产 品 说 明 书
◆蛋白印迹膜再生液Stripping Buffer
bili比例
◆目录号1907
◆使用手册
◆实验室使用，仅用于体外
产品组成、储存、稳定性：
产品组成保存6次12次40次
Strong Buffer 室温60ml 120ml 400ml
Mild Buffer 室温60ml 120ml 400ml
操猪本产品收到后按照上面指示温度存放，12个月内有效。
产品介绍：
蛋白印迹膜再生液，用于Western blot中转移了蛋白的膜的重复利用。在Western blot 中完成了一抗二抗结合和后续的化学发光检测后，有时还需要检测、Actin 、Tubulin 等表达量相对稳定的蛋白作为参照，或检测其它蛋白进行比较。通过使用蛋白印迹膜再生液中特殊成份解离一抗二抗和印迹膜上抗原的结合从而去除一抗二抗，即可非常方便地重新利用同一张膜检测其它蛋白。与重新跑一个SDS-PAGE胶，不仅省时省力，而且可以消除重新上样而带来的误差，使可比性更强。
产品特点：
1.理想的再生液应该是洗脱一抗二抗的同时，不洗脱膜上结合的蛋白（抗原），或
者改变抗原的结合性质，但是目前没有一种再生液可以做到只洗脱一抗二抗，而完全不洗脱膜上结合的抗原。也没有一种再生液可以适用于所有不同亲和度的抗原抗体复合物，太强，则抗原也容易被洗脱；太弱，则一抗二抗残留太高。本试剂盒配备了两种适用不同亲和力抗原抗体复合物的配方（Strong buffer 和Mild buffer），用户可以根据自己抗原抗体结合强度选用。
2.传统分子克隆上介绍的方法对抗原洗脱强度过大，常常会导致蛋白信号的减弱。
但是，本再生液为本公司独有的配方，效力强，但是对蛋白作用温和，经过多个抗体的检测试验，通常可以重复利用膜5次或者更多。
3.不含有常用的β-巯基乙醇，没有异味，操作简单快速，室温进行，最快15-20钟
就可以完成全过程。
注意事项：
1.本试剂盒里面包括两种配方的再生液（strong buffer 和mild buffer），大家可以
根据自己使用抗体和抗原的亲和度选用，但是两种再生液不可以混合在一起使用。
2.再生液使用后应该立刻盖紧盖子，避免长时间和空间接触导致pH和质量改变，
影响使用效果。
3.Strong buffer 有轻度腐蚀性，为了您的安全，请带乳胶手套操作，如果不小心溅
入眼睛，请用大量清水冲洗。
4.为了达到最佳效果，推荐使用PVDF膜，尤其strong buffer对PVDF膜效果更好。
5.适用于ECL和类似的化学发光试剂进行的Western 检测。不适用于非化学发光
试剂进行的Western检测，例如DAB，NBT/BCIP。
中国景区6.需要再生的膜如果，则洗脱效率非常低，因此如果决定要做膜再生，应该做香干小炒肉
草把子
完底物化学发光后，立刻将湿润状态的膜放入PBS中4℃保存直到开始再生过程。
7. 在实践应用中，我们发现有时候部分亲和力很弱的抗原抗体，用strong buffer效
果反而比mild buffer差，有时候亲和力很强的抗体，用mild buffer效果却更好。
因此，实际过程中，亲和力强的抗体，即使strong buffer效果不好，也一定要试试mild buffer 是否效果更好。
水饺英语操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
1.Mild Buffer（温和再生液）操作步骤
1)在合适大小的容器内将膜完全浸入20ml的Mild Buffer中，室温孵育一个小时(或
者换液一次，2×30分钟)。
agree>吃什么可以减肥对于低亲和力的抗原抗体复合物，半小时就够了；对于高亲和力，可适当延长时间或者提高孵育温度或者在摇床上轻摇，最佳条件应该实验中调整优化。
2)用PBS漂洗2×5分钟。
3)重新封闭后便可以进行Western blot的后续操作。
大多数情况并不需要重新封闭，您可以自己选择是否冒一些风险省略封闭的步骤。
2.Strong Buffer(强力再生液)操作步骤
1)将膜在蒸馏水中漂洗浸泡5分钟。
2)弃蒸馏水，将膜完全浸入20ml的Strong Buffer中，摇床上轻摇5分钟。
对于很强的抗原抗体复合物，应该适当延长时间或者提高孵育温度，最佳条件应该实验中调整优化。
3)弃Strong Buffer，漂洗后浸泡入蒸馏水中，摇床上轻摇5分钟。
4)膜可以进行封闭和后续的Western blot 操作了。
完
