第32卷第6期
水生生物学报
红头龟Vol .32,No.62008年11月
兴趣爱好特长自我介绍ACT A HY DROB I OLOGICA SI N ICA
Nov .,2008
收稿日期:2006211215；修订日期:2007210212
基金项目：国家自然科学基金(30770395;30370112)；国家载人航天工程计划；内蒙古发改委与武汉市科技局重大攻关计划；中国科学院水
生所领域前沿项目资助
作者简介张宏(—)，男，安徽金寨人；在读硕士研究生；主要研究方向环境毒理学。2z _@6通讯作者胡春香,2x @D O I 号:1013724/SP 1J 1000012008160874
爪哇伪枝藻胞外多糖诱导皮肤癌细胞(A431)凋亡的研究
张 宏 马红樱 张德禄 吕 莹 王高鸿陈 坤 刘永定 胡春香
(中国科学院水生生物研究所，武汉 430072)桂圆汤
摘要：为探讨爪哇伪枝藻胞外多糖(Extrace llular poly me ric substance s of Scytone m a javanicu m ,EPS)诱导人表皮癌
A431细胞凋亡及其对凋亡相关基因caspa 23、bcl 22和bax 表达的影响，本实验利用M TT 法检测细胞生长抑制情
况;HE 染色法及透射电镜进行形态学观察；单细胞凝胶电泳法(SCG E /彗星电泳)分析DN A 受损情况；免疫组织化学法检测细胞内ca s pa 23、bc l 22和bax 表达水平。结果显示EPS 能显著抑制A431细胞增殖，并呈时间和剂量依赖性，作用96h 的半数抑制浓度I C 50为4125m g/mL，并出现细胞凋亡的形态学改变；彗星电泳结果与对照相比6m g/
mL EPS 作用48h 能引起A431细胞DNA 严重损伤；免疫组织化学检测发现6mg /mL EPS 作用72h 能显著上调A431
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细胞内凋亡相关基因caspa s e 23和bax 的表达，而下调bcl 22的表达。关键词：爪哇伪枝藻；胞外多糖;A431；细胞凋亡
中图分类号:Q354 文献标识码:A 文章编号:100023207(2008)0620874207
近年来，活性多糖由于其明显的生物学功效和低毒副作用而备受人们的关注和厚爱
[1]
。但目前
研究较多的主要是高等药用植物和菌类植物的多糖，藻类多糖的活性很少被注意[2,3]，尤其是荒漠藻多糖。虽然荒漠藻因其在受损土壤生态系统修复中的作用而被关注
[4,5]
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舅舅用英语怎么说，但对其胞外多糖的研究还仅
限于抗干旱、抗辐射、抗盐碱、抗捕食等环境功能方面，而在抗肿瘤等生物学活性方面还尚未见报
道[6—9]。爪哇伪枝藻(Scytone ma j avan icum )是荒漠地区生物结皮组成中的优势种类，它直接暴露于土壤表面[10]传说中的世外桃源
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，常通过胞内合成的类菌胞素氨基酸(Mycosporine 2like a m ino acids,MAAs )、胞外分泌的伪枝藻素(
scyt one m in )和胞外多糖来适应高强辐射[11]，而高强辐射是荒漠地区诱导人类皮肤癌的主要因素之一
[12,13]
，我们推测该种类的胞外多糖也具
有抗肿瘤活性。因此，本研究以人表皮癌细胞(A431)为试验对象，探究爪哇伪枝藻胞外多糖的抗肿瘤活性及其可能的机制，以进一步揭示荒漠藻适应环境胁迫的机理，并为可能的资源开发利用提供
参考依据。
1 材料与方法
111 人表皮癌细胞株及其培养 人表皮癌细胞株A431购自中国典型物保藏中心(CCTCC )，于MEM 基础培养基(含10%胎牛血清(Gibco),2%的丙酮酸钠，青霉素100U /mL，硫酸链霉素100μg /mL 中，置于二氧化碳培养箱(MCO 215AC,Japan )中37℃、饱和湿度、5%CO 2条件下培养。待细胞进入对数生长期后，用0125%胰蛋白酶消化细胞，调节成相应的浓度传代培养。本实验均采用对数生长期细胞。
112 爪哇伪枝藻胞外多糖(EPS)的制备 爪哇伪枝藻(S 1jav a n icu m )取自中国科学院水生生物研究所藻种库。EPS 的制备方法参照文献[4]的方法，将藻接种于B G 110培养基,25℃连续培养90d 。收集培养液于旋转蒸发仪(R 22102Buchi,S witze rland)中40℃,100r/m in 旋转蒸发至最小体积，将浓缩得到的液体用阴离子交换柱DEAE Sepyhar o Fast
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