福建畜牧兽医第43卷第6期2021年
猪源性肺炎克雷伯菌对喹诺酮类抗生素
耐药机制研究
郑静铃漳州市云霄县东厦镇畜牧兽医站福建漳州363300
摘要为探究猪源性肺炎克雷伯菌对喹诺酮类药物耐药机制袁对20株猪场来源的喹诺酮类抗生素耐药的肺炎克雷伯菌采用PC R法检测其gyr A/B和par C/E基因以及质粒上aac(6')-I b尧qnr S尧oqxA尧oqxB基因携带情况遥对gyr A/B和par C/E基因的目的条带产物测序袁并将测序结果与N C B I上下载的基因序列进行比对袁采用SnapG ene3.2.1软件进行分析遥结果检测出8株菌gyr A 基因突变袁其中gyr A83位丝氨酸突变检出率为40%尧gyr A87位突变检出率为25%曰12株gyr A未突变株中袁检测出9株菌分别携带数种质粒介导的喹诺酮类抗性基因遥说明gyr A突变是肺炎克雷伯菌产生喹诺酮类耐药的重要机制袁并且质粒介导的喹诺酮类抗性基因在单独作用时也能使肺炎克雷伯菌产生不同程度耐药遥
关键词肺炎克雷伯菌突变喹诺酮
文献标识码院A文章编号院1003-4331渊2021冤06-0014-02
St udy on t he res i st ance m echani sm of sw i ne-deri ved K l ebsi el l a pneum oni ae t o qui nol one ant i bi ot i cs
Zheng J i ngl i ng
(A ni m alH usbandr y and V et er i nar y St at i on ofZhangzhou Ci t y Y unxi ao Count y D ongxi a Town,Fuj i an363300)
A bst ract To expl or e t he r esi st ance m echani sm of swi ne-der i ved K l ebs i el l a pneum oni ae t o qui nol ones.20s t r ai ns of K l ebsi el l a pneu鄄m oni ae r es i st antt o qui nol one ant i bi ot i cs f r om pi g f ar m s wer e det ect ed by PCR t o det ectt hei r gyr A/
B and par C/E genes and t he aac(6') -I b,qnr S,oqxA,oqxB on t he pl asm i d G ene car r yi ng st at us.The t ar get band pr oduct s of gyr A/B and par C/E genes wer e quenced, and t he quenci ng r esul t s wer e com par ed wi t h t he gene quences downl oaded on N CBI,and SnapG ene3.2.1sof t war e was ud f or anal ysi s.8st r ai ns ofgyr A gene m ut at i ons wer e det ect ed.A m ong t hem,t he det ect i on r at e ofgyr A83r i ne m ut at i on was40%,and t he gyr A87m ut at i on det ect i on r at e was25%.A m ong t he12gyr A unm ut at ed st r ai ns,9st r ai ns wer e det ect ed t o car r y s ever al speci es. Pl asm i d-m edi at ed qui nol one r es i st ance genes.I t s hows t hat g
yr A m ut at i on i s an i m por t ant m echani sm f or K l ebs i el l a pneum oni ae t o pr oduce qui nol one r esi st ance,and pl asm i d-m edi at ed qui nol one r esi s t ance genes can al so cau K l ebsi el l a pneum oni ae t o pr oduce di f鄄f er entdegr ees ofr esi st ance when act i ng al one.
K ey w ords K l ebsi el l a pneum oni ae M ut at i on Q ui nol one
肺炎克雷伯菌是重要的人畜共患条件致病菌袁被认为是抗生素耐药性传播的关键[1-3]遥喹诺酮类抗生素是养殖上运用广泛的一类抗菌药物[4]遥由于过度使用袁对喹诺酮类抗生素耐药的肺炎克雷伯菌不断增加[3]遥本研究通过分离规模化养猪场尧大型农贸市场以及农贸市场周边社区的肺炎克雷伯菌袁了解喹诺酮类抗生素耐药现状袁并进一步检测喹诺酮类抗生素耐药基因袁旨在探讨猪源性肺炎克雷伯菌在喹诺酮类抗生素的耐药表型与耐药基因型的相关性袁为养猪业临床了解肺炎克雷伯菌耐药性的发生及传播提供理论依据遥
1材料与方法
1.1试验材料20株喹诺酮类抗生素耐药的肺炎克雷伯菌袁均分离自福建省内规模化猪场遥
1.2试验方法
1.2.1PCR鉴定与扩增用PCR法筛查20株喹诺酮类抗生素耐药的肺炎克雷伯菌耐药基因携带情况[5-6]
遥检测基因分别为质粒介导的qnr S基因袁aac (6')-I b基因和oqxA/B外排系统[7]袁以及由染色体介导的gyr A/B和par C/E基因[8]遥
1.2.2测序及序列分析对携带gyr A/B和par C/E 基因的菌株袁取有目的条带的PCR产物外送测序遥于N CBI上下载gyr A/B和par C/E基因序列袁采用SnapG ene3.2.1软件对基因突变位点进行分析[9]遥2结果与分析
2.1PC R鉴定结果用特异性引物对喹诺酮类耐药的肺炎克雷伯菌进行gyr A/B尧par C/E尧qnr S尧aac(6') -I b和oqxA/B的PCR鉴定遥本试验检测出gyr A突变袁而未测到gyr B尧par E和par C突变遥gyr A扩增出814bp的条带袁分离率40.0%渊8/20冤曰qnr S扩增出492bp的条带袁分离率35%渊7/20冤曰aac(6')-I b扩增出481bp的条带袁分离率30%渊6/20冤曰oqxA/B扩增出310bp和513bp的条带袁分离率分别为45%渊9/ 20冤尧40%渊8/20冤遥
2.2gyr A/B和par C/E基因序列突变分析gyr A83位丝氨酸突变检出率为40%渊8/20冤袁其中gyr A83位
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福建畜牧兽医第43卷第6期2021年
丝氨酸突变成为了亮氨酸尧异亮氨酸和酪氨酸袁检出率分别为30%渊6/20冤尧5%渊1/20冤和5%渊1/20冤遥gy鄄r A87位天冬氨酸的突变检出率25%渊5/20冤袁分别突变为天冬酰胺和丙氨酸袁检出率分别为20%渊4/20冤和5%渊1/20冤袁见表1遥说明gyr A突变是肺炎克雷伯菌产生喹诺酮类耐药的重要机制遥
国际象棋开局2.3质粒介导的喹诺酮类耐药基因检出情况在12株未发生gyr A突变的喹诺酮类抗生素耐药肺炎克雷伯菌中袁检测出9株菌分别携带数种质粒介导的喹诺酮类耐药基因遥aac(6')-I b检出率为50%渊6/ 12冤袁qnr S检出率为58%渊7/12冤袁oqxA/B检出率分别为75%渊9/12冤和67%渊8/12冤袁见表2遥说明质粒介导的喹诺酮类抗性基因在单独作用时也能使细菌产生高水平耐药遥
3结论
规模化养猪场尧农贸市场以及农贸市场周边社区构成了肺炎克雷伯菌传播链袁在该传播链中分离的肺炎克雷伯菌都是与猪场相关联的[10]遥猪源性肺炎克雷伯菌对喹诺酮类抗生素耐药的主因是由染色体介导的gyr A基因突变所致遥未发生gyr A突变的耐药菌检出携带质粒介导的喹诺酮类耐药基因袁说明质粒介导的喹诺酮类耐药基因作用于菌株时也能产生不同程度耐药遥
参考文献院
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21.
表1gyr A/B和par C/E基因序列突变情况
基因序列突变
菌株编号检出率
渊%冤123456~8910~1314151617~20
gyr A83Ser寅I l e gyr A83Ser寅Tyr
gyr A83Ser寅Leu gyr A87A sp寅A l a gyr A87A sp寅A sn 姨
姨
姨姨
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5
5
30
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耐药基因
菌株编号检出率
渊%冤1~7891011121314~1617181920
A ac渊6'冤-I b
qnr S
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姨无奈的近义词
姨
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67表2质粒介导的喹诺酮类耐药基因检出情况
敬告院作者在撰写论文时应本着实事求是尧科学严谨尧尊重他人知识产权的精神袁适当参考尧引用已公开发表的相关文献资料袁但不可抄袭遥本刊将用野学术不端文献检测系统冶对所有来稿进行检测尧分析袁反对并打击学术不端行为遥
渊本刊编辑部冤15
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