Claudin-4在胆管癌中的表达及其临床意义
王云;陈敏;陈骏;李运红;诸葛宇征
豆瓣9分以上的电视剧【摘 要】背景：胆管癌是起源于胆管上皮细胞、恶性程度极高的消化系统肿瘤。Claudin-4是细胞间紧密连接结构的关键组分，上皮肿瘤中普遍存在 claudin-4表达异常，并与肿瘤发生、发展有密切联系。目的：分析 claudin-4在胆管癌中的表达及其与患者临床病理特征和预后的相关性。方法：应用免疫组化方法检测 claudin-4在77例胆管癌及其配对癌旁组织中的表达率和表达强度，分析其表达与患者临床病理特征的关系，同时以 Kaplan-Meier 生存曲线行生存分析。结果：胆管癌组织中 claudin-4以强阳性表达为主，癌旁组织以中等和弱阳性表达为主，癌组织免疫组化评分显著高于癌旁组织（9.22±3.62对7.12±4.26，P <0.05）。胆管癌组织中的 claudin-4表达与肿瘤部位和分化程度显著相关（P 均<0.05），低分化腺癌高表达率显著高于高-中分化腺癌（76.2%对50.0%）。Claudin-4低表达组和高表达组31个月累积生存率分别为29.8%和21.1%，组间差异无统计学意义（P >0.05）。结论：Claudin-4在胆管癌中呈异常高表达，并与肿瘤分化程度呈负相关，因此有望成为胆管癌诊断新的生物学标记物和治疗靶点。%Background:Cholangiocarcinoma(CCA)is a fatal digestive system tumor aris
ing from biliary epithelium. Claudin-4,a key constituent of intercellular tight junction,is aberrantly and widely expresd in various epithelial tumors,and is correlated with tumorigenesis and tumor progression. Aims:To investigate the expression of claudin-4 in CCA and its correlation with clinicopathological characteristics of the tumor and patient’s prognosis. Methods:Immunohistochemistry was ud to determine the expression rate and intensity of claudin-4 in CCA tissue and matched paracancerous tissue of 77 CCA patients. Correlation of claudin-4 expression in CCA with its clinicopathological characteristics was analyzed,and survival analysis was conducted by using Kaplan-Meier method. Results:Claudin-4 was strongly expresd in CCA tissue and mildly or weakly expresd in matched paracancerous tissue;the immunohistochemical score was significantly higher in cancerous tissue than in paracancerous tissue(9. 22 ± 3. 62 vs. 7. 12 ± 4. 26,P < 0. 05). Claudin-4 expression was significantly correlated with tumor location and tumor differentiation( P all< 0. 05 );the high expression rate was significantly higher in poorly differentiated CCA than in well or moderately differentiated ones(76. 2% vs. 50. 0% ). The 31-month accumulate survival rates of claudin-4 low-expression group
and high-expression group were 29. 8% and 21. 1% , respectively( P > 0. 05). Conclusions:Claudin-4 is highly expresd in CCA and negatively correlated with tumor differentiation. It might be a novel diagnostic biomarker and therapeutic target for CCA.
【期刊名称】《胃肠病学》
【年(卷),期】2016(021)008
【总页数】4页(P461-464)
【关键词】huts胆管肿瘤;预后;Claudin-4;免疫组织化学
地暖如何清洗【作 者】王云;陈敏;陈骏;李运红;诸葛宇征
【作者单位】南京医科大学鼓楼临床医学院 210008;南京医科大学鼓楼临床医学院 210008;南京医科大学鼓楼临床医学院 210008;南京医科大学鼓楼临床医学院 210008;南京医科大学鼓楼临床医学院 210008
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眼袋如何消除背景：胆管癌是起源于胆管上皮细胞、恶性程度极高的消化系统肿瘤。Claudin-4是细胞间紧密连接结构的关键组分，上皮肿瘤中普遍存在claudin-4表达异常，并与肿瘤发生、发展有密切联系。目的：分析claudin-4在胆管癌中的表达及其与患者临床病理特征和预后的相关性。方法：应用免疫组化方法检测claudin-4在77例胆管癌及其配对癌旁组织中的表达率和表达强度，分析其表达与患者临床病理特征的关系，同时以Kaplan-Meier生存曲线行生存分析。结果：胆管癌组织中claudin-4以强阳性表达为主，癌旁组织以中等和弱阳性表达为主，癌组织免疫组化评分显著高于癌旁组织(9.22±3.62对7.12±4.26, P<0.05)。胆管癌组织中的claudin-4表达与肿瘤部位和分化程度显著相关(P均<0.05)，低分化腺癌高表达率显著高于高-中分化腺癌(76.2%对50.0%)。Claudin-4低表达组和高表达组31个月累积生存率分别为29.8%和21.1%，组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论：Claudin-4在胆管癌中呈异常高表达，并与肿瘤分化程度呈负相关，因此有望成为胆管癌诊断新的生物学标记物和治疗靶点。
Background: Cholangiocarcinoma (CCA) is a fatal digestive system tumor arising from biliary epithelium. Claudin-4, a key constituent of intercellular tight junction, is aberrantly and widely expresd in various epithelial tumors, and is correlated with tumorigenesis a
nd tumor progression. Aims: To investigate the expression of claudin-4 in CCA and its correlation with clinicopathological characteristics of the tumor and patient’s prognosis. Methods: Immunohistochemistry was ud to determine the expression rate and intensity of claudin-4 in CCA tissue and matched paracancerous tissue of 77 CCA patients. Correlation of claudin-4 expression in CCA with its clinicopathological characteristics was analyzed, and survival analysis was conducted by using Kaplan-Meier method. Results: Claudin-4 was strongly expresd in CCA tissue and mildly or weakly expresd in matched paracancerous tissue; the immunohistochemical score was significantly higher in cancerous tissue than in paracancerous tissue (9.22±3.62 vs. 7.12±4.26, P<0.05). Claudin-4 expression was significantly correlated with tumor location and tumor differentiation (P all <0.05); the high expression rate was significantly higher in poorly differentiated CCA than in well or moderately differentiated ones (76.2% vs. 50.0%). The 31-month accumulate survival rates of claudin-4 low-expression group and high-expression group were 29.8% and 21.1%, respectively (P>0.05). Conclusions: Claudin-4 is highly expresd in CCA and negatively correlated with tumor differentiation. It might be a novel diagnostic biomarker and therapeutic target for CCA.
作为整合素家族成员之一，claudin-4是细胞间紧密连接结构的关键组分，在正常上皮组织中发挥固定细胞和调节细胞间通透性的作用。上皮肿瘤中普遍存在claudin-4表达异常，并与肿瘤发生、发展有密切联系[1]，已发现claudin-4在卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、结直肠癌、胃癌、肺腺癌等多种恶性肿瘤中呈高表达[1-6]，并与某些恶性肿瘤的预后不良相关[3,6]。Ryu等[7]的研究显示，claudin-4在肝内胆管癌中的表达率显著高于肝细胞癌，是两者鉴别诊断的独立生物学标记物。Bunthot等[8]则发现，claudin-4在肝吸虫相关胆管癌和癌前增生胆管上皮中呈高表达，敲除claudin-4可抑制胆管癌细胞的迁移和侵袭能力。然而亦有研究发现claudin-4在恶性肿瘤中起抑癌作用，如在卵巢癌细胞中，claudin-4可抑制EphA2致癌信号通路激活[9]；在胰腺导管腺癌中，claudin-4高表达预示患者预后较好[10]。鉴于claudin-4在恶性肿瘤中的生物学作用存在争议且我国目前尚无关于claudin-4在胆管癌中表达的研究，本研究通过检测claudin-4在77例胆管癌及其配对癌旁组织中的表达，分析其表达与胆管癌患者临床病理特征和预后的相关性，初步探讨claudin-4在胆管癌诊断和治疗中的意义。
一、标本来源
收集2013年3月—2014年8月在南京鼓楼医院接受胆管癌手术治疗患者的冰冻或石蜡包埋组织标本，同时采集患者临床病理资料，电话随访获取生存信息。入组标本HE染色切片由资深病理医师再次读片，与住院期间病理诊断进行比对、确认。排除标准：①再次病理读片确认为非胆管癌；②随访过程中因“非胆管癌”原因死亡；③术前接受放疗或化疗；④临床病理资料不完整。结果共77例胆管癌组织及其配对癌旁组织(肿瘤切缘经病理证实的非癌组织)标本纳入研究，来源病例中男性49例，女性28例，年龄34～79岁，平均(58.8±10.6)岁；肿瘤部位：肝内23例，肝门部31例，远端23例。生存时间定义为术后第1 d至因胆管癌死亡或随访截止时间(2015年10月)的生存月数。
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二、免疫组化染色
兔抗人claudin-4单克隆抗体为Abcam plc.产品，SP免疫组化检测试剂盒为北京中杉金桥生物技术有限公司产品。石蜡切片脱蜡水化，3% H2O2室温静置10 min去除内源性过氧化物酶，PBS漂洗3×5 min；柠檬酸热抗原修复，PBS漂洗3×5 min；加入正常山羊血清室温封闭2 h，PBS漂洗2次；加入一抗(1 μg/mL)，4 ℃孵育过夜，PBS漂洗3×5 min；加入二抗，室温孵育30 min，PBS漂洗3×5 min；加入DAB染色液，显微镜下观察，自来水冲洗终止染色；苏木精复染，脱水，透明，中性树胶封片，由资深病理医师读片。保安经理
结果判断：采用Formwitz半定量积分法。光学显微镜下每张切片随机选取5个100倍视野，计数阳性细胞并观察染色强度。阳性细胞比率：≤5%，0分；6%～25%，1分；26%～50%，2分；51%～75%，3分；>75%，4分。染色强度：无色，0分；淡黄色，1分；黄色，2分；棕黄色，3分。总分为两项评分之积：0分为阴性(-)，1～4分为弱阳性(+)，5～8分为中等阳性(++)，9～12分为强阳性(+++)；0～8分为低表达，9～12分为高表达。
三、统计学分析
应用SPSS 17.0统计软件，计量资料以±s表示，癌组织与配对癌旁组织间的比较采用配对t检验；计数资料以率或构成比表示，组间比较采用χ2检验或Fisher精确概率法；生存分析采用Kaplan-Meier生存曲线和log-rank检验。P<0.05为差异有统计学意义。
一、Claudin-4在胆管癌组织中表达上调
免疫组化染色结果显示，胆管癌组织中claudin-4以强阳性表达为主，癌旁组织以中等和弱阳性表达为主，阳性表达主要定位于胞膜和胞质(图1)。癌组织和癌旁组织中claudin-4免疫组化评分分别为9.22±3.62和7.12±4.26，癌组织明显高于癌旁组织，差异有统计学意义(t=4.18，P<0.05)。
