红景天对阿尔茨海默病大鼠行为学和脑组织抗氧化能力的影响
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作者：冀俊虎，董联玲，曹娟，杨发明，王健
【摘要】目的探讨红景天对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠的干预效果和作用机理。方法采用腹腔注射D-半乳糖(用生理盐水配成浓度为10 mg/mL)和灌胃AlCl3(用蒸馏水配成浓度为20 mg/mL)，并一次性注射东莨菪碱建立AD动物模型。通过Morris水迷宫测试系统检测大鼠学习记忆能力变化，抗超氧阴离子和总抗氧化能力测定检测各组大鼠脑组织抗氧化水平，常规HE染色和免疫组化测Aβ1-40的表达，观察大鼠海马及皮质的形态学改变。用红景天以灌胃方式对实验大鼠进行干预，并以喜得镇做对照观察其干预效果。结果模型组大鼠记忆功能明显减退，神经细胞破坏明显，海马和皮质出现β-淀粉样蛋白沉积及老年斑。中药组、西药组及空白组大鼠在水迷宫测试中，逃避潜伏期明显缩短，原平台象限比、跨平台次数明显增加，与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；模型组抗超氧阴离子和总抗氧化能力活性较其他组明显降低(P＜0.05)。结论红景天可以有效改善AD大鼠空
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间学习记忆能力损害，同时在清除自由基和抗氧化损伤方面有显著功效，具有神经保护作用。
【关键词】红景天；阿尔茨海默病；行为学；抗氧化能力；大鼠Abstract：Objective To study the interv
ention effect and mechanism of integripetal rhodiola herb (IRH) on Alzheimer’s dia model rats. Methods Alzheimer’s dia model was made by injecting D-galacto (10 mg/mL) in abdominal cavity and taking AlCl3 (20 mg/mL) by intragastric administration, and injecting scopolamine. Morris water maze testing system was undertaken to obrve the change of learning and memory ability in rats, biochemical indicator tested was to contrast the state of oxidative stress, common HE staining and immunohistchemistry staining were to obrve the morphology change of the hippcampus and cortex cell. The model rats were administrated IRH by means of intragastric administration contrasting with hydergine to compare the effect. Results The memory ability of model group was obviously decread, cellula nervosa were damaged badly. Aβand nile plaques appeared on hippcampus and cortex. All of the test indexes in Morris water maze showed that the abilities of space arch, learning and memory in different groups remarkably improved compared with that of the model group (P＜0.05). The anti-02·- and T-AC activity of the model group was lower than other
groups obviously (P＜0.05). Conclusion IRH has significant relieving effect on the lesion of the abilities of space arch, learning and memory in AD model rats and good protecting effect on cellula nervosa of AD rats by eliminating free radical and improving the anti-oxydation potential.
Key words：integripetal rhodiola herb；Alzheimer’s dia；ethology；anti-oxydation potential；ra
t
阿尔茨海默病(Alzheimer’s dia,AD)是一种以进行性认知功能障碍和记忆损害为特征的脑退行性疾病。近年来，随着老龄化进程的加速，本病已严重威胁人类生活健康，对本病的防治工作迫在眉睫。具有清热解毒、益气养血、补肾健体的中药红景天在防治痴呆、健忘方面一直备受关注。现代医学研究表明，红景天在抗氧化损伤、清除自由基和促进细胞代谢, 增强细胞活力等方面有独特的功效[1]，已经成为目前国内外医药界研究的热点。本实验通过建立AD动物模型，观察红景天的干预效果和可能作用机理，为该药防治AD提供实验依据。
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1 实验材料
1.1 动物
SD雄性大鼠60只，山西医科大学实验动物研究中心提供，体重250～300 g，普通饲料饲养，自由饮水。
1.2 主要药物与试剂
安妮勃朗特>姓卢的名人
西藏红景天购自山西医科大学第二医院中药房；甲磺酸双氢麦角毒碱片(喜得镇)由天津华金制药厂和瑞士诺华制药有限公司合作生产；D-半乳糖为AMRESCO公司产品，批号D8310；结晶AlCl3为天津市
福晨化学试剂厂产品；氢溴酸东莨菪碱为上海禾丰制药有限公司产品，批号070302；水合氯醛(分析纯)为天津市福晨化学试剂厂产品，批号20060320；考马斯亮蓝(批号20080107)、总抗氧化能力(T-A℃)测试盒(批号20080105)和抗超氧阴离子(批号20080107)均由南京建成生物工程研究所生产。兔抗大鼠β-淀粉样蛋白1-40 (amyloidβ-protein 1-40,Aβ1-40)抗体和SABC免疫组化试剂盒均由武汉博士德公司提供。
1.3 主要仪器
秋空明月悬MT-200 Morris水迷宫视频跟踪分析系统(S7200，成都泰盟科技有限公司)；数显恒温水浴锅(上海申腾生物技术有限公司)；低速台式离心机(上海安亭)，型号：80-2C；旋涡振荡器，型号：MSI；美国VARIAN 紫外分光光度计，型号：Cary50；电子天平(上海友声衡器有限公司)。
2 实验方法
五年级下册数学试卷2.1 药物制备
红景天由山西省中医药研究院制剂室制备为干燥粉末。将500 g 红景天煎煮3次，第1次加水2 500 mL，煎煮2 h；第2次加水2 000 mL，煎煮1 h；第3次加水1 500 mL，煎煮1 h，过滤，合并3次提取液,80 ℃用水浴锅蒸发浓缩成浓度为1 g/mL进行灌胃。
2.2 造模及分组
SD雄性大鼠(60只)经水迷宫测验试掉不符合条件者。将52只大鼠随机分成空白对照组(13只)、药物造模组(39只)。药物造模组以50 mg/(kg·d)腹腔注射D-半乳糖和2 mL/d灌胃AlCl3，持续6周，并进行水迷宫测试做出模型评价。模型评价标准：以空白组大鼠逃避潜伏期的均值为参考值，计算每只大鼠的平均逃避潜伏期值与参考值之差占该鼠的平均逃避潜伏期时间的比值,＞20%则表示造模成功。将造模成功的大鼠(35只)分为模型组(11只)、中药组(12只)和西药组(12只)。第7周开始同时给予干预：中药组用红景天灌胃，西药组用喜得镇以1 mg/(kg·d)灌胃，空白对照组以10 mL/(kg·d)蒸馏水灌胃，持续4周。行为学测试前10 min对药物造模组以2 mg/kg腹腔注射东莨菪碱[2]制作AD大鼠复合模型。
2.3 水迷宫行为学测试
参照Morris水迷宫(Morris water maze,MWM)实验方法测定大鼠空间识别能力(包括定位航行实验和空间搜索实验)。实验室温度保持在24～25 ℃，水迷宫中加入奶粉1 kg，用热水冲开，水面高过安全平台1 cm，水温保持在22 ℃左右。先进行5 d定位航行实验，每日分别从4个象限入水进行训练，大鼠面向池壁入水，每次入水点相同，记录大鼠寻找并爬上平台所需时间(潜伏期)，潜伏期上限为60 s，每日取4次潜伏期平均值作为当天学习记忆成绩。第6日进行空间搜索实验(时间为120 s)，评价各组大鼠记忆能力的改变。
2.4 生化指标的测定
