2023年4月17日发(作者：催收函模板)
植物超氧阴离子自由基含量的测定
一、实验目的
了解实验原理，掌握实验技术
二、实验原理
O
超氧阴离子（）能与羟胺反应生成NO，反应式为：
-
3
O
NHOH+2+H = NO+HO+HO
+-
22222
其中NO进一步反应生成对氨基磺酸、反应后再生成-苯儿童画新年画
胺，最后生成红色的偶氮化合物。
2
-
其中，偶氮化合物在520nm到560nm下有吸收峰，本次实验在530nm下进行比色。
三、实验材料与仪器
植物材料
小麦叶片，荠菜叶片
试剂
NaNO
2
-
AR 100l；蒸馏水；对氨基酸苯磺酸；-苯酸；PBS；盐酸羟胺；对氨基苯磺酸；-苯
胺。
仪器
可见光分光光度计，型号V-1100D
四、实验方法
1. 标准曲线
1 2 3 4 5 6 7
NO标准液（50g/ml）
2
-书签制作方法
蒸馏水
对氨基酸苯磺酸
-苯酸
0 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0
2.0 1.8 1.6 1.2 0.8 0.4 0
2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
然后置于30C培养箱中保温30min显色反应测定A，以NO为横坐标，A值为纵坐
o-
5302530
标，绘制标准曲线。
O
2. 的提取
小麦叶片称取1.0g。加入少量PH7.8的PBS研磨。之后定容到5ml。10000rpm 45C离心
o
10min。之后取上清液备用。
注：空白对照直接用上清液显色测本底值NO含量。
2
-
O
3.组织中测定
（1）NO的产生
2
-
PBS
标样
调零
O
1.5 0.5 2.0
2.0 0 2.0
盐酸羟胺
之后置于25C保温20min
o
（2）NO显色，调标准线
2
-
标样
调零
O
4.含量计算
上述反应液 对氨基苯磺酸 -苯胺
2.0 2.0 2.0
2.0 2.0 2.0
30C恒温箱中保温30min
o
从标准曲线中计算出测定液相对应的NO浓度，并换算成超氧阴离韭菜减肥能吃吗
子的浓度（X），再算出超氧
2
-
阴离子的含量。
O
含量（ggFW）=2XVtn/gFWVs
-1
注：Vt为样品提取液总体积；n为稀释倍数；Vs为显色时提取液体积；X为从标准曲线上计算
出的NO的浓度。
2
-
五、结果与计算
1.标准曲线数据：
管号 1 2 3 4 5 6 7
每管浓度（g)
吸光值
标准曲线如下图：
0
0
1246810
0.10.2110.4450.6520.8541.005
由标准曲线可知，标准曲线公式为：y=0.10306x+0.01029(其中x为NO溶液浓度，y为反应溶
2
-
液在A下的吸光值)
530
2.超氧阴离子含量计算
2.1小麦叶片测得的实验数据
（1）测得的吸光值数据：
处理 本底值 试验值
A 0.507 0.718
530
（2）把吸光值带入标准曲线公式中求得x（NO浓度）：
-
2
处理 本底值 试验值
X（每管NO浓度g） 4.819 6.867
-
2
O
=2XVtn/gFWVs中求出含量如下：
将Xa=4.819、Xb=6.867，Vt=5ml，n=2，FW=1.094g，Vs=2ml分别带入公式O含量（uggFW）
2
-.-1
处理 本底值 试验值
O的含量（ggFw） 44.049 62.769
-.-1
2.2荠菜叶片测得的实验数据
（1）测得的吸光值数据：
处理 本底值 试验值
A 0.469 0.685
530
（2）把吸光值带入标准曲线公式中求得x（内电阻
NO浓度）：
-
2
处理 本底值 试验值
X（每管NO浓度g） 4.451 6.546
-
2
O
=2XVtn/gFWVs中求出含量如下： 科威特在哪里
将Xa=4.451、Xb=6.546，Vt=5ml，n=2，FW=1.美丽的山水画
023g，Vs=2ml分别带入公式O含量（uggFW）
2
-.-1
处理 本底值 试验值
O的含量（ggFw） 43.509 63.988
-.-1
六、结果分析
O
由实验数据可得，小麦叶片中含量的试验值为62.769uggFW，本底值为
-1
O
44.049uggFW；荠菜叶片中含量的试验值为63.988uggFW，本底值为44.049uggFW。
-1-1-1
OO
去除本底所含有的过后，以小麦为试验材料的试验管的含量为18.675（ggFw），以荠
O
菜为试验材料的试验管的含量为19.939（ggFw）。即植物叶片细胞内生理平衡被打破后，
氧化态产物因无法被消耗而积累。
七．注意事项
俩小无猜
1、在制作标准曲线时，加入试剂的顺序不可以调整，一定要按顺序加入，否则显色不明显，
或不显色。
2、对氨基苯磺酸加入后一定要摇匀后再加-萘胺，否则会影响实验效果。
