艾塞那肽注射液

艾塞那肽通过调控PPAR及ACOX1改善大鼠非酒精性脂

肪肝病症状

武俊紫;牛世伟;贾亚敏;陶文艳;柳波;李燕;李树德

【摘要】目的研究艾塞那肽对高脂诱导的大鼠非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的作用.

方法120只SD大鼠随机分为对照组(CON)、模型组(HFD)、艾塞那肽低、中、高

剂量干预组(ELD、EMD、EHD)和阳性药物多烯磷脂酰胆碱治疗组(PDC),每组20

只,成功复制NAFLD模型后,给予相应治疗,治疗4周和8周后分别处死大鼠各半,肝

脏切片HE染色、相应试剂盒检测肝功能、血脂指标,RT-PCR及Westernblot测

定PPAR及ACOX1的mRNA和蛋白表达.结果治疗8周后,肝脏HE染色除

ELD外,PDC、EMD及EHD看不到任何脂肪颗粒浸润;治疗4周后,PDC、ELD、

EMD以及EHD组与HFD组相比,肝功能指标AST、ALT与CHE,血脂指标CHOL

与TG,明显降低(P＜0.05),8周后进一步降低;治疗后肝脏组织过氧化物酶增殖激活

受体(PPAR)和酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)表达有显著改善.结论艾塞那肽可

通过调控PPAR及ACOX1表达改善NAFLD大鼠症状.

【期刊名称】《基础医学与临床》

【年(卷),期】2014(034)004

【总页数】6页(P464-469)

【关键词】艾塞那肽;非酒精性脂肪肝病;过氧化物酶增殖激活受体;酰基辅酶A氧

化酶1

【作者】武俊紫;牛世伟;贾亚敏;陶文艳;柳波;李燕;李树德

【作者单位】昆明理工大学昆华医学院生物化学与分子生物学系,云南昆明

650504;云南省第一人民医院干部保健科,云南昆明650036;昆明理工大学昆华医

学院生物化学与分子生物学系,云南昆明650504;云南省第一人民医院干部保健科,

云南昆明650036;太原理工大学现代科技学院教务处,山西太原030021;昆明医科

大学药学院药物化学系,云南昆明6505阿米卡星说明书 04;昆明医科大学药学院药物化学系,云南昆

明650504;云南省第一人民医院干部保健科,云南昆明650036;昆明医科大学基础

医学院生物化学与分子生物学系,云南昆明650504

【正文语种】中文

【中图分类】R575.5

非酒精性脂肪肝(non-alcoholicfattyliverdia，NA胶原蛋白有哪些 FLD)是一种无酒精及其

他明确原因所引起的肝脏脂代谢障碍型疾病[1]，其疾病谱较广，包括单纯性非酒

精性脂肪肝病，非酒精性脂肪肝炎及与其相关的肝纤维化和肝功能衰竭等[2]。艾

塞那肽是从钝尾毒蜥蜴的唾液中提取的类似肠促胰岛素居心叵测 的生物活性肽，其具有促进

胰岛素分泌、抑制胰高血糖素生成、刺激胰岛B细胞的增殖与分化、抑制B细胞

凋亡等多项生理功能[3]，另有研究显示，艾塞那肽还具有调节脂质代谢的作runonce 用[4]，

但关于其是否可以改善NAFLD症状，国内外均没有研究报道。

1.1材料

1.1.1动物来源：120只清洁级雄性SD大鼠，体质量160～180g，昆明医科大

学动物实验部提供[合格证号：SYXK(滇)2011-0004]。

1.1.2药品与试剂：艾塞那肽注射液(BaxterPharmaceuticalSolutionsLLC公司)；

多烯磷脂酰胆碱注射液(赛诺菲安万特制药有限公司)；总胆固醇(CHOL)、三酰甘

油(TG)试剂盒(南京建成生物工程研究所)；谷草转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)

和胆碱酯酶(CHE)试剂盒(Bio-Swamp公司)；总RNA提取试剂盒(天根公司)；引

物(英俊生物公司)；抗体PPAR、ACOX1、-actin及ECL发光试剂盒(Santa

Cruz公司)；二抗(中杉金桥公司)。

1.2方法

1.2.1分组及药量：120只SD大鼠随机分为对照组(control，CON)、模型组

(high-fatdiet，HFD)、艾塞那肽低、中、高(ExenatideLow、Middle和High

Do，ELD、EMD和EHD)剂量干预组及阳性药物多烯磷脂酰胆碱(positive

drugpolyenephosphatidylcholine，PDC)治疗组，造模成功后CON组不予干

涉，HFD组予0.9%氯化钠注射液皮下注射，ELD、EMD和EHD组每天给予大鼠

皮下注射艾塞那肽1、2和4g，PDC治疗组给予多烯磷脂酰胆碱46mg。

1.2.2RT-PCR检测PPAR及ACOX1mRNA表达：取30mg肝脏组织，用总

RNA提取试剂盒提取总RNA，定量后反转录cDNA，用2LcDNA，1L

PrimerA，1LPrimerB，12LPCRMasterMix和4L无RNA酶水预混行

PCR扩增目的片段(98℃预变性2min，98℃变性10s、48℃退火30s、72℃

延伸35s，循环34次)。琼脂糖凝胶电泳反应产物，凝胶成像仪采集图像，

ImageJ计算荧光强度值，-actin为内参。结果以PPAR/-actin的荧光强度

值比值的均值标准差表示。

PPAR引物：上游：5′-CTTGTGCATGGCTGAGAAGA-3′，下游：5′-

AATTCCGTGAGCTCGGTGAC-3′，产物长度132bps。

ACOX1引物：上游：5′-GAGATGGATAACGGCTACCT-3′，下游：5′-

AATTCCGTGAGCTCGGTGAC-3′，产物长度190bps。

-actin引物：上游：5′-GTGACGAGGCCCAGAGCAAGAG-3′，下游：5′-

ACGCAGCTCATTGTAGAAGGTGTGG-3′，产物长度123bps。

1.2.3Westernblot检测SERBP-1及ACOX1蛋白表达：肝脏组织100mg制作

匀浆，定量后取各样本80g行SDS-PAGE电泳，半干转法至PVDF膜，5%的

脱脂牛奶封闭2h，一抗4℃过夜，洗膜后加入相应二抗孵育洗涤，ECL发光试剂

反应，曝光洗片，扫描后用ImageJ计算各条带吸光度值，以-actin作为内参

进行标准对照。结果以PPAR/-actin的吸光度值比值的均值标准差表示。

1.3统计学分析

数据处理分析均用SPSS19.0软件，计量资料以均数标准差表示，两组间计量资

料比较采用t检验。

2.1肝脏切片HE染色

CON无任何脂滴浸润现象，HFD有不同程度的细胞变性及脂肪空泡，4周时4个

治疗组脂肪空泡明显减少；8周时治疗组脂肪空泡进一步减少，除ELD组外，

PDC、EMD以及EHD4组看不到任何脂肪空泡(图1)。

2.2肝功能

PDC组、ELD、EMD以及EHD组与HFD组相比，AST、ALT与CHE治疗4周

后明显升高(Plt;0.05)，8周与4周趋势一致(表1)。

2.3血脂

CHOL与TG，4周时，PDC组、ELD、EMD以及EHD组较HFD组明显降低

(Plt;0.05)。8周后进一步降低(表2)。

2.4肝脏组织PPAR及ACOX1mRNA表达

2.4.1RT电脑卡机动不了怎么办 -PCR检测PPARmRNA表达：PDC、ELD、EMD和EHD组与HFD

组相比，4周后肝脏PPARmRNA表达明显升高(Plt;0.05)，但8周后除PDC外，

ELD、EMD和EHD组没有进一步改善(图2)。

2.4.2RT-PCR检测ACOX1mRNA表达:PDC组、ELD、EMD和EHD组与HFD

组相比，4周后肝脏ACOX1mRNA表达明显升高(Plt;0.05)。8周时其mRNA表

达进一步升高，但ELD、EMD和EHD表达均低于PDC组(图3)。

2.5Westernblot检测PPAR及ACOX1蛋白表达

2.5.1Westernblot检测PPAR蛋白表达：PDC组、ELD、EMD和EHD组与

HFD组相比，4周后肝脏PPAR蛋白表达明显升高(Plt;0.05)。8周后PDC组、

ELD、EMD和EHD组PPAR的蛋白表达进一步升高(图4)。

2.5.2Westernblot检测ACOX1蛋白表达：与HFD组相比，4周时PDC组、

ELD、EMD和EHD组肝脏PPAR蛋白表达明显升高(Plt;0.05)，8周PDC组、

ELD、EMD和EHD组PPAR的蛋白表达进一步升高(图5)。

NAFLD严重威胁着人们的健康，一般而言，轻度NAFLD患者有25%左右有疲乏

感，如果不加干预，任由继续发展，形成中度甚至重度NAFLD则会给患者带来肝

区隐痛、全身乏力、腹泻等生活影响[5]，多数学者认为NAFLD的治疗应以控制

饮食，增加运动等为主，但消除或控制与NAFLD相关的新年怎么画 因素，如糖尿病、高血脂、

肥胖等的药物治疗也不容忽视[6]。

PPAR作为PPARs家族的一员，在NAFLD的发病过程中扮演着重要的角色[7]，

PPAR最大的功效为调节脂肪代谢，从而参与脂肪性肝病的发病[8]。ACOX1是

脂肪细胞内与脂肪酸氧化相关的酶，同时也是过氧化酶体内-氧化系统的起始酶

[9]。本实验用高脂溶液灌胃SD大鼠建立NAFLD模型，艾塞那肽治疗后，肝脏

HE染色EMD和EHD组肝脏切片在8周时几乎看不到任何脂肪空泡，同时艾塞

那肽可明显改善大鼠PPAR及ACOX1的mRNA和蛋白表达，PPAR及

ACOX1表达的升高促使了其血脂功能的改善，随着血清脂质代谢的好转，大鼠肝

功能也发生了显著地改善。

综上所述，本研究结果提示，用高脂饮食灌胃所形成的NAFLD大鼠模型，大鼠明

显具有脂代谢紊乱，肝功能异常等特征，艾塞那肽可明显且快速的调节大鼠脂质代

谢，改善肝功能，有效的缓解了NAFLD相关症状，其机理可能是通过改善

NAFLD大鼠PPAR及ACOX1的表达来实现的。

【相关文献】

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