薄层色谱法

薄层色谱法

薄层板薄层色谱法（TLC），系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一

均匀薄层。待点样、展开后，根据比移值（Rf）与适宜的对照物按同法所得的色谱图的比移

值（Rf）作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。薄层色谱法是快速分

离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，也用于跟踪反应进程。

基本简介

薄层色谱法（英语：Thin layer chromatography，简称TLC，又称为薄层层析）是一种

用于楼盘广告语 分离混合物的色谱技术。在分析化学特别是针对有机化合物的分析中，薄层色谱是极为

重要的分离方法。

基本原理

薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使

在移动相（溶剂韩式刘海 ）流过固定相（吸附剂）的过程中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再

解吸附，从而达到各成分的互相分离的目的。

薄层层析可根据作为固定相的支持物不同，分为薄层吸附层析(吸附剂）、薄层分配层析

（纤维素）、薄层离子交换层析（离子交换剂）、薄层凝胶层析（分子筛凝胶）等。一般实验

中应用较多的是以吸附剂为固定相的薄层吸附层析。

吸附是表面的一个重要性质。任何两个相都可以形成表面，吸附就是其中一个相的物质

或溶解于其中的溶质在此表面上的密集现象。在固体与气体之间、固体与液体之间、吸附液

体与气体之间的表面上，都可能发生吸附现象。

相关材料

用以涂布薄层用的载板有玻璃板、铝箔及塑料板，对薄层板的要求是：需要有一定的机

械强度及化学惰性，且厚度均匀、表面平整，因此玻璃板是最常用的。载板可以有不同规格，

但最大不得超过2020，玻璃板在使用前必须洗净、干燥备用。玻板除另有规定外，用

5cm20cm，10cm20cm或20cm20cm的规格，要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。

固定相（吸附剂）或载体

薄层层析硅胶薄层层析硅胶最常用的有硅胶G、硅胶GF〈[254]〉、硅胶H、硅胶HF〈[254]〉，

其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F〈[254]〉等。其

颗粒大小，一般要求直径为10～40m。薄层涂布，一般可分无粘合剂和含粘合剂两种；前

者系将固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用10～

15%煅石膏（CaSO4.2H2O在140℃烘4小时），混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠

水溶液（0.5～0.7%）适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。也有含一定固定相或缓冲液的

薄层。

涂布器

应能使固定相或载体在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。

点样器

定性：内径为0.5mm管口平整的普通毛细管。

定量：微量注射剂。

点样直径不超过5mm，点样距离一般为1~1.5cm即可。

展开室

应使用适合载板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密的盖子，除另有规定外，底部

应平整光滑，应便于观察。

操作方法

薄层板制备

除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，

倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2～0.3mm），取下涂好薄层

的玻板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。

使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。

手工制板一般分不含粘合剂的软板和含粘合剂的硬板俩种。

常用吸附剂的基本情况：颗粒的大小，太大洗脱剂流速快分离效果不好，太细溶液流速

太慢。一般说来吸附性强的颗粒稍大，吸附性弱的颗粒稍小。氧化铝一般在100-150目。氧

化铝分为碱性氧化铝，适用于碳氢化合物、生物碱及碱性化合物的分离，一般适用于PH为

9-10的环境。中性氧化铝适用于醛、酮、醌、酯等PH约为7.5的中性物质的分离。酸性氧

化铝适用于PH4~4.5的酸性有机酸类的分离。氧化铝、硅胶根据活性分为五个级，一级活

性最高，五级最低。

黏合剂及添加剂：为了使固定相（吸附剂）牢固地附着在载板上以增加薄层的机械强度，

有利于操作，需要时在吸附剂中加入合适的黏合剂：有时为了特殊的分离或检出需要，要在

固定相中加入某些添加剂。

薄层板的活化：硅胶板于105-11℃烘30分钟，氧化铝板于150-160℃烘4小时，可得西芹炒腰果

活性的薄层板。

点样

除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，

样点直径及点间距离同纸色谱法，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必

须注意勿损伤薄层表面。

点样直径不超过5mm，点样距离一般为1~证明信格式 1.5cm即可。

样品在溶剂中的溶解度很大，原点将呈空心环——环形色谱效应。因此配制样品溶液时

应选择对组分溶解度相对较小的溶剂。

点样方式有点状点样和带状点样。

展开

展开剂也称溶剂系统，流动性或洗脱剂，是在平面色谱中用作流动相的液体。展开剂的

主要任务是溶解被分离的物质，在吸附剂薄层上转移被分离物质，使个组分的Rf值在0.2~0.8

之间并对被分离物质要有适当的选择性。作为展开剂的溶剂应满足以下要求：适当的纯度、

适当的稳定性、低黏度 、线性分配等温线、很低或很高的蒸气压一级尽可能低的毒性。

展开方式总新疆的歌 的来讲平面色谱的展开有线性、环形及向心3种几何形式。

A 单次展开 用同一种展开剂一个方向展开一次，这种方式在平面色谱中应用最为广泛。

（垂直上行展开，垂直下行展开，一向水平展开，对向水平展开）

B 多次展开 单向对此展开，用相同的展开剂沿同一方向进行相同距离的重复展开，直

至分离满意，广泛应用于薄层色谱法

C 双向展开 用于成分较多、性质比较接近的难分离组分的分离。

薄层展开展开室如需预先用展开剂饱和，可在室中加入足够量的展开剂，并在壁上贴二

条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖，使系统平衡或按正文规定

操作。将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5～

1.0cm（切勿将样点浸入展开剂中），密封室盖，待展开至规定距离（一般为10～15cm），取

出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测。

显色

A 光学检出法

a 自然光（400~800nm）

b 紫外光（254nm或365nm）

c 荧光 一些化合物吸收了较短波长的光，在瞬间发射出比照射光波长更长的光，而在

纸或薄层上显出不同颜色的荧光斑点（灵敏度高、专属性高）

B 蒸汽显色法

多数有机化合物吸附碘蒸气后显示不同程度的黄褐色斑点，这种反应有可逆及不可逆两

种情况，前者在离开碘蒸气后，黄褐色斑点逐渐消退，并且不会改变化合物的性质，且灵敏

度也很高，故是定位时常用的方法；后者是由于化合物被碘蒸气氧化、脱氢增强了共轭体系，

因此在紫外光下可以发出强烈而稳定的荧光，对定性及定量都非常有利，但是制备薄层时要

注意被分离的化合物是否改变了原来的性质。

C 物理显色法

用紫外照射分离后的纸或薄层后，使化合物产生光加成，光分解、光氧化还原及光异构

等光化学反应，导致物质结构发生某些变化，如形成荧光发射功能团。发生荧光增强或淬灭

及荧光物质的激发或发射波长发生移动等现象，从而提高了分析的灵敏度和选择性。

D 试剂显色法

广泛应用的定位方法。用于纸色谱的显色剂一般都适用于薄层色谱，还有防腐剂的显色

剂不适合用于纸色谱及含有有机黏合剂薄层的显色，又时喷显色剂后续加热，这也不是用于

纸色谱。

显色方法a喷雾显色：显色剂溶液以气溶胶的形式均匀的喷洒在纸和薄层。b 浸渍显色：

挥去展开剂的薄层板，垂直的插入盛有展开剂的浸渍槽中，设定浸板及抽出速度和规定在显

色剂中浸渍的时间。

显色试剂

a 通用显色剂 硫酸溶液（硫酸：水 1：1，硫酸：乙醇1：1）、0.5%碘的氯仿溶液、中

性0.05%高锰酸钾溶液、碱性高锰酸钾溶南瓜牛肉 液（还原性化合物在淡红色背景上显黄色斑点）

b 专属显色剂

⑸测定比移值

在一定的色谱条件下，特定化合物的Rf值是一个常数，因此有可能根据化合物的Rf

值鉴定化合物。

⑹ 薄层扫描

薄层扫描法指用一定波长的光照射在经薄层层析后的层析板上，对具有吸收或能产生荧

光的层析斑点进行扫描，用反射法或透射法测定吸收的强度，以检测层析谱。对于中成药复

方制剂，亦可用相应的原药材按需要组合作阴、阳对照，然后比较其薄层扫描图谱加以鉴别。

使用仪器为薄层扫描仪。

如需用薄层扫描仪对色谱斑点作扫描检出，或直接在薄层上对色谱斑点作扫描定量，则

可用薄层扫描法。薄层扫描的方法，除另有规定外，可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使

用说明，结合具体情况，选择吸收法或荧光法，用双波长或单波长扫描。由于影响薄层扫描

结果的因素很多，故应在保证供试品的斑点在一定浓度范围内呈线性的情况下，将供试品与

对照品在同一块薄层上展开后扫描，进行比较并计算定量，以减少误差。各种供试品，只有

得到分离度和重现性好的薄层色谱，才能获得满意的结果。

应用范畴

食品和营养

食品中的营养成分是蛋白质、氨基酸、糖类、油和脂肪、维生素、食用色素等。与食品

和营养有害的物质则有残留农药、致癌的曲黄霉素等。这些成分都可用薄层色谱法定性和定

量。蛋白质和多肽水解为氨基酸，对不同来源的动物性和植物性蛋白水解后产生不同的氨基

酸进行定性和定量，有助于解决蛋白质的结构和食品营养问题。二十多种氨基酸用硅胶G

薄层板双向展开，一次即能分开，然后定性和定量，方法快速而简便。多糖和寡糖可水解为

单糖，可用薄层色谱法进行单糖和双糖的定性和定量。文献上有每一个糖的Rf值和相应的

展开剂。油和脂肪解为脂肪酸，脂肪酸的种类和结构中的不饱和键数，与营养和卫生有关，

关于油和脂肪的薄层（硅胶、硅藻土、纤维素）分析，文献和综述很多。脂溶性和水溶性维

生素在薄层上可方便地定性和定量，例如脂溶性维生素A，D，E，K及B2，B6，B12，酶

酸，泛酸，叶酸，C，促生素在硅胶G薄层上可用苯：甲醇：丙酮：冰醋酸（7:2:0.5:0.5）

分开。用硅胶G薄层和丙酮：氯仿曲尼司特 （1:1）以及激发波长365nm和波长450nm，可用荧光法

测定ng量的曲黄素B1,B2,G1,G2，法灵敏快速。

药物和药物代谢

薄层色谱法在合成药物和天然药物中的应用很广。有些文献和内容偏重于合成药物、化

合物及其代谢产物，有文献为在中草药分析中的应用。每一类药物，例如磺胺、巴比妥、苯

骈噻嗪、甾体激素、抗菌素、生物碱、强心甙、黄酮、挥发油和萜等，都包括几种或十几种

化学结构和性质非常相似的化合物，可以在上述文献中找出一、二种全盘的展开剂，一次即

能把每一类的多种化合物很好地分开。药物代谢产物的样品一般先经预处理后用薄层分析，

应用也很广，但有时因含量甚微，不用采用气相和高效液相色谱法灵敏。

化学和化工

化工和化学方面的有机原料和产品都可用薄层色谱法分析。例如含各种功能基的有机物，

石油产品，塑料单体，橡胶裂解产物，油漆原料，合成洗涤剂等，内容非常广泛。

医学和临床

薄层色谱法的应用还渗透到医学和临床中去，例如它是一种快速的诊断方法可用于妊娠

的早期诊断。方法是基于在孕妇的尿中能检出比未媳妇妇女的尿中含更多的孕二醇，把两者

的尿提取后点在薄层上比较，即可作出判断。这一方法可不用动物而在2~3小时内化验出结

果。

毒物分析和法医化学

如前所述，经典的毒物分析有许多缺点，目前毒物分析和法医化学采用薄层色谱法等新

的手段，对麻醉药、巴比妥、印度大麻、鸦片生物碱等均可分析。

农药

十多种有机磷农药和六种有机氯农药都可在硅胶G薄层上分开并测定含量，可用于农

药分析及其残留量分析。

优点

薄层层析有许多优点：它保持了操作方便、设备简单、显色容易等特点，同时展开速率

快，一般仅需15～20分钟；混合物易分离，分辨力一般比以往的纸层析高10～100倍，它

既适用于只有0．01g的样品分离，又能分离大于500mg的样品作制备用，而且还可以使

用如浓硫酸、浓盐酸之类的腐蚀性显色剂。薄层层析的缺点是对生物高分子的分离效果不甚

理想。