大鼠肝脏组织总RNA提取

大鼠肝脏组织总RNA提取

实验前准备:

1. 试剂

RNAprep pure Tissue Kit (TIANGEN)， 无水乙醇，巯基乙醇，DEPC

2．试验用具的处理

去RNa处理：

1〉 配制0.1% DEPC 水（1000ml 水加1哪个护肤品好用 ml DEPC， 用转子于通风橱内搅拌至完全溶解）。

2〉 将需要用的枪头，枪头盒和EP管等浸泡入DEPC水中，过夜。将wifi二维码在哪里找出来 枪头装入枪头盒中，

120C灭菌30min。60C烘干过夜。

3〉 DEPC水于120C灭菌30min。

配制DNa I 工作液：

取9ul DNa I 存储液放入新的RNa-Free的离心管中，加入71ul RDD溶液，轻柔

混匀。

试验步骤

1. 准备碎冰以及液氮，将肝脏组织从-80C转移到液氮中。

2. 称取10-20不仅而且英文 mg肝脏组织（注意称取组织的部位尽量相同、不含其它结缔组织成分）

与RNa-Free的2ml EP管中。

3. 加入300ul 裂解液，匀浆器匀又什么又什么组词 浆（中号探头，最高速度），其间间歇性地将EP管

置于冰上以防止组织裂解液过热。

4. 匀浆后，将探头插入水中洗涤30s（开动状态下），转移到新的水中再次洗涤30s，

然后与DEPC水中洗涤30s。进行下一个样品的匀浆。

5. 加入590ul RNa-Free ddH2O和10ul 蛋白酶K，混匀后56C处理15min。

6. 13000rpm 离心3min，取800ul上清加入400ul无水乙醇（0.5倍体积），混匀。将

混匀液转入吸附柱中（吸附柱放在收集管中），13000rpm 离心30s，弃废液，将

吸附柱放回收集管中。

7. 向吸附柱中央加入350ul去蛋白液，13000rpm 离心30s，弃废液，将吸附柱放回

收集管中。

8. 向吸附柱中央加入80ul的DNa I泰国传奇 工作液，室温放置15min。

9. 向吸附柱中央加入350ul去蛋白液，13000rpm 离心30s，弃废液，将吸附柱放回

收集管中。

10. 向吸附柱中央加入500ul漂洗液，室温放置2min。13000rpm 离心30s，弃废液，

将吸附柱放回收集管中。

11. 向吸附柱中央加入500ul漂洗液，室温放置2min。13000rpm 离心30s，弃废液，

将吸附柱放回收集管中。

12. 13000rpm 离心2min，倒掉废液。将吸附柱置于室温放置数分钟，以彻底凉干吸

附材料中残余的漂洗液。

13. 将吸附柱转入一个新的RNa-Free的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加

70ulRNa-Free ddH2O，室温放置2mi科举博物馆 n，13000rpm 离心2min，得到RNA溶液。

浓度：终浓度（ng/ul）=（OD260）X （稀释倍数n）X 40