畜牧兽医学报, 2000 , 31( 3) , 216 - 223
A c t a V eteri n a r i a e t Zo otech n ica S i n ica
饲用金霉素对肉仔鸡免疫系统生长发育
Ξ
及免疫反应的研究
黄
张日俊1佟建民2 萨仁娜2燕3
(1 .中国农业大学动物科技学院，北京100094 ;2 .中国农业科学院畜牧所;
3 .中国农业大学基础科技学院,100094)
摘要试验用1 日龄AA 商品代肉用公雏540 只，随机分成3 组，每组180 只，分成12 个重复
(15 只/ 重复) ，其中6 个重复用作生产性能测定，另6 个重复用于测定免疫学指标。在日粮中分别
添加0 (A 组) 、50 (B 组) 、150 mg/ kg (C组) 的金霉素( C hlo rt et r acy cline , C T C) 。试验表明: ( 1) 在肉仔鸡日粮中添加150 mg/ kg C TC ，可以显著地提高肉仔鸡的增重速率和饲料转化效率( P < 0101) ，改善率分别为6143 %和5166 % ;B 组与对照组相比, 差异不显著。( 2) 随着日粮中C T C 添加量的增加，肉仔鸡胸腺、脾脏和法氏囊的萎缩程度逐渐增加。当C TC 添加量达到150 mg/ kg 时，无论前期还是后期肉仔鸡胸腺、脾脏和法氏囊的重量都明显低于对照组( P < 0105) ; 添加50 mg/ kg 的C T C 对免疫器官重量也有一定程度降低。随着饲用时间的持续, C TC 对免疫器官生长的抑制率明显提高。(3) C 组鸡外周血T2淋巴细胞对丝裂原C o n A 或P HA 的反应性以及B2淋巴细胞对丝裂原L P S 的反应性明显低于对照组( P < 0105) 。添加50 mg/ kg C TC 也会抑制T 或B 细胞的增殖。( 4) 随培养介质中C T C 浓度的逐渐增加, P H A 对T 淋巴细胞刺激的反应性逐渐降低，呈明显的负相关( R = 018295) 。
关键词肉仔鸡，金霉素，淋巴细胞，免疫器官
金霉素族抗生素包括四环素、土霉素及金霉素( C hl o r tet r acycline , C T C) ，其中C T C 是我国产量最大的抗生素之一，近40 年来被广泛用于饲料添加剂、预混料以及畜禽疾病的防治中，在保证动物生产及健康方面发挥了重要作用。在肉鸡日粮中添加10～55 mg/ kg C T C 可以改善生产性能和预防疾病，其治疗剂量是预防剂量的2～4 倍。关于C T C 对禽类免疫功能的作用效应尚无报道。但对大鼠、小鼠的研究表明，其具有免疫抑制作用。在体液免疫方面,Nikol ov 等的研究证明四环素、土霉素
及金霉素都能抑制脾脏(B 细胞的聚居点) 细胞的抗体形成，其中金霉素的抑制能力比四环素及土霉素更强。在细胞免疫方面, M a rtin 等1 和Elewiski 2 研究表明四环素能抑制白细胞的趋化性，也影响白细胞膜的功能。有研究证明四环素、强力霉素和土霉素对P HA 诱导的淋巴细胞增殖有负影响3 、4 。四环素族化合物均能抑制人淋巴细胞产生巨噬细胞移动抑制因子, 抑制免疫效应细胞介导的迟发超敏反应5 、6 。本研究旨在探明C TC 对肉仔鸡生产性能、免疫系统发育以及细胞免疫功能和体液免疫功能的影响，这有助于进一步了解C T C 对机体免疫系统的功效，并为安全、经济、科学地使用抗生素提供理论依据。
Ξ 国家“九五”重点攻关项目(960090) 资助。
3 3 收稿日期1998208215 。
材料与方法
1 111 试验设计
11111 分组及饲养 : 试验用 1 日龄 AA 商品代肉用公雏 540 只 ，随机分成 3 组 ，每组 180 只 ,
分成 12 个重复组 ，每个重复 15 只鸡 。为消除由于采样对生产性能的影响 ，其中 6 个重复用于 采样分析 ,6 个重复用于生产性能的测定 。在日粮中分别添加 0 ( A 组) ,50 (B 组) ,150 mg/ kg
标志607
( C 组) 的金霉素 (有效成分 9818 %) ，分层笼养 ，常规饲养 ，基础日粮见表 1 。每千克日粮 ( 前后
期) 添加铜 11 mg , 碘 0144 mg , 铁 110 mg , 锰 100 mg , 硒 0125 mg , 锌 120 mg , 钴 0140 m g , VA 8800 IU , VD3300 IU V E2215 mg , V K 3 118 mg , 生物素 012 mg , 叶 酸 110 mg , 尼 克 酸 50 mg ，泛酸 11 mg ，核黄素 616 mg ，硫胺素 310 mg ，吡哆醇 414 mg ,VB 12 0102 mg ，胆碱 1300 mg (前期) 和 1000 mg (后期) 。
表 1 肉仔鸡日粮配方及营养水平
T a b le 1 T he f o rmulation an d the nutrient lev els of diet in broiler
% 11112 预防免疫 :1 日龄胫部皮下注射马立克冻干疫苗 ( H T V 株 , SOL VA Y 公司) 012 ml/ 只 ,
滴鼻点眼传染性法氏囊疫苗 ( M B 株 , 以色列 AB I C 公司) 各 1 滴 ; 7 日龄接种新城疫冻干苗
(cl o ne 230 , I N T ERV E T 公司) 点眼 、滴鼻各 1 滴 。14 日龄时用新城疫和传染性支气管炎二联
苗滴鼻点眼各 1 滴 。
112 检测指标和测定方法
11211 生产性能 ：每周末称重 、称料 ，计算组平均体重 、料重比 、改善效率 ( %) = ( 对照组料重
比 - 处理组料重比) / 对照组料重比 ×100 % 。
11212 免疫器官重量 : 分别于 21 日龄和 49 日龄 ，每组取 12 只鸡 ，心脏采血后剖杀 ，摘取脾 脏 、法氏囊以及左侧胸腺 ，剔除脂肪后称鲜重 ，计算免疫器官绝对重量以及胸腺指数 、脾脏指 数 、法氏囊指数 ，以免疫器官鲜重 ( g ) 占每千克体重表示 ( g / kg ) ；并计算免疫器官的生长抑制率
( %) = (对照组重 - 处理组重) / 对照组重 ×100 % 。
11213 T 或 B 淋巴细胞免疫功能测定 ：为了克服3
H 2TdR 掺入法带来的同位素污染和核辐射 问题以及形态学法的人为误差 ，本研究从国外引进了一种最新的监测方法 ，称 BrdU 2EL ISA 即 在淋巴细胞培养体系中加入促有丝分裂原 (又称丝裂原或刺激原) ，通过定量测定 BrdU ( 52溴2
0～3 周 4～7 周
饲料 Feedst u ff s Weeks Weeks 0～3 周
4～7 周 营养水平 Nut r ient levels Weeks
Weeks
玉米 Co r n 60181 64100 豆粕 S o ybean meal 28100 26190 鱼粉 Fishmeal 3100 2100 棉粕 Co t t o n ed meal 2100 — 石粉 S to n e meal 1126 1100 大豆油 S o ybean oil 2100 3100 蛋氨酸 Met hio nine 0117 0112 赖氨酸 L ysine 0106 0103 磷酸氢钙 C a HPO 4 ·2 H 2 O 1140 1165 食盐 S alt 0130 0103 复合预混料 Premix 1100 1100
代谢能 ,M E ( M J / kg ) 12168 13110
粗蛋白 CP 21104 19152 钙 C alcium 1100 0190 有效磷 Av. p h o sp h o rus 0151 0145 赖氨酸 L y sine 1109 1105 蛋氨酸 Met hio nine 0145 0136 蛋 + 胱 M E T + C YS 0185 0178 食盐 S alt 0137 0135
218
畜 牧 兽 医 学 报 31 卷
2′2脱氧尿嘧啶) 掺入到细胞增殖 (复制) 时新合成的 DNA 中的数量 ，来检查淋巴细胞的分裂情 况或活性 。试验用德国“细胞增殖 BrdU 2EL ISA ”试剂盒测定 ，用刀豆素 ( C o n A ) 和植物血凝素 ( P H A) 作为 T 淋巴细胞的刺激原 ，脂多糖 (L PS) 作为 B 淋巴细胞的刺激原 。
在 7 周龄时 ，从每组随机选 12 只鸡 ，在无菌状态下进行如下操作 。心脏采血 3～4 ml ，肝 素抗凝 (25 单位/ ml 血) 。用比重为 11063 的无菌 Percoll 细胞分离液分离外周血淋巴细胞 。
用灭菌 Hank ’s 平衡液洗涤 2 次 ，第 3 次用完全 R PM I 1640 细胞培养液 (分别含青霉素 100 单 位和链霉素 100 mg/ ml ,10 %的灭活犊牛血清) 洗涤离心 ，弃上清 ，加入完全 R PM I 1640 培养液 2 ml ，混匀 ，盖上灭菌橡胶塞 。然后用血球计数板在显微镜下计数活的淋巴细胞 ，将细胞浓度 调整到 1 ×106 个/ ml ,4 ℃贮存备用 。用完全 R PM I1640 培养液 ( 含双抗) 配制丝裂原 , C o n A 浓度为 45μg/ ml ,L PS 浓度为 25μg/ ml , P H A 浓度为 120μg/ ml 。用 96 孔组织细胞培养板 (平
底) 培养细胞 ，每种刺激原各做 3 个平行样 ，同时作空白对照和特异性对照 。以下步骤按试剂 盒要求进行 。培养结束后 ，用 MC 2318 型酶联检测仪测定 450 n m 波长处的吸光度 ( AB S ) 。以 每孔 AB S 减去空白孔 AB S 表示淋巴细胞转化率 ，求出每样 3 个重复的平均值代表该样的淋巴 细胞转化率 ，计算 T 或 B 细胞增殖抑制率 。
11214 C T C 对淋巴细胞的直接效应 : 用完全 R PM I 1640 液配制含金霉素 0 ,18175 ,3715 ,75 , 15
0 ,300 μg/ ml 的培养液 ，以 P HA (120 μg/ ml ) 作丝裂原 ，用对照组鸡外周血淋巴细胞进行培 养 ，作 3 个平行样 ，依上述方法培养淋巴细胞和测定 。
试验结果
2 211 不同金霉素添加水平下肉仔鸡的生产性能
表 2 不同日龄时肉鸡体重
T a b le 2 T he body w e ight a t the diff e rent d ay o f ag e g , %
促生长效率
The efficiency of t h e gro wt h p r o m o ting
添加水平
C T C levels
21 日龄 ( d ) 35 日龄 ( d ) 49 日龄 ( d ) 566165 ±21167B
588125 ±8154A B
607187 ±221
87A 1330110 ±34126B
1389128 ±49176A B
1423136 ±411
00A 2191106 ±32122B
俯卧登山2245159 ±89187A B
2331191 ±641
98A
A (0 mg/ kg )
B (50 mg/ kg )
C (150 mg/ kg )
—
2149 6143
注 ：促生长效率 ( %) = (处理组体重 - 对照组体重) / 对照组体重 ×100
Not e : T he efficiency of t h e gro wt h p r o m o ting ( %) = (B W Treat gr oup - B W Cont r ol gr oup ) / B W Cont r ol gr oup 3 100 .
表 3 不同日龄时肉仔鸡的饲料效率
T a b le 3 T he f e ed eff i ciency a t the diff e rent day of ag e in broiler chicken( F eed/ Bod y w e ight , F / BW)
组
饲料效率提高 ( %)
21 日龄 ( d ) 35 日龄 ( d ) 49 日龄 ( d ) G
ro u p Imp r o vement o f
f e ed e fficiency
1161 ±0105 a
1159 ±01
05 a
1153 ±0107 a
1189 ±0112 a
1183 ±01
11 ab
1175 ±0112 b
2112 ±0109 A
2105 ±01
09 A B
2100 ±0106 B
A B
C
—
3130 5166
注 ：同列数字右肩标有不同字母的表示差异显著 ( A 、B 和 C 间 , P < 0101 ; a 、b 和 c 间 , P < 0105) , 下同 。
212 不同日龄时免疫器官绝对重量及其指数
表4 免疫器官绝对重
T a b le 4T he f r esh w eight( FW) o f immune organs g , %
组G ro u p
21 日龄
Fresh weight
生长抑制率
Inhib ito ry rat e of gro wt h
49 日龄
Fresh weight
生长抑制率
Inhib ito ry rat e of gro wt h 1148 ±0122a
1132 ±0119ab
1116 ±0109b
0181 ±0105a
0168 ±0105b
有为有不为0162 ±0111b
1186 ±0124a
1152 ±0116b
1136 ±0123c
微信服务号申请
4152 ±0117a
3183 ±0146b
3134 ±0136b
4134 ±0158a
3161 ±0148a
3129 ±0135b
1169 ±0123a无线网卡安装
1134 ±0126b
1120 ±0110b
A B C A B C A B C
胸腺
Thymus
—
4194
14181
16105
23146
—
18128
26188
—
15126
26111
—
16182
24119
—
20171
28199
脾脏
S pleen
法氏囊
Fabricius
表5 免疫器官指数
T a b le 5 T he in d ex of immune organs g/ kg B W 胸腺指数脾脏指数法氏囊指数
组G ro u p
Index of t h ymus Index of spleen Index of f a bricius bur sa 21d 49d 21d 49d 21d 49d 2120 ±0126a
1198 ±0129ab
1168 ±0124b
1197 ±0114a
1154 ±0120b
1136 ±0114b
1122 ±0106a
1102 ±0110b
0190 ±0116b
1191 ±0131a
1145 ±0119b
1141 ±0112b
2182 ±0138a
2126 ±0124b
1180 ±0122b
0176 ±0121a
0154 ±0110b
0149 ±0103b
A
B
C
213 不同金霉素添加水平下免疫参数的变化
表6 T或 B 淋巴细胞对丝裂原刺激的反应性及CT C 的抑制率
T a b le 6 T he respon o f T or B cell to the diff e rent mito g ens an d
the inhibitory rate o f CT C on cells prol i f e r a tion
带七的成语细胞免疫C ell imm unit y 体液免疫Humo ral imm unity 分组
C o n A 刺激T 细胞的反应性对T 细胞增
殖的抑
制率( %)
P H A 刺
激T 细胞的
反应性
对T 细胞
增殖的抑
制率( %)
L PS 刺
激B 细胞的
反应性
对T 细胞
增殖的抑
制率( %)
G ro u p
11017 ±0116a 01817 ±0114b 01754 ±0113b 01839 ±0112a
01737 ±0123b
01610 ±0114b
01863 ±0110a
01761 ±0128b
01703 ±0112b
A B C
—
19190
25186
—
12116
27129
—
11182
18154
T 或B 细胞增殖的抑制率( %) = (对照组淋转率- 处理组淋转率) / 对照组淋转率3 1001 Inhib ito ry rat e of C T C o n p r olif eratio n(%) = (AB S c ont r ol - AB S Treat ) / AB S c ont r ol 3 1001
214 CT C2RPM I1640 培养介质中T 细胞对P H A 刺激的反应性
220 畜牧兽医学报31 卷
表7 CT C2RPMI1640 介质中T 细胞对P H A 刺激的反应性
T he respon of T cell in CT C2RPMI1640 culture medium to mitog en P H A T a b le 7
C T C 浓度(μg/ ml) C T C co n cent r atio n
C T C 对T 细胞增殖的抑制率( %)
Inhib ito ry rat e of C T C o n T cell p r olif eratio n P H A (120 μg/ ml)
0100 18175 3715 7510 15010 30010 11051 ±0113
01793 ±0110
01605 ±0103
01249 ±0112
01164 ±0103
01164 ±0103
—
24156
42145
76127
84143
93156
讨论
3
311 日粮中不同的金霉素添加水平对肉仔鸡生产性能的影响
统计分析表明(见表2) ,21 、35 和49 日龄时, C 组鸡( 150 mg/ kg) 平均体重明显高于对照组(A 组,0 mg/ kg) ，差异极显著( P < 0101) ;B 组鸡( 50 mg/ kg) 体重也高于对照组，但差异不显著( P > 0101) 。49 日龄时，在日粮中添加150 mg/ kg C TC 的促生长效率为6143 % ，添加50 mg/ kg C TC 的促生长效率为2149 % 。从表3 看出,21 日龄时在日粮中添加不同的C TC ，并没能明显改善饲料转化效率；在35 日龄时 C 组的饲料转化效率明显高于对照组( P < 0105) ，而B 组和C 组差异不显著；在49 日龄时, C 组的饲料转化效率极显著高于对照组( P < 0101) ,B 组的饲料转化效率比对照组提高2149 % ,C 组比对照组提高6143 % 。这与其它学者的报道基本一致。李复兴等7 综述，给4 周龄肉仔鸡饲喂四环素类药物，平均日增重提高713 % (试验174 次) ，饲料利用率提高5109 % (试验106 次) 。还有报道指出，在肉仔鸡日粮中添加35 mg/ kg C T C 可提高生长速度616 % ，提高饲料利用率619 % 。
人教版312 免疫器官的绝对重量( g) 及免疫器官指数( g/ kg 体重)
井冈山旅游31211 C T C 对胸腺发育的抑制作用：表4 、表5 表明，在日粮中分别添加50 或150 mg/ kg 的C T C ，在21 日龄时对胸腺生长的抑制率分别为4194 %和14181 % ,49 日龄时的抑制率分别为15126 %和26111 % 。在不同日龄, C 组鸡的胸腺重量明显低于对照组( P < 0105) 。表5 还表明，胸腺指数也有相同的趋势。上述结果表明，随着日粮中金霉素添加量的增加，胸腺生长受到抑制的程度越大，且随着饲用日龄的延长，胸腺受到抑制的程度也越大。根据结构功能原理，当免疫器官发育受到抑制时，其免疫功能也会受到损伤8 。
31212 C T C 对脾脏发育的影响(见表4 、表5) ：在49 和21 日龄时, C组脾脏重量和脾脏指数均与对照组存在显著差异( P < 0105) ,B 组与A 组差异不显著( P > 0105) 。前3 周，金霉素对B 组和C 组鸡脾脏生长的抑制率分别为16105 %和23146 % ，后期分别为16182 %和24119 % 。说明随着日粮中添加金霉素量的增加和饲用时间的持续，脾脏发育受到抑制的程度亦愈大。31213 C TC 对法氏囊发育的影响：由于试验鸡在1 日龄接种了法氏囊弱毒苗，这会导致法氏囊逐渐萎缩。统计结果( 见表4 、表5 ) 表明, 前( 后) 期B 组和C 组法氏囊的萎缩率分别为18128 % (20171 %) 和26188 % (28199 %) ,C 组与A 组相比差异显著( P < 0105) 。B 组和C组鸡在21 和49 日龄时，法氏囊指数均显著低于对照组( P < 0105) 。这表明，日粮中高剂量金霉素的添加促进了法氏囊萎缩的速度。
