咖啡因

[实验步骤]

1. 将培养基、PBS、离心管放入超净工作台，紫外灯照射30min。将胎牛血清从-20℃放入37℃水浴锅内，

完全溶解后拿出。

2. 用50ml离心管配置适当浓度的血清培养基。

3. 在15ml离心管中配置皮质酮及咖啡因浓度梯度。

4. 按2ml/孔加入6孔板中，做好标记。

5.

收拾物品，整理工作台。

细胞种板

[实验器材]

试剂：PBS、培养基、胎牛血清、双抗、胰酶(含EDTA)、75%酒精

仪器：无菌枪头（蓝、白、黄）、移液枪（1000ul、5000ul、100ul、50ul）、15ml离心管1个、1.5ml离心

管、封口膜、六孔板2个（一瓶一般种两板）、细胞计数板、手套、口罩、帽子。

仪器处理：1.操作器械及试管枪头高压灭菌（123度、30min）

2.无王者英语 菌操作台紫外灭菌30min

[实验步骤]

1. （倒液）倒去培养基，并用5mlPBS洗涤两遍；

2. （消化）加入1ml胰酶溶液（培养皿2ml），用力晃动培养瓶30s左右，并放入培养箱中3min左右，镜

下观察消化情况，达到80%以上即可；

3. （终止）加入2ml（比胰酶多1ml）带血清培养基终止消化；

4. （吹打）枪头调至1ml吸取细胞液吹打，促使细胞脱落；

5. （离心）将已消化的细胞液吸至15ml离心管中，离心（1000r/min）8min后，倒去上清；

6. （混匀）离心管中加入4ml（2-5ml）培养基，充分凉拌虫草花的做法 混匀；

7. （计数）吸取10ul细胞液+90ul细胞染液至1.5ml离心管中，充分混匀后吸取10ul至细胞计数板上，镜

下进行计数；细胞数/ml=（四个角的细胞总数）100小格内酵母细胞个数/10040010^4稀释倍数(10)

细胞总数=（四个角细胞总数）/410^5(第6步加入培养基量ml)

8. （种板）根据细胞数量加入适量培养基进行稀释，要求每孔加入细胞液2ml，细胞数目30万/孔(6孔板)，

96孔板为1万/孔。