仪器设置
1 仪器配置和初始设置
2 优化视野和聚焦
3 维护和关机
1 仪器配置和初始设置
1.1 电源配置
台式FlowCAM的电源配置：两根电源线，一根属于FlowCAM主机；另一根属于LCD显示器。通常，应首先给显示器通电。如果仪器配有无线鼠标，应将其充满电，无线键盘必须安装电池。USB接口的鼠标键盘通过仪器USB口供电。仪器背面的这些端口是用于连接键盘（USB口）、鼠标（USB口）、显示器和网线。在此型号仪器的背面（一个在前面）有另外的USB接口。
1.2 启动仪器
普通台式仪的电源开关前后各一个。在普通台式仪的背面，主电源开关必须首先置于“打开”（I）位置。在普通台式仪的前面，推动圆形银色按钮打开标准电源开关，电源接通时，此按钮电源开关将亮起。在电源开关的下方是一个 USB 口和一个“激光电源”钥匙孔。为了给激光器供电，用户必须将“激光安全钥匙”插入钥匙孔，并旋转至“打开”位置。尽管激光器现在已经供电，但直到光路门被关闭，并且用户打开VisualSpreadsheet软件（激光是被软件启动的）后，激光器才被启动。
1.3 登录系统
计算机运行标准启动顺序后，用户将进入微软Windows7操作系统。由于默认用户帐号不需要密码，用户不会看到Windows7的登录界面。如果仪器只有单个用户使用，就可保持默认状态不变。然而，出于安全和管理考虑，强烈建议本仪器按普通电脑来进行管理，特别是当多用户使用时。由于图像处理是个繁重的计算机处理过程，因此在计算机进行数据采集时，请不要进行其他操作，这是很重要的。这意味着本仪器使用期间，应关闭所有其他应用程序（尤其是文件监控应用程序，如病毒扫描器，这会显著影响仪器的性能）。
1.4 安装物镜
通过螺纹将物镜（通常是2倍、4倍、10倍或20倍）拧在光路区域左侧的光学模块上。请勿触碰镜头表面。
1.5 安装样品流通池
逆时针旋转拧松螺丝，从样品池座安装架上取下样品池座。从样品池座底部拧下底盖。通过逆时针旋转底盖可将其取下。将正确的样品池放入样品池座的槽内。通常，物镜/样品池建议按如下方式组合使用：20x / 50µm,10x / 100µm,4x / 300µm和2x / 800µm。确保每一尺寸的样品池使用正确的样品池座。顺时针旋转底盖，将其重新安装在样品池座上。在拧紧底盖时，轻轻地平直地握住样品池。当样品池无法移动时，就说明底盖已拧紧。不要将样品池座底盖拧得过紧，尤其在使用50µm或100µm样品池时。过大的压力会压碎样品池玻璃。将“样品池座”重新安装在“样品池座安装架”上，然后拧紧螺丝。
表1 样品流通池座
物镜 | 推荐样品池座型号 |
2X | QCFC2000, QCFC1000, QCFC800, QCFC600 |
4X | QCFC600, QCFC300 |
10X | QCFC300 |
20X | QCFC300 |
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表2 样品流通池和管路规格
流通池型号 | 深度(μm) | 宽度(μm) | 管内直径(cm) | 匹配物镜 |
FC50 | 50 | 1000 | 0.16 | 20X或10X |
FC100 | 100 | 2000 | 0.16 | 10X或20X |
FC300 | 300 | 3000 | 0.16 | 4X |
FC600 | 600 | 6000 | 0.40 | 4X或2X |
FC800 | 800 | 8000 | 0.50 | 4X或2X |
FC1000 | 1000 | 10000 | 0.50 | 2X |
FC2000 | 2000 | 4000 | 0.24 | 2X |
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1.6 安装注射泵
仪器中安装注射泵后，可使其对流体样品的操作更精确更准确，这样就形成了对本机启动和操作的新模式。流速可选择从0.005-200ml/min，样品体积可接受低至35µL。在安装注射泵泵管时，必须考虑其长度。确保在样品池上方和下方的泵管长度精确测量至厘米。在
输入泵管长度时，建议使用最小精度为0.25cm。只要重新使用相同的样品池，这些管长度就不需定期更改。
桂圆干的功效与禁忌表3 注射泵型号和流速范围
物镜 | 推荐注射泵型号对焊 | 流速范围 |
2X | 12.5 ml | 0.125-250 ml/min |
4X | 5.0 ml | 0.05-100 ml/min |
10X | 1.0 ml | 0.01-20 ml/min |
20X | 0.5 ml | 0.005-10 ml/min |
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1.7 安装样品池管路
将样品池的入口管与样品漏斗或吸管顶端相连。流体样品应从样品池顶端流入，向下流过样品池，从底端流出。
微量吸管支架组件：微量吸管组件有三种型号来放置不同尺寸的微量吸管。小尺寸的可放
置最大1mL的微量吸管，中尺寸可放置2.5-5mL的吸管，大尺寸可放置10mL的吸管。样品池管路连接吸管的方式，与连接样品漏斗的方式类似。管路越短越直越好。
样品漏斗：使用一个六英寸的环架，来测量和缩短样品池上游管路。环绕管路一直降低漏斗架环。将漏斗与管路相连，然后提高漏斗架至管路完全展开的位置。(这个过程会消除对样品池和连接头的压力——对一些较小的、更易碎的样品池，尤其重要。) 管路越短越直就越好。
显示屏模糊最后，将样品池的下游管路接至泵的入口端。将泵出口管路接至适当的废液容器。
表4 微量吸管型号
物镜 | 推荐微量吸管型号 |
2X | NF510 (10 mL), NF505 (5 mL) |
4X | NF505 (5 mL), NF502 (2.5 mL), NF501 (1 mL) |
10X | NF502 (2.5 mL), NF501 (1 mL) |
20X | NF502 (2.5 mL), NF501 (1 mL) |
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夏天的诗句1.8 启动泵并消除样品池中气泡
在“设置菜单”中选择“泵”会弹出“泵控制器”窗口。如果注射泵当前与系统相连，软件会自动检测并初始化注射泵。选择冲洗系统：用户可输入“循环次数”，软件会计算剩余时间来完成指定的循环周期。系统会显示当前周期，通过单击“取消”按钮，此清洗过程可以在任何时间停止。在每次运行结束后，当启动仪器来排空系统中的剩余液体到废液容器中，此时标有“自动将样品排至废液瓶”复选框为可选设置。注意, 排空的样品体积是通过在“相关菜单>相关菜单设置>样品池(标签)红嘴绿鹦哥”中输入的下端管路长度计算得出的。
为保证结果准确，尤其在使用仪器进行计数/浓度测定时，样品池需要保证无气泡。通过挤压样品池和泵之间的管路可消除较小尺寸样品池(50、100、300µm)中的气泡（挤压1-3秒，放开，如果需要的话，重复此过程）。通过将泵反向流动，直到所有气泡沿管路返回到漏斗里或样品容器中，来消除较大样品池(> 300µm)中的气泡。最后，增加流速来冲出和消除残存的气泡。
2 优化视野和聚焦
通过双击桌面图标，启动VisualSpreadsheet软件。出现提示后，选择适当的放大倍数。通知窗口会提示操作者，是否安装了正确的物镜和准直器/扩束器(如果需要的话)。为了便于用户操作，可设置VisualSpreadsheet抗组胺类软件在“主窗口”底部显示一个“状态栏”。启用此功能，可按以下步骤完成：参数选择 > 主窗口设置>窗口布局>状态栏>显示状态栏。“状态栏”进行了色码标记，并与物镜上的彩色线相匹配。所显示颜色是黑色(1/2X)、蓝色(1 x)、灰色(2 x)、红色(4 x)、黄色(10 x)和绿色(20 x)。
2.1打开设置和聚焦窗口
进入VisualSpreadsheet软件的“设置和聚焦模式”(设置>设置和聚焦[F6])允许用户查看实时的相机(样品池的)图像。这有助于完成以下任务：
(1) 在水平和垂直方向上，将样品池定位在相机视场内
(2) 检查样品池缺陷
(3) 确定样品池清洗程序的效果
(4) 对颗粒调焦
(5) 实时查看当前样品池中所关注样品
2.2 粗调焦距
对视场进行焦距粗调，松开导轨锁紧螺丝。滑动整个“样品池座组件”，使样品池的所有部位都在焦距内。当样品池定位后，拧紧导轨锁紧螺丝。提醒：使用20倍物镜时，要倍加小心，防止其碰触50µm样品池（有潜在破碎危险）。
2.3 样品池的位置调节
在进行样品池定位和微调时，可能会用到黑暗系小说X和Y轴定位螺丝。例如，可将样品池玻璃壁上的划痕移至视场外的位置。对于样品池的垂直微调，可旋转Y轴定位螺丝。对于样品池的水平微调，可旋转X轴定位螺丝。
2.4 调节视场照度
有两种方法来调整经样品池照射到物镜的光强度（注意：在调节照度和焦距前，样品池中应含有样品稀释液或所测样品）。
第一种方法是利用相机的软件控制。控制光强度的相机设置，可通过VisualSpreadsheet软件的两个不同菜单进入。第一个菜单是：设置> 相关菜单 > 相机(标签)和定时(标签)。第二个菜单是：在“设置和聚焦”（F6）窗口中，选择“设置”菜单中的“相机”。用第二种方法进入菜单的好处是“设置和聚焦”窗口始终打开和可见。任何输入和应用的调节将显示给用户，并可进行即时反馈。(相机)增益和闪光灯持续时间值可进行调整，以优化视场照明的强度。调节增益：该值越高，视场越明亮。然而，此值过高时，颗粒与背景的对比度会有减弱。调节闪光灯持续时间：该值越高，视场越明亮。然而，当这个值过高时，移动颗粒的图像将会模糊。通常，增益和闪光灯持续时间应进行调节，使样品池在焦距内，你将获得一个约165-185的光强度均值和一个小于255的最大值。如果强度参数未在“设置和聚焦”窗口中显示，可做如下操作：显示> 设置显示> 显示像素强度极限值(复选框)，并选中该复选框。
第二种调整通过样品池光强度的方法是手动方法。可通过调节螺丝，使其保持在合适的位置，然后手动重新定位LED光源，将光柱移至视场的中心。使用所提供的六角扳手，调节这三个螺丝直到获得最佳的照明图像(参见以上内容，获得正确的强度值)。这种调节应是微小的旋转就可完成的，而不会在任何方向上有超过一周的旋转, 为了明确每个螺丝对视场
照明效果，需对每个螺丝进行调节。为一个物镜调节好照明后，如果安装另一个不同的物镜后，可能需要重新调整。总之，软件和手工调节应结合使用来实现最佳均匀的视场照明和强度值。
2.5 对样品中所关注颗粒进行焦距微调
停止泵运行(当使用注射泵时，在“设置和聚焦”窗口中，将开关从“正向”调至“关闭”或“暂停”)，使用“焦距微调”旋钮将所关注颗粒调整至焦距内。另一种确定样品池中心位置并在这点聚焦的方法是找到“焦距微调”旋钮的调节位置，在此位置上样品池的一侧池壁处于焦点上。接下来，进行焦距微调直到样品池另一侧池壁在焦点上。估计和划分两位置点间的距离，并在两侧壁间估计位置点找到焦点平面的中心。
3 维护和关机
3.1 清洗样品池和管路
在使用后，立即用去离子水或蒸馏水洗净漏斗和样品池。如果有必要的话，在清洗前，先用适当的溶剂或表面活性剂去除颗粒。这样做将有助于保持日常使用中样品池清晰和无污
染。如果要长时间保存，可在样品池中充满弱漂白剂(2 - 5%)。并在管路两端进行密封，以防止溶液漏出下巴翘(或者使用一个双头管接头形成一个封闭环路)。
3.2 关闭仪器
关闭激光器，退出VisualSpreadsheet软件。然后打开“开始”菜单，选择“关机”。计算机关机，屏幕将完全空白（关闭显示器电源按钮，如果需要的话）。主电源开关置于“关闭”（O）位置。
