高效液湘色谱法测定苯、苯酚、对苯醌、苯二酚和苯三酚
额日和木;王旭;张煜琳;萨嘎拉;照日格图
【摘 要】Bad on the high performance liquid chromatography method ,benzene and its direct oxida-tion products :phenol , benzoquinone , o-Bihydroxybenzene , m-Bihydroxybenzene , p-Bihydroxybenzene , benzenetriol were completely parated by the YMC-C18(250mm × 46mm ,5μm) chromatographic column with acetonitrile-water(50:50 ,v/v) as mobile pha .The UV detection wavelength was t at 270 nm .The result showed good linearity (R≥0 .99) ,the detection limit of the samples were between 0 .002-0 .008 μg/mL .The recoveries of internal standard method(ISM) ranged from 80 .40 to 101 .59% at the three spiked levels ,the relative standard deviation was below 9 .6% ;the recoveries of external standard method (ESM ) ranged from 82 .72 to 99 .48% at three spiked levels ,the relative standard deviation was below 10 .8% .It was indicated that the internal standard method was better than the external standard method for the quan-titative analysis of benzene and its products of oxidation .T his method is simple ,rapid ,nsitive and stabi-lize
d ,low consumption of sample and solution ,and analytical conditions are moderate .%本文采用高效液相色谱法，以乙腈-水（50：50，v/v）混合溶液为流动相，经 YMC -C18（250 mm ×46mm ，5μm）色谱柱分离，紫外检测波长为270nm时，测定了苯、苯酚、对苯醌、邻苯二酚、间苯二酚、对苯二酚和苯三酚。结果表明：苯、苯酚、对苯醌、邻苯二酚、间苯二酚、对苯二酚和苯三酚在各自的测定范围内均有良好的线性关系（相关系数为≥0.999），方法的检出限为0.002～0.008μg/mL。内标法（ISM ）回收率为80.40％～101.59％，相对标准偏差＜9.6％；外标法（ESM ）回收率为82.72％～99.48％，相对标准偏差＜10.8％。说明在苯、苯酚、对苯醌、邻苯二酚、间苯二酚、对苯二酚和苯三酚定量分析方法中内标法优于外标法，并且该方法操作简便、快速、稳定性好、样品和溶液用量少，分析条件温和。
大专要多少分【期刊名称】晚心《分析仪器》
【年(卷),期】2014(000)003
【总页数】6页(P34-39)
【关键词】苯;苯酚;内标法;外标法;高效液相色谱
【作 者】额日和木;王旭;张煜琳;萨嘎拉;照日格图
【作者单位】晕车吃什么零食好内蒙古师范大学化学与环境科学学院，内蒙古自治区绿色催化重点实验室，呼和浩特 010022;内蒙古师范大学化学与环境科学学院，内蒙古自治区绿色催化重点实验室，呼和浩特 010022;内蒙古师范大学化学与环境科学学院，内蒙古自治区绿色催化重点实验室，呼和浩特 010022;内蒙古师范大学化学与环境科学学院，内蒙古自治区绿色催化重点实验室，呼和浩特 010022;内蒙古师范大学化学与环境科学学院，内蒙古自治区绿色催化重点实验室，呼和浩特 010022怎么看电脑内存
【正文语种】中 文
目前工业上90%的苯催化氧化制苯酚用异丙苯法［1］，而此方法存在着原料转化率低，反应步骤多，产物选择性低等一系列问题，易生成多种、大量的副产物，造成很大环境污染。因此苯直接羟基化成为重要的发展趋势［2］。而苯直接氧化羟基化的主要产物为苯酚、对苯醌、邻苯二酚、间苯二酚、对苯二酚和苯三酚。这些产物是重要的有机化工原料，广泛用于石油化工、农业及工业生产等诸多领域，在合成纤维、合成橡胶、塑料、医药、农药、香料、涂料、染料和炼油等工业中都有着重要的用途［3］。但是，众所周知苯
朋友的歌为环境中的主要有毒有机污染物之一，被国际卫生组织确认为具有高毒性的致癌物质［4］，而苯二酚的毒性与苯酚类似，它们容易经吸入、食入、皮肤吸收进入人体，能够抑制中枢神经系统，损害肝、皮肤功能［5］。因而对这些有机污染物进行监测和监控，对环境系统的评价和毒理分析起着重要的作用，因此对这些物质的快速高效的分离分析尤为重要。目前文献报道苯及其氧化产物的分析方法最常见的是气相色谱法［6］，高肖汉等，主要分析了苯和苯酚。Badol等［7］，采用吹扫补集-气相色谱，分析了苯和1，3-丁二烯。臧立华和孙晓慧等［8，9］，分别用气相色谱质谱联用法分析了多种挥发性有机物、Schupfer等［10，11］，采用固相微萃取-气相色谱质谱法技术分析了苯系物，主要包括：苯、甲苯、乙苯等物质。近年来也有研究者用高效液相色谱法测定空气中的苯系物［13］，其一般方法为，运用吸附剂吸附，采用萃取方法获得样品后再进行液相分析。孙剑奇等［12］，用液相色谱法分析了苯二酚。Ogawa等［14］分析苯的氧化产物时采用高效液相色谱法定量分析了苯酚、对苯醌、1，2，4-苯三酚和二氧化碳。蒋生祥等［15］采用涂敷后的C18柱子分离了间苯三酚、3种苯二酚和苯酚等酚类化合物，有效分离3种苯三酚方面需要进一步的研究。利用气相色谱分析有机物时，色谱柱的高温条件易将一部分有机物分解和裂变，存在分析条件苛刻、分析结果不准确等因素。而液相色谱法可以对80%卡通可爱
的有机化合物进行分离分析，与气相色谱法相比，高效液相色谱法优势在于在较低温度下能将邻苯二酚、间苯二酚和对苯二酚等同分异构体分离开，从而更准确地对这3种物质进行定量。本文采用高效液相色谱法，以乙腈-水（50：50，v/v）作为流动相，待测样经过滤（0.22μm）并超声前处理之后，分别采用内标法（Internal standard method，ISM）和外标法（External standard method，ESM）对苯、苯酚、对苯醌、邻苯二酚、间苯二酚、对苯二酚和苯三酚进行了定量分析结果，内标物为对甲酚。
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1.1 仪器与试剂
仪器：LC-6A高效液相色谱仪（日本Shimad-zu公司）。配有SPD-6AV（UV-Vis Spectropho-tometric Detector）紫外可变波长检测器、LC-6A（Liquid Chromatograph）高压输液泵、CTO-6A（Column Oven）柱箱、SCL-6A（System Control-ler）系统控制器；N-2000色谱工作站（浙江大学智达信息工程有限公司）；C18柱子（250mm×46mm，5μm）（日本YMC公司）；7125型进样器（美国）；SZ-Ⅱ自动双重纯水蒸馏器（上海嘉鹏科技有限公司）；U-2900双光束分光光度计（日本Hitachi公司）；D孤单坠爱
L-180D智能超声波清洗器（上海之信仪器有限公司）；台式高速离心机（金坛市新航仪器厂）。
试剂：乙腈（Acetonitrile，纯度≥99.5%），上海星可生化有限公司；去离子水（自制）。
标准品：苯（Benzene）、苯酚（Phenol）、邻苯二酚（o-Bihydroxybenzene）、间苯二酚（m-Bihydroxy-benzene）和对苯二酚（p-Bihydroxy benzene）均为色谱纯试剂，纯度≥99.5%，购自天津市光复精细化工研究所；对苯醌（p-Benzoquinone，纯度≥99.5%）和1，2，4-苯三酚（1，2，4-Benzenetriol，纯度≥97%），购自上海晶纯实业有限公司；邻苯三酚（Pyrogallol；纯度≥99.0%）和无水间苯三酚（Phlo-roglucinol Anhydrous，纯度≥99.0%）购自上海梯希爱化成工业发展有限公司；对甲酚（4-Methyl-phenol，纯度≥99.5%）为内标物，购自天津市光复精细化工研究所。
1.2 色谱条件
用U-2900双光束分光光度计，对10种标准溶液于200～600nm范围内进行扫描测定。溶液的紫外最大吸收波长和在270nm处相对吸收值（以邻苯三酚为基准）列于表1中。表1显示，
波长为254～270nm处为最强的吸收，因此选择检测波长为270nm。比较乙腈-水体积比分别为80：20、70：30、60：40、50：50的分离效果，结果显示50：50时，苯、苯酚、对苯醌、邻苯二酚、间苯二酚、对苯二酚和苯三酚的峰形都比较对称，但随着乙腈比例的增加，保留时间逐渐缩短。为了避免杂质峰的干扰，选择乙腈-水（50：50，v/v）作流动相，流速0.8 mL·min-1；检测波长270nm；色谱柱：YMC-Pack Pro C18柱，柱温40℃；进样量20μL。
表1 各组分的紫外最大吸收波长物质苯苯酚对苯醌邻苯二酚间苯二酚对苯二酚邻苯三酚1，2，4-苯三酚间苯三酚对甲酚最大吸收波长（nm）270nm处相对吸收值254 265 252 270 270 272 271 275 267 274 1.0 1.5 0.7 0.9 0.9 0.9 1.0 0.7 1.3 1.4
1.3 标准溶液的配制
标准储备液和标准工作液的配制：分别准确称取一定量的标准品固体（液体），用乙腈溶解定容配制成0.1g·L-1的标准储备液（冰箱中冷藏保存）；用乙腈稀释上述标准储备液，分别配制不同质量浓度的标准使用液。
1.4 样品前处理
将配好的标准溶液超声处理10min，使溶液充分脱气，再将标准溶液经0.22μm的滤膜进行过滤，移至容量瓶中，准备进行定量分析。
2 结果与讨论
2.1 色谱分离与定性
在反相液相色谱柱中，通常情况下强极性的样品因与流动相之间的结合力强，因此先被洗脱，极性相对较小的则后被洗脱。本文以乙腈-水（50：50，v/v）为流动相，依次对苯、苯酚、对苯醌、邻苯二酚、间苯二酚、对苯二酚和苯三酚单独进行检测，首先对单组分样品进行测试并记录其保留时间，然后将10个组分混合并加入0.1mL的内标物对甲苯酚，平行测试3次，记录各组分的平均保留时间。苯三酚因具有3个羟基，其极性在苯的氧化产物当中是最强的，因此最先被流动相洗脱，苯三酚的保留时间为Tr＝2.559min、Tr＝2.870min；苯二酚因具有2个羟基，所以极性比苯三酚弱，但比苯酚、对甲苯酚和苯都大，其保留时间在出现在苯三酚之后，苯酚和对甲苯酚之前，邻苯二酚的保留时间为Tr＝3.259min、间苯二酚的保留时间Tr＝3.523min、对苯二酚的保留时间为Tr＝4.090min；苯酚（具有1个羟基的吸电子基团）与对甲酚（同时具有1个吸电子基团和1个推电子基团）
相比，苯酚的极性大于对甲酚，所以其峰出现在对甲酚前面，苯酚和对甲酚的保留时间分别为Tr＝5.623min和6.898min，而极性最小的苯保留时间最长（Tr＝13.898min）。9种组分混合后的分离效果，如图2所示，左图为体系中存在苯三酚时的色谱分离效果图，由图可知，混合溶液中有苯三酚时，3种苯三酚的分离效果不是很好，并且影响邻苯二酚和间苯二酚的分离效果；右图为混合溶液中不存在苯三酚的色谱分离效果图，从右图可知，当体系中不存在3种苯三酚时，其它6种组分的分离效果很好。
