一文带你学习3种最常用的免疫组化结果分析方法

⼀⽂带你学习3种最常⽤的免疫组化结果分析⽅法

众所周知，实验并不是做出来就结束了，更重要的是我们要对结果进⾏分析统计，以得出实验的结果结论。要想获得理想的实

验结果，标准的试验操作步骤是第⼀步，合适的分析⽅法是第⼆步。

免疫组织化学（immunohistochemistry, IHC）是利⽤抗原抗体反应已显⽰某蛋⽩的抬头纹面相图解男 表达及定位的实验。这种实验的独特之处这种实验的独特之处

在于它既直观的显⽰了蛋⽩在组织及细胞或细胞亚结构的定位，⼜保留了组织样品的结构特征。IHC 已⼴泛应⽤于⽣物

医学研究及临床诊断中。

所以组织切⽚经免疫组化染⾊后，你真的知道选择什么样的⽅式分析吗？⽬前免疫组化尚⽆统⼀的标准计量⽅法，但已有⼏但已有⼏

种科研界已被认可DDMS 的 IHC 计量⽅法，下⾯我来⼀⼀详细介绍，⼩伙伴们拿起本本赶紧记录啦～计量⽅法

积分制

积分制是对切⽚以细胞染⾊强度、阳性细胞范围进⾏评分，再相乘得出最终得分的⽅式，这是最常⽤的⽅法。

标准评分为：

根据细胞染⾊强度评分为 4 级，⽆阳性着⾊（阴性）计 0 分，淡黄⾊（弱阳性）计 1 分，棕黄⾊（阳性）计 2 分，棕褐⾊

（强阳性）计 3 分；

根据阳性细胞百分⽐评为 4 级，≤25% 计 1 分，26%-50% 计 2 分，51%-75% 计 3 分，＞75% 计 4 分，将两项评分相乘得出

最终评分结果 [1-2]。

此种⽅法是最贴近临床⽅⾯的，⼩伙伴们如果想做某因⼦的临床病理特征分析，那最好采⽤这种⽅法。

参考⽂献：[1] 李明凤，⽅林娜，计翼，胡港澳通行证办理需要多久 沛然，孙林，王悦晨，孙礼洁，尹⽟。前列腺癌组织中 TEM8 与 VEGF 的表达及临

床意义 [J]. 临床与实验病理学杂志，2020,36 (10):1144-1148.

参考⽂献：[2] Guo Zheng,Zhang Xiufang,Zhu Huabin et al. TELO2 induced progression of colorectal cancer by binding with

RICTOR through mTORC2.[J] .Oncol Rep, 2020, undefined: undefined.

阳性细胞数

计数阳性细胞数适⽤于评估某物质是否在组织中存在以及数量，是对该物质数量服务不可用 ⽽不是表达强弱的判别。

如评估某细胞在该组织中的数量，可利⽤该细胞的特异性标志物做免疫染⾊。如 CD163 标记 M2 型肿瘤相关巨噬细

胞，CD34 标记⾎管小猫踩奶 内⽪细胞，CD3 标记 T 细胞等等。

对于这类免疫组化，我们直接计数我们直接计数 20 倍镜下随机 5 个视野下的阳性细胞数，再求⼀个平均数即为这张⽚⼦的阳性细胞

数。

也有计算单位⾯积下阳性细胞数的⽅法。通过统计 20 倍镜下的细胞数，在除以镜下⾯积，得出细胞密度，单位为

cells/mm2。

参考⽂献：[3] Zheng Shaoquan,Zou Yutian,Xie Xinhua et al. Development and validation of a stromal immune phenotype

classifier for predicting immune activity and prognosis in triple-negative breast 矶钓 cancer.[J] .Int J Cancer, 2020, 147: 542-553.

Image Pro Plus 软件测量平均光密度值

有时，我们想定量的分析某因⼦的⾼低表达差异，⽤半定量的积分制并不能很好的区分差异，我们可使⽤软件进⾏统计分析。

Image Pro Plus 软件的计量原理是根据⽬的蛋⽩的着⾊深浅及分布⾯积来确定⽬的蛋⽩的表达量。⼤家在⽹上搜索软件的计量原理是根据⽬的蛋⽩的着⾊深浅及分布⾯积来确定⽬的蛋⽩的表达量。

Image Pro Plus 的操作⽅法即可，简单上⼿。

百度上有篇关于 Image Pro Plus 软件分析免疫组化的超详细的⽂章，链接在此：

通过测量出每张图⽚的累积光密度值（integrated option density, IOD）值以及区域⾯积 area 值，再计算出平均光密度值

（mean density）即 mean density=IOD/area，此值反映了⽬标蛋⽩的单位⾯积浓度。最后取每个样本的 5 个随机区域 mean

density 的平均值即为此样本的值。

参考⽂献：[4] Wang Yang,Wu Caifang,Qin Yong et al. Multi-Angle Investigation of the Fractal Characteristics of Nanoscale

Pores in the Lower Cambrian Niutitang Shale and Their Implications for CH₄ Adsorption.[J] .J Nanosci Nanotechnol, 2021,

21: 156-167.

以上为 3 种免疫组织化学常⽤的计量⽅法，希望对⼤家免疫组化实验数据处理有所帮助，少⾛弯路。种免疫组织化学常⽤入党申请格式 的计量⽅法

具体选择哪种⽅法还是要根据你的研究内容和⽬的，最后祝⼤家早⽇发 SCI 呀～