天然药物化学实验指导兰州大学天然药物化学教研室目录天然药物化学实验须知实验一薄层色谱TLC 实验二从三棵针中提取、分离小檗碱与小檗胺实验三
从洋金花中提取分离东莨菪碱和莨菪碱实验四大黄中蒽醌类化合物的提取分离
实验五芦丁的提取与鉴定实验六甘草酸的提取实验七烈香杜鹃挥发油的含量测定实验八丹皮酚的提取、分离和制剂鉴别实验九预试验附录一常用溶剂的物理性质附录二常用溶剂的回收及精制方法附录三常用干燥剂性能的说明仪器清单天然药物化学实验须知一、每次实验以前必须预习本实验内容了解其操作程序和理论要点切勿盲目进行实验实验时须准备记录薄一本随时正确记录每一实验应记的项目。如原料用量实验时发生的现象反应结果产品数量、熔点、沸点、产品纯度等以作写正式报告的依据。二、实验所得产品如不供下一实验用应交给指导老师并注明品名、数量、组别、姓名、日期。三、实验规则1实验时不能阅读与本实验无关的书籍不要高声谈笑也不能擅自离开严禁在实验室内吸烟及吃东西。2实验室要经常保持整齐清洁桌上不要乱放无用的仪器与药品。火柴杆、废纸等不要乱抛在地上、废酸、碱液应倒入污水缸中易燃烧及易挥发的废液应倒入水槽中并立即用水冲掉。3药品、仪器都是国家财产须节约爱护使用若有损坏应填写仪器损坏单报告指导教师及时领取并酌情赔偿。4试剂、药品、公用用具使用后立即放回原处不可乱放并应注意不可盖错试剂瓶塞以免污染试剂。5装有易燃性液体的瓶子不得放在灯火近旁。6加热乙醇、乙醚、石油醚、苯等易挥发可燃的液体时应使用装有冷凝管的烧瓶在水浴上进行加热加热前应放入沸石1—2粒或一端封死的毛细管防止爆沸冲击若在加热时未放沸石则应冷却后再加不可热时追加
添加溶剂时应离开火源稍冷后再添并应重新加入沸石。7实验过程中万一遇见溶液着火应立即用石棉布或其他物品把它盖上使其隔绝空气而熄灭。8实验完毕后应将用过的仪器洗刷洁净放好并应指定值班人员将实验室打扫干净污水缸的废液拿到室外适当地方处理埋掉离开实验室时应检查门、窗、水电是否关好。9严禁将实验室内的仪器、药品携带室外。以上须知清严格遵照执行。实验一簿层色谱TLC 薄层色谱是色谱法中应用最普遍的方法之一具有分离速度快效率高等特点。适用于微量样品的分离鉴定天然药物化学成分的研究中得到了越来越广泛的应用和发展。一、实验目的l、学习并掌握薄层板的制备和使用方法。2、了解薄层色谱的原理及应用范围。二、实验原理薄层色谱是把吸附剂或载体均匀地铺在一块玻璃板或塑料板上形成薄层在此薄板上进行色谱分离按分离机制可分为吸附分配离子交换和凝胶过滤色谱等。薄层色谱多数情况是一种吸附层析利用吸附剂对化合物吸附能力的不同而达到分离吸附剂吸附能力的大小与化合物极性大小有关。化合物极性大被吸附剂吸附得牢Rf值小反之化合物极性小Rf值大。一个化合物在某种吸附剂上Rf值的大小主要取决于展开剂的极性大小即展开剂极性大化合物Rf值大展开剂极性小化合物的Rf值小。薄层板根据在制备过程中是干法制板还是湿法制板分为二种。干法制板为软板湿法制板为硬板。三、实验内容一薄层板的制备1、干法取150—200目的色谱用中性氧化铝适量散布在玻璃板上用一根推捧匀速地从一端向另一端推进使吸附剂均匀地在玻璃板上铺成一薄层如图示即可使用薄层的厚度取决于推棒下层的塑料圈的厚度一般以0.25mm为宜。干法铺层方法干法铺板方法2、湿法1硅胶G薄层板的制备称取硅胶G12克加蒸馏水34毫升充分搅拌成糊状后迅速分倒在四块5×20厘米的玻璃板上铺匀水平放置待
室温阴干后110℃活化一小时备用。2硅胶CMC—Na薄层板的制备称取CMC—Na清穿之秀坊女儿
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羧甲基纤维素钠01克加l毫升酒精湿润后溶于17毫升蒸馏水中。立即用力振摇搅拌如不溶可加热全部溶解后加人过200目筛的层析用硅胶5克搅拌成糊状均匀地铺在两块5×20厘米的玻璃板上水平放置室温阴干后于110℃活化一小时备用。二薄层色谱l、制板取150目—200目的层析用氧化铝按上述干法制成薄层板5×20厘米一块。2、点样取管口平整的毛细管三支分别吸东莨菪碱其若碱及二者混合的氯仿溶液点在上述制好的薄层板上点的直径一般为2—3毫米点与点之间的距离一般为15厘米左右样品点在离薄层一端为2厘米左右的起始线上离板边约有l厘米的距离。3、展开点样完毕待溶剂挥干后用氯仿丙酮无水乙醇8205上行展开其方法是将薄层板斜放在盛有展开剂的层析槽内薄板上端有塑料盖垫起使与液面成15。左右的夹角点有样品的一端浸入溶剂中深达05厘米左右、切勿使溶剂浸没原点盖好层析槽盖当溶剂前沿达板的另一端1厘米左右时即可取出薄层板标出溶剂前沿位置。4、显色取出的薄层板立即喷洒改良碘化铋钾试剂使其显色计算Rf值。Rf 起始线到样品斑点中心距离起始线到剂剂前沿距离四、实验说明及注意事项1、制薄层板用的玻璃应干燥、清洁。2、干法制板时推捧用力要均匀中间不要停顿否则薄层厚度不均匀。3、点样时样品浓度不要太大点样量也不要太多否则斑点拖尾。若样品浓度太小可待第一次点样溶剂挥干后再第二次点样。4、薄层板放于层析槽时注意切不可将原点浸入溶剂中。5、层析后的薄层板取出立即喷洒显色剂否则溶液挥干后喷显色剂会吹散吸附剂。但湿法制的硬板就不必如此。6、湿法制的硬板活化的温度和时间可依需要调整一般检识水溶性成分或一些极性大
柔软时光的成份所用的薄层板只在空气中自然干燥即可使用。五、参考文献1、中国医学科学院药物研究所薄层层析及其在中草药分析中的应用1978。2、E菜德雷M·菜德雷合著陶义训、马立人、夏寿宣合译色谱法。3、全国高等医药院校试用教材中草药化学1980。4、Stahl EtdThin Layer Chromatography 2nd edu1969。5、E HeffmannChromatography 3nd edu 1975。实验二从三棵针中提取、分离小檗碱与小檗胺三棵针为小檗属Berberis植物种类繁多是黄连、黄柏的重要代用品。根中含多种生物碱有季胺类生物碱如小檗碱Berberine1.2—3根皮含3—5.5少量巴马亭Palmatine、药根碱Jatrorrhigine、非洲防己碱Columbamine、木兰花碱Magnoflorine有叔胺碱如小檗胺Berbamine045—3.84尖刺碱Oxyacanthine异粉防己碱1sotetrandrine等。小檗碱是一种常用的抗菌药对菌痢、肠炎、上呼吸道感染等疾病有良好的疗效。小檗胺有升白、降压、利胆及镇咳等作用对预防和治疗白细胞减少疗效较好。一、实验目的l、了解小檗碱小檗胺的结构与性质掌握提取分离方法。
2、了解小檗碱小檗胺的鉴识反应及薄层色谱鉴别。二、实验原理l、小檗碱Berberine 又名黄连素黄色针晶能缓缓溶于水120、乙醇1100易溶于热水及热乙醇难溶于乙醚、石油醚、苯及氯仿。2、小檗胺Berbamine 白色或无色结晶难溶于水易溶于乙醇中可溶于乙醚氯仿、石油醚。本实验的提取分离原理是小檗碱、小檗胺的硫酸盐易溶于水小檗碱的盐酸盐难溶于水小檗胺的盐酸盐可溶于水游离的小檗碱为季胺碱可溶于水游离的小檗胺是叔胺碱难溶于水。因此将植物原料用稀H2SO4溶液浸泡然后用石灰乳调至pHl2左右小檗碱游离而溶于水小檗胺含酚羟基成钙盐也溶于水粘液质及过量硫酸生成不溶性钙野山参的吃法
盐而沉淀析出再加NaCl并用盐酸调pH8左右时小檗碱成难溶性的氯化小檗碱而析出小檗胺游离析出最后利用氯化小檗碱在热水中溶解度较大的性质与小碱胺分离。三、实验内容一小檗碱与小檗胺的提取分离取三棵针粗粉100克置1000毫升三角瓶内加700毫升0.2VV的H2SO4溶液浸泡24小时纱布过滤再用400
毫升酸水同法提取一次合并两次滤液于搪瓷缸内搅拌下加人石灰乳至pHl2静置30分钟抽滤滤液中加入计算量8WV的NaCl静置待沉淀完全后滴加浓HCl至PH885于80℃热水中保温半小时静置抽滤所得沉淀于60℃以下干燥称重置100毫升烧杯中加入30倍量蒸馏水加热至沸趁热抽滤滤液内含小檗碱沉淀为小檗胺的粗品。二精制趁热向上述滤液中滴加浓盐酸调pH至2静置氯化小檗碱沉淀析出抽滤60℃以上干燥称重计算得率不得低于0.2 上步所得沉淀60℃以下干燥称重置50毫升烧杯中加20倍量乙醇加热溶解加入2活性炭再加热煮沸5分钟热过滤滤液蒸除乙醇剩l4量冷却滴加蒸馏水至不再析出沉淀为止用5NaOH调pH8—8.580℃水浴加热5分钟左右放置抽滤干燥再以10倍量乙醚溶解过滤回收乙醚得白色小檗胺。三鉴识l、小檗碱的鉴识1取氯化小檗碱水溶液数滴加浓HNO3 1滴观察现象再滴加浓HNO3观察有何变化解释现象。2取氯化小檗碱水溶液数滴加锌粒少许再加浓H2SO4数滴观察现象并解释。3取氯化小檗碱水溶液数滴加5NaOH 23滴再加丙酮数滴现察现象并解释。2、小檗胺的定性1取小檗胺结晶少量置白瓷板上加5HC12滴使溶解再加固体硝酸钠使之饱和移入毛细管中观察。2取l2粒KMn04置白瓷板上加5HCl数滴使溶解再加少量小檗胺结晶观察颜色变化。四薄层色谱层析板硅胶G板110℃活化微乎其微的意思
半小时。展开剂氯仿—甲醇—氨水1540.5 样品氯化小檗碱乙醇液氯化小檗碱标准品液小檗胺乙醇液小檗胺标准品液显色碘蒸汽或改良磺化铋钾四、实验说明及注意事项1、用硫酸浸泡时硫酸的浓度以0.2为宜此时生成的硫酸小檗碱在水中溶解度较大若加入过量小檗
碱就形成酸式硫酸盐水中溶解度就降低1100影响小檗碱的提取量。2、冷浸时间不宜过长次数也不宜过多否则浸出的杂质量也相对增加冷浸一般24小时可浸出92的成分所以浸出两次即可。3、在pH8.5时小檗胺沉淀较完全但不易凝聚故80℃保温使凝聚而沉降。4、小檗碱精制时调pH至2是为了使小檗胺等叔胺型生物碱留在溶液中除去以便得到较纯的小檗碱操作时若溶液己冷却析出结晶就应加热成澄明溶液再用盐酸调pH2。五、参考文献l、沈阳药学院植物化学教程1979年2、贵阳医学院药学系贵州药讯1980年5期2页3、中药声1979年278页4、中草药化学全国高等医药院校试用教材1980年7月5、韩秋生等云南医药1981356 6韩秋生等药学通报1981313 实验三从洋金花中提取分离东莨菪碱和莨菪碱洋金花为茄科植物毛花蔓陀罗Datum innoxia Miller的花主要含生物碱为中麻药方剂中的主药临床上治疗气管炎有效。一、实验目的l、通过本实验掌握生物碱的一般提取分离方法。2、掌握氧化铝柱色谱分离莨菪碱和东莨菪碱的实验方法从而了解柱色谱的一般实验操作技术。
3、了解东莨菪碱和莨菪碱的检识方法。二、实验原理洋金花中的主要化学成份l、东食著碱Scopolamine又名莨菪胺、天仙子碱mp59℃一水合物。2、莨菪碱Hyoscyamine又名天仙子胺mp108.5℃3、莨菪酸Tropic acid mp118℃
4、去甲莨菪碱Norhyoscyamine mp142℃
5、曼陀罗碱Meteloidine mp141℃本实验是利用游离生物碱及其盐均能溶于乙醇的性质用乙醇回流提取总生物碱再利用东莨菪碱和莨菪碱碱性强弱不同与碱性氧化铝吸附力强弱不同用氧化铝柱色谱进行分离。三、实验内容一提取总碱取洋金花粗粉50克置1000毫升园底烧瓶中加95乙醇300毫升置水浴上回流提取1小时倾出提取液药渣再用95乙醇200毫升不浴回流提取30分钟倾出提取液药渣再用95乙醇200毫升回流提取30分钟倾出提取液三次提取液合并用玻璃漏斗过滤滤液回收乙醇至无醇味浓缩液加1盐酸l00毫升使溶解抽滤滤液用氯仿402020毫升萃取脂溶性杂质酸水液用10NaOH调至pH9一l0用氯仿萃取60503020毫升四次氯仿
液用无水硫酸钠脱水干燥回收氯仿得总碱。二莨菪碱与东莨菪碱的分离这两种生物碱我们用碱性氧化铝干柱色谱进行分离其操作步骤如下1、装柱将色谱柱垂直固定在铁支架上柱底填一块棉花打开活塞称取100—120目碱性氧化铝40克经漏斗慢慢装入柱中一边装填一边用橡皮塞轻轻敲击色谱柱使其装填均匀紧密最后使吸附剂表面形成一水平面。2、上样将上述所得总生物碱用少量氯仿溶解用吸管小心将氯仿溶液加在吸附剂表面上切勿破坏吸附剂平面为了防止平面被损坏可剪一直径同色谱柱内径大小一样的滤纸小心放在吸附剂平面上或在其上面加1—2厘米厚的石英砂把氯仿溶液加到滤纸片上或石英砂上。3、展开洗脱加样完毕立即小心加入氯仿也应注意防止破坏吸附剂平面展开洗脱当溶剂前沿到达柱底部时用50毫升锥形瓶收集洗脱液并控制流速使每分钟流出液为60一80滴每瓶收集50毫升更换锥
形瓶编上序号并在柱上经常添加氯仿使溶剂面始终高于吸附剂表面东莨菪碱先洗脱下来莨菪碱后洗脱下来。4、溶剂回收按序号分别回收溶剂后再氧化铝薄层检查以氯仿—丙酮—乙醇821展开改良碘化铋钾试剂显色。相同部分合并。三检识反应及薄层检查1、生物碱沉淀反应分别取东莨菪碱莨菪碱少量置白瓷板中蒸发到干加2滴稀HCl溶解
在什么中成长作文600字分别加以下生物碱沉淀试剂1碘—碘化钾试液2改良碘化铋钾试液3苦味酸试液
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观察结果2、Vitali反应分别取东莨菪碱和莨菪碱少量置于白瓷板中加发烟硝酸5滴于水浴上蒸干放冷后加10KOH乙醇溶液2—3滴观察颜色变化并加以解释。3、薄层色谱吸附剂碱性氧化铝150一180目干法铺板。展开剂氯仿—丙酮—乙醇821 样品东莨菪碱氯仿溶液莨菪碱氯仿溶液东莨菪碱标准品莨菪碱标准品显色剂改良碘化铋钾喷洒四、实验说明及注意事项l、装柱还可采用湿法将洗脱剂加到吸附剂中搅拌成稀糊状加到层析柱中使吸附剂依重力自然下沉到柱底部打开活塞使洗脱剂流出但要保证溶剂表面始终高于吸附剂表面。干法装柱操作简便、迅速、不受洗脱剂的限制但柱效不高。2、柱色谱和薄层色谱用的氧化铝要注意活度一般Ⅱ—Ⅲ级即可活度不够就不能将样品中成分分开。五、参考文献1、赵承锻ChinJ Physil vol 9771935 2、林启寿等药学学报1卷2期95页1953 3、岛田克卫药学杂志vol 756091955 4、中成药研究1979l1—7 5、中麻通讯1977318—23 实验四大黄中蒽醌类化合物的提取分离大黄为蓼科大黄属植物掌叶大黄Rheum Palmatum L唐古特大黄Rtanguticum Maxim或药用大黄Rofficinale Baill的根茎主要含蒽醌类化合物有泻下和抗菌作用为常用中药之一。一、实验目的l、掌握
墙面绘画梯度pH萃取法和提取分离大黄中各种蒽醌甙元的原理及实验方法。2、了解蒽醌类化合物的颜色反应及色谱检查方法。二、实验原理大黄中目前已知的主要成分1、大黄酸Rhein mp321℃2、大黄素Emodinmp2546℃3、芦荟大黄素Aloe-emodinmp2235℃4、大黄酚Chrysophanolmp1936℃5、大黄素甲醚Physcionmp2037℃其甙有大黄酸葡萄糖甙Rhein monoglucosidemp 266℃大黄素葡萄糖甙Fmo din monoglucosidemp 189℃芦
荟大黄素葡萄糖Aloe-emod-inmonog- lucosidemp 239℃大黄酚葡萄糖甙chrysophyanol monoglucosidemp245℃大黄素甲醚葡萄糖甙Physcion monoglucosidemp 235℃番泻甙A、B、C、D、ESennoside A.B.C.D.E等。本实验是根据大黄中的蒽醌类甙元成分能溶于氯仿的性质采用氯仿提取又利用羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同用pH梯度法进行分离。具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5碳酸氢钠溶液具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5碳酸钠溶液只具有α位酚羟基的蒽醌酸性弱只溶于氢氧化钠溶液。三、实验内容一大黄中蒽醌甙元的提取分离1、
大黄中蒽醌甙元的提取取大黄粗粉50克置于1000毫升园底烧瓶中加20H2SO4 30毫升氯仿200毫升水浴回流一小时滤出浸液药渣再加20H2SO4 30毫升氯仿200毫升水浴回流45分钟滤出浸液合并所得浸液回收氯仿至剩余氯仿约l00毫升用蒸馏水洗至pH6。2、大黄酸的分离上得氯仿液用5NaHCO3溶液萃取四次80、60、40、40毫升合并NaHCO3液用盐酸中和至不再析沉淀析出棕黄色沉淀若不出现沉淀水浴上加热抽滤水洗70℃烘干用少量冰醋酸重结晶析出黄色针晶为大黄酸抽滤烘干称重。3、大黄素的
分离经NaHCO3溶液提取过的氯仿液继用5Na2CO3溶液萃取四次80、60、40、40毫升。合并Na2CO3液用盐酸中和至不再析出沉淀析出棕黄色沉淀若不出现沉淀水浴上加热抽滤水洗70℃烘干用少量无水乙醇重结晶析出橙色针晶为大黄素、抽滤烘干称重。4、芦荟大黄素大黄素甲醚和大黄酚混合物的分离经Na2CO3提取过的氯仿液再用5NaOH溶液提取四次80、60、40、40毫升合并NaOH液用盐酸中和至不再析出沉淀析出黄色沉淀抽滤水洗70℃烘干称重。5、芦荟大黄素的分离4得沉淀物溶于少量氯仿约30毫升用025NaOH溶液提取三次20、10、10毫升合并提取液用盐酸中和至中性析出棕黄色沉淀抽滤70℃烘干用少量乙酸乙酯重结晶析出棕黄色针晶为芦荟大黄素抽滤烘干称重。6、大黄素甲醚和大黄酚混合物的分离经0.25NaOH 提取过的氯仿液再用5NaOH提取三次20、10、10毫升合并提取液用盐酸中和至中性析出黄色沉淀抽滤。水洗70℃烘干用少量乙酸乙酯重结晶得大黄素甲醚和大黄酚混合物抽滤烘干称重。二颜色反应及色谱检查l、取以上各产物少量分别于试管中加5NaOH溶液数滴观察颜色变化。2、取以上各产物少量分别于试管中加浓H2SO4数滴观察颜色变化。3、取以上各产物少量分别于试管中由倭考状既芙庠俚渭哟姿崦镜募状既芤菏 喂鄄煅丈 浠 ?4、薄层色谱吸附剂硅胶G板105℃活化二小时。展开剂氯仿—乙酸乙酯—醋酸410.2 检品各产物的乙醇液显色可见光下观察色斑紫外灯下观察萤光斑点。四、实验说明及注意事项1、大黄中蒽醌的存在形式以结合状态为主游离状态的仅占小部分为了提高游离蒽醌的得率在提取过程中采取酸水解和萃取相结合的方法。2、两相萃取时不可猛力振摇只能轻轻旋转摇动时间可长一些以免造成严重乳化现象而影响分层氯仿液用水洗时尤其易乳化可加入氯化钠盐析使两层分离。五、参考文献1、林启寿中草药成分化学1977195 2、
中药志上册27页1977 3、苏州市中医院中草药通讯1977515 4、何丽一等药学学报1980、19555 实验五芦丁的提取与鉴定芦丁Rutin亦称芸香甙Rutinoside广泛存在于植物界中其中以槐花米为槐树Sophora japnicaL.的花蕾和乔麦叶中含量较高本实验以槐花米为原料提取芦丁其含量为12—16。芦丁为维生素P类药物有助于保护毛细血管的正常弹性临床上主要作防治高血压的辅助药物还有调整毛细管壁的渗透作用临床上作毛细血管性止血药此外对于放射性伤害所引起的出血症也有一定治疗作用。一、实验目的l、以芦丁为例学习黄酮类化合物的提取方法2、掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮甙甙元和糖部分的鉴定方法。二、实验.
