蛋白表达不同检测方式的比较和分析

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蛋白表达不同检测方式的比较和分析

免疫组化法(immunohistochemistry)

原理：免疫组化，是应用免阅读感悟100字 疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合

的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定

组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技

术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。

特点：是融合了免疫学原理（抗原抗体特异性什么是打飞机 结合）和组织学技术（组织的取材、固定、

包埋、切片、脱蜡、水化等），通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、

同位素)显色，来对组织（细胞）内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。样本是

细胞或组织，要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。

蛋白免疫印迹( Western Blot)

原理：蛋白质印迹法是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固达到英文 相支持物NC

膜或PVDF膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术。

特点：先要进行SDS-PAGE，然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上，

而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品，可以用于定性和半定量。

ELISA检测

原理：酶联免疫吸附剂测定法，简称酶联免疫法，或者ELISA法，它的中心就是让抗体

与酶复合物结合，然后通过显色来检测。

特点：用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或

组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别，操作

上 独占鳌头 开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物

粘附在载体上，这就是“吸附”的含义。

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精品文档 的和地的区别

免疫组化和elisa所用到的原理 大致相同，只是因为所检测的样品不同，从而在操作方法

上有所不同。Elisa多用于定量分析，其灵敏度非常高。

3种蛋白检测水平的比较

蛋白检测方式 免疫组化法 Western blot法 ELISA试剂盒法

相同点 原理：抗体-抗原结合反应

样品类组织或细胞 组织或细胞 血清、血浆、尿液、

型 细胞或组织培养上

清液

分析方定位、定性及定量的研究可以用于定性和半定多用于定量分析，其

式 (主要是定位，定位敏感性量，定量较免疫组化灵敏度非常高

不同

点

观察结免疫组化图（膜阳性、质电泳图（着色的位置蛋白浓度

果 阳性和核阳性） 和着色深度）

优点 特异性强、敏感性高、定分析容量大、敏感度灵敏、特异、简单、

远远高于Western blot法) 法准确

位准确、形态与功能相结高、特异性强 快速、稳定、易于自

合 动化操作及节省实

验经费

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应用范⑴恶性肿瘤的诊断与鉴别是检测蛋白质特性、是分泌性蛋白检测

围 诊断；⑵确定转移性恶性表达与分布的一种最首选方法之一。

肿瘤的原发部位；⑶对某常用的方法。 ⑴免疫酶染色各种

类肿瘤进行进一步的病理⑴组织抗原的定性定细胞内成份的定位；

分型；⑷软组织肿瘤的治量检测；⑵多肽分子⑵研究抗酶抗体的

疗一般需根一月英语简写 据正确的组织的质量测定；⑶病毒合成；⑶显现微量的

学分类，因其种类多、组的抗体（或抗原）检免疫沉淀反应。⑷定

织形态相像，有时难以区测；⑷疾病早期诊断 量检测体液中抗原

分其组织来源，应用多种或抗体成份。【多种

标志进行免疫组化研究对病原微生物所引起

软组织肿瘤的诊断是不可的传染病、寄生虫病

缺少的；⑸发现微小转移及非传染病等方面

灶，有助于临床治疗方案的免疫诊断】

的确定，包括手术范围的

确定。⑹为临床提供治疗

方案的选择。

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各组检测方法之间的差别及特点：

以下是western和ELISA的区别：

1. western blotting 可以看到特异性的条带，但是定量比较烦八宝甜饭

2. ELISA可以直接读出浓度，但是如果抗体有非特异性结合，那得到的数值就不可信。

3. WB只能半定量,但是可以检测细胞膜蛋白,这点ELISA做不到

4. ELISA可用定量方法检测蛋白,也就是说可以观察不同浓度刺激物对目的蛋白的影响

5. WB所检测的一般是抗原，而ELISA抗原抗体都可以检测。

6. WB所检测的抗原可以知道其分子量的大小，或是否是多聚体、降解产物等，一句话，WB

可以确定所用抗体是与那种蛋白起作用的；而ELISA无能为力。

7. WB所适用的一抗一般是线性位点的，ELISA线性或构象型抗体都可以使用。从另一个意

义上讲，WB可以做抗体是线性位点还是构象型位点的补充判定，而ELISA不行。

8. WB一次处理量就是一块胶版，10-20个样品最多了。ELISA一块96孔板一次可以处理96

个样本，可以设置多个复孔、对照、梯度样等来提高检测的可信度。

9. WB操作常见的非特异性条带，膜本底差，显色不好等缺点在ELISA上表现得要好得多。

《HMGB1、MMP-9和CEA在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义》

中英文实例分析：

一、免疫组化（免疫组化图——阳性表达率）

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二、western blotting

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三、ELISA

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f

《Implication of Leptin美女真实图片 -Signaling Proteins and Epstein-Barr Virus in Gastric Carcinomas》

一、免疫组化（免疫组化图——阳性表达率）

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二、western blotting

effect of varying dos of tamoxifen on ovarian histopathology, rum VegF, and endothelin 1 levels in

ovarian hyperstimulation syndrome: an experimental study

三、ELISA

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