高效液相色谱法同时测定饮料中的9种食品添加剂
作者：廊坊师范学院化学系2005届毕业生 祁楠
指导教师：***
摘要:研究了等梯度高效液相色谱法直接测定饮料中的防腐剂、甜味剂、色素的方法。采用C18展板制作柱以甲醇—乙酸氨（L)—溴化四丁铵L),pH 为流动相,紫外检测波长为230nm,可在15分钟内将山梨酸、苯甲酸、糖精、VC、咖啡因、日落黄、柠檬黄、胭脂红、苋菜红完全分离。
关键词：高效液相色谱、山梨酸、苯甲酸、糖精、VC、咖啡因、日落黄、柠檬黄、胭脂红、苋菜红
前言：高效液相色谱(HPLC)是上世纪60年代末70年代初,发展起来的一种新型分析分离技术,它是在经典液相色谱法的基础上，引入了气相色谱的理论，采用高压输送流动相和高灵敏度检测器,发展而成的现代化液相色谱分析方法, 具有分离效率高、 选择性好、 分析速度快、 检测灵敏度高、操作自动化和应用范围广等特点。
近年来，由于消费者对于食品的安全性日益的关注，食品中的各种添加剂越来越受到人们 的 重视。 食品添加剂指为改善食品品质和 色、香、味，而加入食品中的化学合成或天然物质，但在目前所使用的添加剂中，绝大多数为化学合成添加剂，它们是通过氧化、还原、缩合等一系列化学合成反应所得，有的具有一定毒性，有的在食品中起变态反应或转化成其它有毒物质。通过动物实验证明有些物质有致癌、致畸形等作用，如果不加以限制使用，将对人体健康产生危害。
高效液相色谱具备分离效果好、灵敏度高和重现性好等优点,因此是目前食品添加剂定性、定量分析的首选方法,本实验采用甲醇—乙酸氨 L)—溴化四丁铵L)（ 35：65：4，）为流动相,能将食品中的食用色素、防腐剂、甜味剂、抗氧化剂、兴奋剂完全分离。
1.实验部分
仪器与试剂
ACS2000高效毛细管电泳仪液相色谱一体机(北京彩陆科学仪器公司)、紫外可见光检测器(UV DETECTOR VK-2051)、PHS-2F数字pH计（上海精密科学仪器有限公司）、双频超
声清洗机型号SK8200LH(上海科导超声仪器有限公司)、氨水溶液(分析纯氨水：原子水=1：9)、醋酸溶液(分析纯醋酸：原子水=1：9)
标准储备液： VC、胭脂红、柠檬黄、日落黄、苋菜红 均为L、苯甲酸、山梨酸 均为5mmol\L，咖啡因L
标准混合液：取各组分标准储备液各1ml，混合均匀后备用。
样品处理
选择市售饮料三种（科力福、醒目、非常甜橙）充分混匀后用虹吸法分层取样，每层各取50ml左右，装入小口瓶中混和均匀后超声波除气15min，用1：9氨水调节pH ,经μm水相滤膜过滤后，备用。科力福:取原样品液用原子水稀释5倍后，进行以上操作。
1.3色谱条件
C18柱颗粒度10um、柱温16摄氏度、检测波长230nm、流动相甲醇—乙酸氨（L）—溴化四丁铵L)配比35:65:4 ，pH ，流速min，微量进样器定量进样20μl,实验以保留时间定性，外表物法定量。
2结果与讨论
2..1检测波长选择
用紫外—可见光分光光度计检测器,检测9种物质发现其在200nm—300nm范围内敏感波长分别为
山梨酸 | 糖精 | 咖啡因 | 苯甲酸 | 胭脂红新型城镇化 | 苋菜红 | 柠檬黄 | 手写遗嘱格式范本VC | 日落黄 |
260nm | 202nm | 梦想拼音 206，273nm | 229nm | 215nm | 216nm | 257nm | 262nm | 考试没考好的反思234nm |
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导师意见兼顾九种组分在200nm—炒宽粉的做法300nm的紫外吸收值,选择230nm为检测波长。
2..2 流动相选择
实验:以甲醇—乙酸氨作为流动相[1]对[组分进行分离,如图：
（1）甲醇—乙酸氨L =30：70
图1添加剂组分拟合图
胭脂红和苯甲酸分离不开，且六种组分（VC、柠檬黄、日落黄、胭脂红、山梨酸、苯甲酸）出峰时间集中在范围内，不易于最终分离测定。
（2）甲醇—乙酸氨L=40：60
图2添加剂组分拟合图
柠檬黄与苋菜红，出峰重叠；胭脂红与日落黄，出峰重叠，分离效果不好，且组分峰比较集中，不易分离测定。
（3）甲醇—乙酸氨L =44：56
图3添加剂组分拟合图
柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄四种物质出峰重叠；苯甲酸、山梨酸出峰干扰，且各
组分出峰时间相对集中，不易于最终分离测定。
结论：由以上三个图形显示，最佳流动相配比，介于甲醇—乙酸氨L [30：70]至甲醇几个月添加辅食—乙酸氨L [40：60]中间的一个配比，经实验摸索最终选择 甲醇—乙酸氨L[35：65]为最佳配比。
