BL21(DE3)pLysS感受态细胞
BL21(DE3)pLysS Chemically Competent Cell
BL21(DE3)pLysS感受态细胞基因型：
澳大利亚图片F-omp T hsd S(r B-m B-) gal dcm(DE3)pLysS Cam r
BL21(DE3)pLysS感受态细胞说明：
BL21(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒，具有氯霉素抗性。pLysS含有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)。BL21(DE3)pLysS 感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率高达108 cfu/µg DNA。
BL21(DE3)pLysS感受态细胞操作方法：
1.BL21(DE3)pLysS感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入
目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm
复苏60分钟。
4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含
34 µg/ml氯霉素及所选质粒筛选抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
BL21(DE3)pLysS感受态细胞注意事项：
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。
5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
6. BL21(DE3)pLysS 菌株携带 pLysS质粒，除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉素，以防质粒丢失。
BL21(DE3)pLysS感受态细胞保存条件：-80℃
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