高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生素D2和维生素D3的含量
：墨:oliTraditionalChineMedicalUniversity2007,voI.10No.2
图3金花茶叶乙醇液二阶导数光谱图
图4金花茶叶氯仿液零阶光谱图
图5金花茶叶氯仿液一阶导数光谱图
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图6金花茶叶氯仿液二阶导数光谱图
3讨论
3.1在可见紫外鉴别中，金花茶叶可供鉴别的特征峰较多,
特别是其氯仿提取液在可见光区和紫外光区特征峰更明显.
在乙醇液零阶光谱图中，在243,276,663121TI波长处有明显
的吸收，其中243nm为最大吸收峰,276为肩峰；叶的氯仿液
零阶光谱图在246,416,458,668nm波长处有明显吸收峰.
其中416啪为最大吸收峰，这些特征均具有一定的鉴别意
义.
3.2在一阶，二阶导数光谱图中，金花茶叶的乙醇液在200
～
32Onto和650～70Ohm；氯仿液在200～3o0啪,400～
500nm和600--700nm中均有鉴别特征.整个光谱曲线均具
有鉴别意义.
3.3金花茶是我国一级保护的珍稀物种，不仅具有较高的
观赏价值，而且具有一定的营养价值和药用价值.本研究可
为金花茶叶药材的鉴定提供依据.
参考文献
[1]中国科学院.中国植物志[M].北京：科学出版社,
1998.49.
[2]梁盛业.金花茶[M].北京：中国林业出版社,
1993.123.
(编辑陈明伟)
高效液相色谱法同时测定钙镁D片中
维生素D2和维生素D3的含量'
梁晓艳
(广西中医学院附属瑞康医院，广西南宁530011)
大纸箱
摘要:[目的]建立反相高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生素D2和维生素D3的含量.[方法]采用KromasilCl8
反相色谱分离柱，流动相为甲醇-乙腈(90:10)，检测波长为265nm，流速为0.8rnl/min，加入维生素A和维生素E进行干扰试
验.[结果]维生素,03在0.5～lOOmg/L浓度范围内线性关系良好，维生素平均加样回收率98.9%～108.4%,RSD
收稿日期:2006—09—20
2007年第10卷第2期广西中医学院?59?
2.22%--4.28%；维生素A和维生素E不干扰测定.【结论]本方法简单，易于操作，分离效果好，结果准确，受干扰因素小，适
宜测定片剂中的维生素D2和维生素D3.
关键词：维生素D2；维生素D3；高效液相色谱法；钙镁D片
中图分类号:R917文献标识码:A文章编号:1008—7486(2007)02—0058—04
脂溶性维生素D是人体必需的营养素，其主要形式是维
生素D3(Ch)lecaldferol，胆骨化醇)和维生素132(~dferol，骨
化醇)，分别来源于动物和植物，结构相似，功能相近.维生
素D能够维持血钙水平稳定，调节钙磷代谢，维持骨骼的正
常钙化，肌肉收缩，神经传导和所有细胞的正常功能，还有免不幸福
疫调节作用，增强机体对感染的反应；主要用于预防和治疗
骨质疏松症，以及预防癌症，多囊性卵巢综合征，牛皮癣，糖
尿病等疾病[.由于维生素D2和D3的结构相似，色谱行为
相近，对其有效分离和定量具有一定难度，因此同时测定药品中两种维生素D的报道尚不多见_2q].本文建立了反相
高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生素D2和D3的含量，结果满意，现报道如下.
1实验材料
1.1仪器Agilem1100高效液相色谱仪(美国安捷伦公
司)，紫外检测器，自动进样器(安捷伦公司);HS20500D超
声波清洗器(BENCHTOP)；离心机(上海安亭科学仪器厂). 1.2药品与试剂钙镁D片(市售品)；维生素D2,D3对照
品(购自Sigma公司，含量>99.0%)；水为超纯水；甲醇，乙
腈(色谱纯).
2实验方法
2.1对照品溶液的制备
混合对照品贮备液分别精密称取维生素D2,D3对照
品各0.1g，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制得浓度为lmg/ml的混合对照品贮备溶液.贮存至
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4℃条件下.
混合对照品溶液精密吸取混合对照品贮备液5ml，置
于50ml量瓶中，用流动相定容至刻度，制得浓度为0.1mg/ rnJ的混合对照品溶液.
2.2供试品溶液的制备取样品10片，研细，混匀.取1g,
精密称定，置lOml具塞比色管中，加流动相8ml，摇匀，超声
提取20mln，加流动相定容至刻度，摇匀，转移至离心管，置离心机中以4000r/rnln离心5min.吸取上清液，经0,45tan滤
膜过滤，取续滤液作为供试品溶液.
2.3对照品溶液的纯度校正由于维生素D2和对光不
稳定，因此在配制对照品溶液之前需用紫外分光光度法进行纯度校正.具体方法参照中国药典l-8J.
阴阳师赤舌哪里多2.4色谱条件色谱柱:KromasilC18柱(4.6×150mm,
3/zrn)；流动相：甲醇一乙腈(90:10)；流速:0.8ml/mln；检测波长:265nm；柱温:25℃；进样量:10.
2.5线性关系考察分别精密吸取混合对照品溶液0.25,
1.0,5.0,10.0,25.Oml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，进样.以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标
准曲线.得回归方程:=32.756C一1.4072,r=0.99996.
An:33.599C一1.1979,r=0.99996.结果表明维生素D2,j
在0.5～100mg/L浓度范围内均有良好的线性关系.
检测限按3倍空白噪声计算.维生素D2,D3的检出限
均为0.3ng，若称样1g，最低检出浓度为0.3~g/g.按信噪比(S/N)为10时，最低定量浓度为1.O~g/g.
小定2.6系统适用性试验精密吸取供试品，混合对照品溶液
各10，按2.4项色谱条件进样测定，色谱图见图1.结果表
明供试品在混合对照品色谱图相应位置上有相同保留时间的色谱峰.且被测成分与相邻杂质峰分离良好.
2.7干扰试验在维生素D2,D3的混合对照品溶液中加入
维生素A,a,B,，占四种维生素E和维生素E醋酸酯的对照品，在上述色谱条件下分离，色谱图见图2.从图2中可以看出，维生素A,E,D2,D3都得到很好的分离，维生素A,E不干扰维生素D2，的测定.
2.8精密度试验对同一份供试品溶液，连续进样测定6
次，结果维生素D2,D3峰面积RSD分别为1.05%和1.17%.
2.9重复性试验精密称取同一批供试品6份，按供试品
溶液制备方法制备，依法测定，结果维生素平均含量
0.1013mg/~,RSD为1.64%.维生素D3平均含量<
0.0003mg/片.
2.10稳定性试验对同一供试品溶液，在棕色瓶中和室温
下放置Oh,lh,2h,4h,6h,8h，分别进样测定峰面积，结果
维生素D2峰面积的RSD为2.08%(,z=6)，维生素D3峰面
积的RSD为2.26%(,z=6)，表明供试品溶液在8h内有良好
的稳定性.永远造句
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2.11加样回收率试验精密称取已测知含量的样品1g于
10ml具塞刻度管中，分别精密加入维生素D2对照品适量,
分高，中，低三种浓度加标，按"供试品溶液制备方法"项下操
作，进样测定含量，计算加样回收率.每个浓度均平行试验6
次.结果见表1.
表1维生素D2加样回收率试验结果
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VWDIA.Wavelength265nm(VITD6213/H/ST3.D)占'
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