・410・
辅助生育技术的研究进展
王树玉 任国庆
北京医学 2002年第 24花语图片卷第 6期
1978年在英国第 1例试管婴儿的问世 ,为辅助生育技
术树立了新的里程碑。20世纪 80年代主要以解决女性不
母体的影响 ;移植囊胚比早期胚胎更接近生殖生理的自然环
境 ;用纸折枪减少移植胚胎的数量 ,降低多胎率 ;为人胚胎干细胞技术
研究提供细胞来源。囊胚培养和移植成功 ,不但提高了种植
治疗男性不育使用胞浆内单精子注射技术 ;分子生物学技术率和妊娠率 ,也为其他新技术的发展奠定了基础。
的发展结合显微操作基础 ,发展为胚胎植入前诊断技术。近四、助孵化技术 (AH)在 IV F中的应用
年来核移植技术的不断发展 ,将成为此领域新的突破。应用辅助孵化使透明带失去完整性 ,有助于使自然孵化
一、母细胞内单精子注射 ( ICSI)困难的胚胎在囊胚完全扩张期顺利孵出 ,完成植入子宫内膜
ICSI技术为选择优质精子注入减数分裂中期 ( M 2 )成熟的过程。该技术是 IV F领域中的又鲁滨逊漂流记读后感600字
一新技术 [ 9 ,10 ]。AH指
卵母细胞中 ,为男性不育及受精障碍患者的治疗开辟了新途征 :①高龄妇女 :年龄增高时往往卵子质量较差 ,胚胎透明带
[1 ]
[2 ]
[3 ]
胚胎透明带变硬、失去弹性 ,导致孵出困难 ;⑥基础 FSH水平
升高者 ,提示卵巢功能较差 ,卵子的透明带可出现异常 ,往往
需做 AH。AH方法 :一般 AH在第 3天胚胎期进行 ,因此时
胚胎处于细胞分裂期 ,分裂球与透明带之间有明显的间隙 ,
且未融合 ,此时不容易损伤胚胎。主要方法有机械法、化学
酸化法、消化法及激光法。机械法对技术要求较高 ,须短
[4 ]时间内操作 ,并且易损伤胚胎组织 ;采用蛋白酶 ( prona E)
可以消化透明带使其变薄 ,对第 2～5日的胚胎辅助孵化 ;化
为大多数学者所接受 ,对受精后第 3日 6～8细胞阶段的卵
液对分裂中期胚胎细胞的纺锤丝有毒害作用而使其应用受
到限制 ;激光法操作时间短 ,定位准确 ,消除部分透明带使其
变薄 ,对胚胎无损伤 ,但仪器昂贵 ,推广有一定困难。
的几率是有限的。
有关 IVM研究是生殖医学领域的又一热点。在 IV F
中 ,卵子的成熟度直接关系到受精卵质量、裂率及妊娠率。
单
通常 E2 > 1 100pmol/ ml和 E2/ P > 0. 001是卵子成熟和质量
优良的标志。因此 ,选择含有卵泡液、hM G及生长因子的培
养液是其成熟的必要条件。IVM将可以从刺激周期的卵巢
α
脆视
未成熟卵可冻存并融解后继续成熟至 M2期 ,成熟率为
58. 3 % ,并移植成功。IVM技术将使 IV F技术更经济、安
法 ,最近用 PCR扩增单细胞 DNA的 RhD基因片段 ,为临床
全 ,并为切除卵巢患者及 PCO患者解决生育问题。
开辟了新的途径。
六、移植技术的应用
三、胚期胚胎培养及移植
核移植技术的深入研究及发展 ,为辅助生育技术提供了
近年来 ,根据胚胎不同发育阶段需求而设计的序贯培养
广阔的前景 ,为男性不育及高龄不孕妇女的治疗提供了新的
方法的使用 ,使囊胚培养成为研究热点 [ 8 ]。囊胚期胚胎培养
思路 ,也为治疗性克隆提出了应用前景。正常受精是由变态
优点为 :选择良好的胚胎移植 ,淘汰有遗传缺陷发育阻滞的
胚胎 ;有利于 ICSI、活检及辅助孵化的胚胎修复 ;缩短胚胎
首都医科大学附属北京妇产医院 (邮编 100006)
© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing Hou. All rights rerved. wwwki孕为主 ,开展了常规体外受精2胚胎移植 ( IV F2ET) ;90年代 ,
径。随着 ICSI技术的广泛应用 ,扩展至睾丸及附睾活检相对变硬 ,弹性较差 ;②透明带异常 :包括透明带形态、色、
厚度异常或某种功能上缺陷 ;③IV F治疗失败史 ;④质量差
取精获 ICSI成功
。选择人球型精子做 ICSI ,也用于不育
症的临床。的胚胎 :胚胎出现较多碎片或胚胎生长速度缓慢 ;⑤冷冻胚
湖南中小学教育发展网二、胎植入前遗传学诊断 ( P GD)生肖猪今日运势
P GD是在胚胎植入母体前完成的遗传学诊断 ,适用于
有高风险生育遗传病患儿的夫妇 ,是优生领域中的重要进
展。目前已有 17个国家 40多个中心建立此项技术 ,已有近
1 000例健康婴儿出生。
P GD取材方法有 3种 :①卵细胞在未受精前的第一极
体 ,以及受精后的第二极体
,由于其只能间接地反应母体
单方面的遗传缺陷 ,可靠性相对较差 ;②卵裂期细胞活检 [ 5 ] :
学酸化法可引起局部 p H改变 ,Cieslak等 [ 11 ]报道 Tyrode溶
裂球进行活检比较适宜 ;③早期胚胎滋养外胚层细胞活检 :
优点是取材的细胞量较多 ,可靠性增加 ,缺点是必须增加 2
～3d体外培养 ,以使胚胎发育至囊胚期 ,且胚胎发育至囊胚
五、成熟卵母细胞的体外成熟 ( IVM)技术
P GD常用检测方法有 :聚合酶联反应 ( PCR)和荧光原位
杂交 ( FISH)技术 [ 6 ]。P GD目前主要用于 3个方面 ,即性别
诊断、基因遗传病及染色体病 [ 7 ]。性别诊断对 X伴性隐
研究表明 ,卵子成熟机制与卵泡液中甾体激素的作用有关 ,
性遗传病基因携带者有临床意义。如果母方携带致病基因 ,
男性后代患病的概率为 50 % ,故提倡淘汰男性胚胎。单基
因遗传病的诊断主要用 PCR方法。已有多种疾病被诊断 ,
如囊性纤维化病、Duchenne型肌营养不良、甲型血友病、12
中得到未成熟卵 ,经体外成熟、精、植、娠成功 ,还可从
Lesch2
抗胰蛋白酶缺乏症、性 X综合征、网膜色素变性、
PCO患者卵巢中获取未成熟卵体外培养而受孕 ,文献报道
Ny2han和 Tay2Sach病。染色体病的诊断多采用 FISH方
的继续发育与种植之间的时间 ,菊花的外形从而降低不良因素对胚胎2
辅
卵
酶
卵
核
囊
北京医学 2002年第 24卷第 6期
的单倍体成熟精子完成的。有研究表明 ,变态前的球形精子
细胞核移植到成熟卵胞质中 ,可跨越变态直接形成雄原核 ,
并与雌原核结合 ,成功产生后代。纽约大学医学中心 Zhang
等12 ]博士报告将单倍体雄原核和 (或)雌原核移植入体内成
熟的受精卵中进行原核移植 ,有可能产生正常子代 ;高龄妇
・411・
效性亟待提高。随着辅助生育技术的发展 ,应对其不足之处
给予充分的关注。
参 考 文 献
1. Govearts I , Devteker F , Koenin I , et al. Comparision of pregnancy
女胚胎种植率下降是影响成功率的原因之一。核移植技术
tion. Hum Reprod ,1998 ,6 :1514～1518.
即将高龄妇女不成熟卵子中分出生殖泡 ,与去除生殖泡的高
育龄妇女的卵浆融合 ,至新的卵子成熟后 ICSI授精使胚胎
prod Fertil Devel ,1995 ,7 :281～285.
发育 ,可适用于高龄使非整倍体率增高而致的不孕 [ 13 ]。
七、胎干细胞 ( ES)的应用前景
man oocytes now mandatory ? Human Reprd ,1994 ,9 :2217～2219.
胚胎干细胞是从早期胚胎中发现、在体外培养的一种
mal analysis of cond polar bodies. Mol Hum Reprod ,1999 ,5 :89～
95.
胞具有发育的全能性 ,含正常二倍染色体 ,可以在体外培养、 5. Haper J C ,Coonen E , Hanndyside AH ,et al. Masochism of autosomes
扩增、传操作、择、隆和冻存 ,而不失其多能性。因此 ,
它拥有优于其他细胞的特性而具有应用前景。用于遗传病 plantation human embryos. Prenat Diagn ,1995 ,15 :41～49.
的的治疗 :目前利用 ES细胞已制造出许多小鼠的疾病模
netic dignosis. Mol Reprod ,1999 ,5 :382～389.
7. Wells D , Sberlock J K , Handyside AH , et al. Detailed chromosomal
and molecular genetic of single cell by whole genome smplification
and comparative genome hybridization. Nucleic Acid Res ,1999 ,27 :
的形成。美国国家神经病研究所分子学实验室用小鼠 ES
1214～1218.
细胞诱导神经上皮细胞 ,植入脑内得到大量少突状细胞、神
en who failed to conceive on t hree or more IVF treat ment cycles : a
prospective ,randomized study. Hum Reprod ,2000 ,15 :8～9.
合物 ( MHC) ,使其不被受体免疫系统识别及排斥 ;此外 ,利 9. Nakayama T ,Fujiwara H , Tastumi K ,et al. A new assisted techique
用 ES细胞分化诱导为各类不同细胞注射到受损伤的组织 using a piezomicromanipulator. Fertil Steril ,1998 ,70 :784～788.
器官中以修复、善其功能。还可用于神经退行性变、糖尿 10. Nakayama T , Fujiwara H , Yamada S ,et al. Clinical application of a
病、髓损伤等。其应用前景为可改变基因改造速度及改变
物种改造速度 ,作为组织工程的种子细胞将为成千上万的患
技术路线tients. Fertil Steril ,1999 ,71 :1014～1018.
放疗化疗后的支持疗法 ;用于新药开发 :如应用 ES细胞生
殖大量心肌细胞 ,有助心脏病药物开发 ;用于农畜业生产 :利
cilitates earlier implatation. Fertil Steril ,1999 ,71 :308～313.
用基因打靶和基因捕获 ,改造出生产快、病力强、产的家
地板颜色效果图畜品种及农作物。
vulatory oocytes reconstructed dy germinal vesicle. Fertil Steril ,
1999 ,71 :726～731.
13. Tsai MC , Takeuchi T , Bedford J M , et al. Alternative sources of
ganates: reality or science fiction. Hum Reprod , 2000 , 15 : 988～
Griffit hs等 [ 14 ]报道 ICSI过程降低胚胎体外发育囊胚的能 998.
力 ,有待进一步研究。Bonduelle [ 15 ]报道 ICSI治疗后性染色 14. Griffit hs A T , Murdoch AP , Herbert M. Embryonic development in
体非整倍体率和染色体结构异常有轻微增高。因此 ,专家呼 vitro is compromid by t he ICSI procedure. Hum Reprod ,2000 ,15 :
402～409.
15. Bonduelle M. Develpmental outcome of children born after ICSI
compared to children born after IVF at 2 years old. Hum Reprod ,
