vivo帐号登录N-cadherin、E-cadherin和P63蛋白在原发性肝细胞癌组织中的表达及临床意义
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想开头的四字成语吴国栋;倪勇
【摘 要】目的 探讨神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)以及P63蛋白在原发性肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其与患者临床病理学特征之间的相关性.方法 采用免疫组化染色法分别检测60例正常肝组织、60例HCC组织及其癌旁组织标本中N-cadherin、E-cadherin以及P63蛋白的表达,并分析HCC组织中三者表达与患者临床病理学特征的关系.结果 N-cadherin在正常肝组织、癌旁组织、肝癌组织中的阳性表达率逐渐升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).而E-cadherin在正常肝组织、癌旁组织、肝癌组织的阳性表达率则逐渐降低,差异均有统计学意义(P＜0.05),正常组织的P63阳性表达率显著高于癌旁组织和HCC组织,差异有统计学意义(P＜0.05),而癌旁组织与HCC组织间比较差异无统计学意义(P＞0.05).N-cadherin的高表达与HCC患者的高病理学分级、门静脉受侵犯、高临床分期等结局有显著相关性,差异有统计学意义(P＜0.05).E-cadherin的低表达与HCC患者的高病理学分级、门静脉受侵犯、高临床分期等结局有显著相关性,差异有统计学意义(P＜0.05).P63的低表达与HCC患者的高病理学分级、肿瘤直径、高临床分期等结局有显著相关性,差异有统计学意义(P＜0.
05).P63的表达与E-cadherin的表达呈正相关(r=0.467,P＜0.01),而与N-cadherin的表达呈负相关(r=-0.472,P＜0.01).结论 HCC组织中N-cadherin的高表达和P63蛋白、E-cadherin的低表达可能与肿瘤的发生、发展及转移密切相关.%Objective To explore the expressions of N-cadherin,E-cadherin,and P63 protein in hepatocellular carcinoma (HCC) tissues,and the relationship between their expressions and clinicopathologic factors.Methods Immuohistochemistry was ud to detect the expressions of N-cadherin,E-cadherin,and P63 protein in 60 normal liver tissues,60 HCC tissues and their peficancerous tissues,and then the relationship between their expressions and clinicopathologic factors were analyzed.Results The positive expression rates of N-cadherin in normal liver tissue,peficancerous tissues and HCC tissue were gradually decread,the difference was statistically significant (P ＜ 0.05).And The positive expression rates of E-cadherin in normal liver tissue,peficanceroustissues and HCC tissue were gradually incread,the difference was statistically significant (P ＜ 0.05).The expression of P63 in normal liver tissue was significantly higher than that in peficancerous tissues and HCC tissue,and the differences wcrc all significant(P ＜ 0.05).The positive rates of expression of N-cadherin
were related with clinical stage,portal vein invasion,metastasis and pathological grading.The positive rates of expression of E-cadherin were related with clinical stage,portal vein invasion and pathological grading.The positive rates of expression of P63 were related with clinical stage,tumor sizeand pathological grading.Spearman rank correlation analysis showed that the expression of P63was positively correlated with the expression of E-cadherin,but negatively correlated with the expression of N-cadherin.Conclusion The high expression of N-cadherin and low expression of P63 protein,E-cadherin of HCC tissues may play a role in tumor metastasis and carcinogenesis.
【期刊名称】《医学研究杂志》
【年(卷),期】瞬息万变2018(047)005
【总页数】6页(P164-169)
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【关键词】原发性肝细胞癌;神经型钙黏蛋白;上皮型钙黏蛋白;P63蛋白;免疫组化染色
【作 者】吴国栋;倪勇
【作者单位】518000 深圳市第二人民医院肝胆外科;518000 深圳市第二人民医院肝胆外科
描写外貌的段落【正文语种】中 文
【中图分类】聚同R730.7实名登记
原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是肝胆外科最为常见的恶性肿瘤之一。在我国HCC的发病人数占全球的一半以上，长年稳居我国肿瘤相关死亡的第2位，严重威胁着居民的生命健康[1,2]。我国的HCC由于大多具有乙型肝炎病毒感染及肝硬变的背景，因此具有侵袭转移率高、根治性切除率低、术后复发率高等特点，给HCC的治疗带来了严峻的挑战。上皮间质转化(epithelial to menchymal transition，EMT)系指在一定的病理生理条件下上皮细胞转分化为间充质细胞的一种现象。多项研究报道EMT参与了HCC等恶性肿瘤的侵袭、转移等病理过程。钙黏蛋白(cadherin)转化是EMT的重要机制之一，表现为上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)向神经型钙黏蛋白(N-cadherin)转化[3～6]。目前已证实，P63蛋白可在细胞分化的过程中通过Wnt信号通路对恶性肿瘤的EMT过程发挥一定的调控
作用[7,8]。然而，目前关于P63蛋白在HCC组织中的表达及其在EMT过程中的作用尚不明确，本研究拟通过检测N-cadherin、E-cadherin和P63蛋白在HCC组织中的表达情况，并进一步探讨其临床意义，以期为临床治疗提供参考。
资料与方法
1.临床资料:回顾性收集2015年10月～2016年10月期间笔者所在医院行手术切除的、术后经病理检查确诊为HCC的患者60例。所有患者术前均未行放疗、化疗或其他治疗。其中男性42例，女性18例；患者年龄32～70岁，中位年龄为55岁；肿瘤φ<5cm者22例，≥5 cm者38例；门静脉受侵犯者20例，门静脉未受侵犯者40例；术前肝功能分级为Child Pugh A级43例，B级17例；高分化16例，中分化24例，低分化20例；巴塞罗那临床分期为A期33例，B期21例，C期6例；淋巴结出现转移者10例，未出现转移者50例。同时回顾性收集2015年10月～2016年10月期间于笔者所在医院接受手术的肝良性病变患者或外伤性肝损伤患者60例(非HCC)，所有患者均经病理学检查确定无癌细胞。其中男性40例，女性20例；患者年龄33～71岁，中位年龄为54岁；术前肝功分级为Child Pugh A级48例，B级12例。HCC组患者的年龄和性别与非HCC组患者比较差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。
2.标本收集：收集HCC患者的HCC组织及其癌旁组织(距离肿瘤以远3cm)，收集非HCC患者的正常肝组织标本。
3.主要试剂和设备：N-cadherin、E-cadherin抗体均购于北京中杉金桥生物技术有限公司，鼠抗人P63蛋白单克隆抗体购于美国Santa Cruz公司，Envision二步法免疫组化检测试剂盒(PV-6000)、二氨基联苯胺(DAB)酶底物显色试剂盒等相关试剂均购自武汉博士德生物技术有限公司。
4.免疫组化染色法检测肝组织中N-cadherin、E-cadherin和P63蛋白的表达：采用Envision二步免疫组化染色检测肝组织中N-cadherin、E-cadherin和P63蛋白的表达，检测过程中的操作均严格按试剂盒说明书进行。采用已知的阳性对照片(试剂盒自带)作为阳性对照，采用PBS缓冲溶液代替一抗作为阴性对照。上述所有切片的染色均采用同一厂家、同一批次的试剂完成。结果判断：N-cadherin的着色部位位于细胞质，E-cadherin的着色部位位于细胞膜，P63蛋白的着色部位位于细胞核，均呈棕黄色或者棕褐色。上述部位如出现棕黄色颗粒即可判定为染色阳性[9]。在随机双盲的条件下，每张切片由观察者随机选择5个高倍镜视野(×400倍)进行观察计数，每个所观察的视野计数达200个细胞，计数共计达1000
个细胞，最后取其平均值。根据目前免疫组织化学实验中普遍采用的免疫组化积分判断标准表示其表达强度。染色强度：无色，0分；浅黄色，1分；棕黄色，2分；黄褐色，3分；阳性细胞所占比例：阴性，0分；≤10%，1分；11%～50%，2分；51%～80%，3分；>80%，4分。再采用半定量积分对各类肝组织进行阳性和阴性的划分[10]。半定量积分=染色强度评分×阳性细胞所占比例评分。其中，半定量积分为0～2分定义为阴性(-)，3～4分定义为弱阳性(+)，5～6分定义中阳性(++)，>6分定为强阳性(+++)。其中0～2分为表达阴性，≥3分为表达阳性。
3.统计学方法:采用SPSS 20.0统计学软件进行统计分析。癌旁组织和HCC组织中N-cadherin、E-cadherin和P63蛋白的表达情况比较时，统计分析方法采用配对χ2检验，而癌旁组织或HCC组织中N-cadherin、E-cadherin和P63蛋白的表达情况与正常肝组织比较时，统计方法采用成组χ2检验。在HCC组织中N-cadherin、E-cadherin和P63蛋白的表达与HCC临床病理学特征关系的分析中，统计分析方法均采用成组χ2检验。HCC组织中N-cadherin、E-cadherin和P63蛋白三者表达间的关系分析采用Spearman秩相关性分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
结 果
1.E-cadherin、N-cadherin、和P63蛋白在3组不同肝组织中的表达:(1)E-cadherin在3组肝组织中的表达:正常肝组织中E-cadherin呈阳性表达44例(73.33%)，呈阴性表达16例(26.67%)。癌旁组织中E-cadherin呈阳性表达28(46.67%)，其对应的HCC组织中呈阳性表达11例，阴性表达17例；呈阴性表达32例(53.33%)，其对应的HCC组织中呈阳性表达1例，阴性表达31例。HCC组织中E-cadherin呈阳性表达12例(20.00%)，其对应的癌旁组织中呈阳性表达11例，阴性表达1例；呈阴性表达48例(80.00%)，其对应的癌旁组织中呈阳性表达17例，阴性表达31例。与正常肝组织组比较，癌旁组织和HCC组织中E-cadherin的表达阳性率均较低(χ2=8.889，P=0.003；χ2=34.286，P=0.000)，且HCC组织中E-cadherin的表达阳性率较癌旁组织低(χ2=13.523，P=0.000)。(2)N-cadherin在3组肝组织中的表达:正常肝组织中N-cadherin呈阳性表达8例(13.33%)，呈阴性表达52例(86.67%)。癌旁组织中N-cadherin呈阳性表达21例(35.00%)，其对应的HCC组织中呈阳性表达15例，阴性表达6例；呈阴性表达39例(65.00%)，其对应的HCC组织中呈阳性表达23例，阴性表达16例。HCC组织中N-cadherin呈阳性表达38例(63.33%)，其对应的癌旁组织中呈阳性表达15例，阴性表达23例；呈阴性表达22例(36.67%)，其对应的癌旁组织中呈阳性表达6例，阴性表达16例。与正常肝组织组比较，癌旁组织和HCC组织中N-cadherin的表达阳性
率均较高(χ2=7.685，P=0.006；χ2=31.727，P=0.000)，且HCC组织中N-cadherin的表达阳性率较癌旁组织高(χ2=18.621，P=0.000)。(3)P63蛋白在3组肝组织中的表达:正常肝组织中P63蛋白呈阳性表达36例(60.00%)，呈阴性表达24例(40.00%)。癌旁组织中P63蛋白呈阳性表达20例(33.33%)，其对应的HCC组织中呈阳性表达8例，阴性表达12例；呈阴性表达40例(66.67%)，其对应的HCC组织中呈阳性表达7例，阴性表达33例。HCC组织中P63蛋白呈阳性表达15例(25.00%)，其对应的癌旁组织中呈阳性表达8例，阴性表达7例；呈阴性表达45例(75.00%)，其对应的癌旁组织中呈阳性表达12例，阴性表达33例。与正常肝组织组比较，癌旁组织和HCC组织中P63蛋白的表达阳性率均较低(χ2=8.571，P=0.003；χ2=15.038，P=0.000)，但HCC组织中P63蛋白的表达阳性率与癌旁组织比较差异无统计学意义(χ2=1.324，P=0.235)。
