实验四 放线菌的形态观察
杨明轩 生物111班 1102040128
一、实验目的
1、学习观察放线菌形态的基本方法。
2、观察放线菌的个体形态特征。
二、实验原理
放线菌是一类丝状原核微生物，因其菌落在固体表面长成放射状生长而得名，放线菌主要存在于土壤中，大部分腐生，少数寄生，也有的与植物共生固氮。
放线菌是最主要的抗生素产生菌，其形态特征是菌种选育和分类的重要依据。放线菌通常有分枝发达的菌丝体组成，菌丝直径为0.2-1.2μm。主要由两部分组成，一部分长在培养基内，一般没有横隔，有固定和吸收养分的作用，称为基内菌丝或营养菌丝。当基内菌丝发育到一定阶段，即可向空中伸展形成气生菌丝（有的菌种没有气生菌丝）。在显微镜下观察时，气
生菌丝颜色较深，并且比基内菌丝粗两倍左右。有些种的气生菌丝发育到一定阶段，其顶端可形成孢子丝。孢子丝分直、波曲、螺旋等形状。孢子丝的着生方式分别为单生、丛生、轮生和互生。
放线菌菌落小，与培养基结合紧密，不易用接种钩挑取，因而难以直接观察。通常采用玻璃纸培养法和插片法观察。本次实验采取插片法。该方法适合进行营养菌丝、气生菌丝和孢子丝的比较观察。在接种放线菌的培养基一侧，以45°角插入无菌盖玻片，使放线菌沿培养基与盖玻片交界处生长，并附着于盖玻片上，待菌丝生长一段时间后，取下盖玻片进行染色，即可直接观察。
三、实验材料
1、菌种：紫色直丝链霉菌（Streptomyces violaoeorectus）、黑化链霉菌（Streptomyces nigrificans）、天蓝色链霉菌（Streptomyces coelicolor）、丰加链霉菌（Streptomyces toyocaensis）
2、染色剂：石炭酸复红染液
3、培养基：高氏一号培养基
4、其他：干净载玻片、盖玻片、无菌水、洗瓶、擦镜纸、吸水纸、二甲苯、香柏油、接种用具
四、实验方法
1、制备平板：将已融化的高氏一号培养基（冷却到45℃左右）倒入无菌培养皿，每皿15~20ml（厚度约为培养皿高度的一半），凝固后备用。
2、接种：用接种环从放线菌试管斜面上挑取孢子，在培养基与盖玻片之间做“之）字型密集划线。
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3、插片：用无菌镊子取无菌盖玻片，以45°斜插入培养基（插入深度约占盖玻片的一半长度）。
4、培养：将培养基平板倒置于28℃培养箱中，培养7天。
5、制片：用无菌镊子小心取出盖玻片，稍微加热固定，再用石炭酸复红染液染色1min即怎么组词，
水洗晾干。在载玻片上滴一滴香柏油，将盖玻片置于载玻片上。
6、镜检：用油镜进行观察。
五、实验结果及分析
1、填表7-1说明各链霉菌菌落特征。
表7-1 放线菌菌落特征观察
菌名 | 菌落形态 | 正面颜色 | 背面颜色 | 气味 | 色素 |
紫色直丝链霉菌 | 碧水丹山圆形、边缘丝状、表面干燥 | 灰白色 | 紫色 | 土腥味 | 脂溶性 |
黑化链霉菌 | 假根状、中央微凹、表面干燥 | 灰白色 | 深褐色 | 土腥味 | 电磁炉维修教程水溶性 |
天蓝色链霉菌 | 假根状、边缘丝状、表面干燥 | 感谢同事的帮助蓝灰色 | 蓝色 | 新学期图片土腥味 | 水溶性 |
丰加链霉菌 | 圆形、边缘不规则、表面干燥 | 灰白色 | 浅黄色 | 土腥味 | 脂溶性 |
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在油镜下可以看到，孢子丝的颜色明显比基内菌丝和气生菌丝要深得多，而且孢子清晰可见。但是基内菌丝和气生菌丝较难区别开来。紫色直丝链霉菌的孢子丝是直的，而黑化链霉菌和天蓝链霉菌的孢子丝呈螺旋状，丰加链霉菌的孢子丝呈大波浪状。
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六、思考题
1、插片法用于观察放线菌有何优点？
答：放线菌菌落小，与培养基结合较紧密，不易用接种钩挑取，因而难以直接观察。而采用插片法，可以直接使放线菌沿培养基与盖玻片交界处生长，并附着于盖玻片上。可取下盖玻片进行染色观察。该方法可以进行放线菌营养菌丝、气生菌丝和孢子丝的比较观察。
2、培养放线菌的培养基有何特点？
答：培养放线菌采用的是高氏一号培养基，这是一种半合成培养基，采用可溶性淀粉为碳源、KNO3为氮源。因为缺乏速效的碳源和氮源，该培养基的营养较为匮乏，有利于放线菌产生孢子。同时，由于链霉菌生长较慢，因此用来培养链霉菌的培养基平板要比培养
细菌的要厚一些。
