结直肠癌中Claudin1、ZEB-1和E-cadherin的表达及意义
黄澄澄;周旭春;刘文秀
【摘 要】目的 探讨Claudin1、ZEB-1和E-cadherin在结直肠癌中的表达及三者之间的关系与临床病理的联系.方法 免疫组织化学技术检测51例结直肠癌及癌旁组织中Claudin1、ZEB-1和E-cadherin蛋白的表达情况.结果 在结直肠癌组织中Claudin1、ZEB-1、E-cadherin的表达率分别为68.6％、23.5％、56.9％,癌旁组织分别为37.3％、0、98.0％.三种蛋白在结直肠癌组织及癌旁组织中的表达差异均具有显著性(P＜0.01).Claudin1及ZEB-1的表达率在Ⅲ-Ⅳ期组(87.5％、41.7％)高于Ⅰ-Ⅱ期组(51.9％、7.4％；P＜0.01、P＜0.01),有淋巴结转移组(90.9％、45.5％)高于无淋巴结转移组(51.7％、6,9％；P＜0.01、P＜0.01),ZER1表达率在高级别组(42.1％)高于低级别组(12.5％；P＜0.05).E-cadherin的表达率在Ⅰ-Ⅱ期组(74.1％)高于Ⅲ-Ⅳ期组(37.5％；P＜0.05),无淋巴结转移组(72.4％)高于有淋巴结转移组(36.4％；P＜0.05).Claudin1、ZEB-1与E-cadherin的表达均呈负相关(P＜0.05),Claudin1与ZEB-1的表达呈正相关(P＜0.05).结论 Claudin1、ZEB-1和E-cadherin在结直肠癌发展,浸润和转移中起着重要作用,三者可能存在协同作用.%Objective To study the expression of Claudin1、ZEB-1 and
E-cadherin in colorectal cancer,and to investigate the relationship between them and clinicopathologic parameters. Methods Immunohistochemical staining was conducted to detect the expression of Claudinl、 ZEB-1 and E-cadherin proteins in 51 samples of colorectal tumor tissues and 51 samples of normal colorectal mucosa. Results The positive rates of Claudinl, ZEB-1 and E-cadherin were 68. 6% , 23. 5% , 56. 9% in colorectal tumor and 37. 3% ,0% , 98. 0% in normal colorectal mucosa, with a significant difference between the two groups (P<0. 01). The expression rates of Claudinl and ZEB-1 in Ⅲ-Ⅳ stages (87. 5%, 41. 7%) was higher than Ⅰ-Ⅱ stage (51. 9%, 7. 4%;P<0. 01,P<0. 01),as in the cas with lymph node metastasis (90. 9%,45. 5%) than in tho without metastasis (51. 7% ,6,9% ;P<0. 01 ,P<0. 01). The expression rate of ZEB-1 in high grade (42. 1%) was also higher than in low grade (12. 5% ,P<C0. 05). The expression rate of E-cadherin in Ⅰ-Ⅱ stages (74. 1%) was higher than in Ⅲ-Ⅳstages (37. 5% , P<0. 05) ,and higher in the cas with no lymph node metastasis (72. 4%)than in tho with metastasis (36. 4% ,P<0. 05). Positive correlations were obrved between Claudinl and ZEB-1 in CRC tissues (P<10. 05). The expression of E-cadherin was negati百花电影节
vely correlated with that of Claudinl and ZEB-1 (P<0. 05). Conclusion Expressions of Claudinl, ZEB-1 and E-cadherin may be involved in the progression, invasion and metastasis of CRC. Interactions between Claudinl, ZEB-1 and E-cadherin may promote CRC progression.
【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》
【年(卷),期】2012(021)006
【总页数】6页(P578-583)
【关键词】结直肠癌;Claudin1;ZEB-1;E-cadherin
【作 者】黄澄澄;周旭春;刘文秀
师德师风读书笔记
【作者单位】重庆医科大学附属第一医院消化内科,重庆400016;重庆医科大学附属第一医院消化内科,重庆400016;重庆医科大学附属第一医院消化内科,重庆400016
【正文语种】中 文
【中图分类】R
结直肠癌（Colorectal Carcinoma，CRC）在我国发病率列恶性肿瘤死因的第5位［1］。结直肠癌的浸润，转移及早期预防，早期诊断，早期治疗与患者的预后紧密相关。
肿瘤的上皮－间质转化（epithelial－menchymal transition，EMT）是肿瘤细胞失去上皮细胞的特性，而转化成具有间质细胞特性的细胞。ZEB－1（zinc finger E－box－binding protein 1）是一种结合锌指蛋白，又称为TCF8、AREB6或deltaEF1，近年发现ZEB－1与多种肿瘤发生，发展有密切联系，并参与了EMT的调节过程。ZEB－1在结直肠癌中的表达情况如何，与临床病理有何联系，国内外报道较少。本研究使用免疫组织化学技术检测51例结直肠癌组织中ZEB－1的表达情况，同时联合检测Claudin1和E－cadherin的表达，并探讨三者与临床病理的联系及三者之间的关系。
材料和方法
1.临床资料
收集2011年3月至2011年12月期间重庆医科大学附属第一医院普外科行手术切除的，术后
书圣是哪位
病理诊断为结直肠癌的标本51例，同时取相应的癌旁组织。全部病例术前均未接受放疗和化疗，均无炎症性肠病病史，均无长期使用非甾体类抗炎药和糖皮质激素史。病理分型及分级按WHO分类标准，分期按TNM标准。其中男30例，女21例，平均年龄61.96岁。结肠癌20例，直肠癌31例；其中粘液腺癌10例、印戒细胞癌2例、低分化腺癌7例、高和中分化腺癌32例。将高和中分化归为分化较好的低级别组；将低分化、粘液腺癌和印戒细胞癌归为分化较差的高级别组。TNM分期：Ⅰ期7人，Ⅱ期20人，Ⅲ期20人，Ⅳ期4人。有淋巴结转21人，无淋巴结转移30人。所有标本取材后经多聚甲醛固定、常规脱水、石蜡包埋、5μm连续切片。
2.材料及方法
2.1 主要试剂
Claudin1多克隆抗体 ，购于北京博奥森生物技术有限公司；ZEB－1多克隆抗体，购于美国santa cruz；E－cadherin单克隆抗体、免疫组化试剂盒及显色试剂盒均购于北京中杉金桥生物有限公司。
2.2 免疫组化染色检测Claudin1、ZEB－1及E－cadherin表达情况
染色程序严格按试剂盒说明书操作。以磷酸盐缓冲液代替一抗作空白对照。切片常规脱蜡，PH9.0EDTA 微波炉加热修复抗原，3%双氧水37℃孵育15min灭活内源性过氧化物酶，正常山羊或兔血清工作液封闭30min，加Claudin1、ZEB－1及E－cadherin一抗（稀释度均为1∶100）.4℃湿盒中过夜；复温1小时，加生物素化二抗37℃孵育30min，以辣根过氧化物酶标记链酶卵白素37℃孵育30min，加DAB显微镜下显色，苏木素复染细胞核，盐酸酒精分化，碳酸锂返蓝，梯度酒精脱水、二甲苯透明，中性树胶封片。
2.3 结果判断
Claudin1的免疫组织化学阳性结果判定：每张切片随机选取5个高倍镜视野，计数100个肿瘤细胞中Claudin1阳性的细胞数积分：＜5% 为0分，5% －24%为1分，25% －50% 为2分，51% －74%为3分，≥75%为4分；阳性细胞着色度积分：无0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕褐色为3分；两项之和0－1分为（－），2－3分为（＋），4－5分为（＋＋），6－7分为（＋＋＋）。（－/＋）为阴性表达，（＋＋/＋＋＋）为阳性表达。E－cadherin阳性结果判定：无阳性着色或阳性细胞数＜90% 为阴性表达，阳性细胞数≥90% 为阳性表达。ZEB－1阳性结果判定：参考文献［2］将核阳性着色的肿瘤细胞和非间质细胞计为阳
性细胞，按着色度积分：无0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕褐色为3分；≥1分计为阳性，＜1分计为阴性。
座谈会发言稿范文>我们的爱在赎罪3.统计学方法
帕美拉使用SPSS17.0软件进行统计，免疫组化结果进行卡方检验，使用连续性校正公式或Fisher精确检验计算χ2值，并进行spearman相关性分析，检验水准α＝0.05.
结 果
1.免疫组化染色检测 Claudin1、ZEB－1和 E－cadherin表达情况
结直肠癌组织中Claudin1主要为细胞质表达，未见细胞核表达.而癌旁组织中Claudin1主要为细胞膜表达（图1、2）。Claudin1阳性率肿瘤组织（68.62%）高于癌旁组织（37.25%），差异具有统计学意义（P＜0.01）。ZEB－1主要为肿瘤间质细胞核、肿瘤细胞核表达，部分肿瘤组织可见细胞质阳性着色（图5、6、7），ZEB－1阳性率肿瘤组织（23.53%）高于癌旁组织（0），差异具有统计学意义（P＜0.01）。E－cadherin主要为细胞膜表达（图3、4），E－cadherin阳性率肿瘤组织（56.86%）低于癌旁组织（98.0%）曹操的主要事迹
，差异具有统计学意义（P＜0.01）。
bios驱动
2.Claudin1、ZEB－1和 E－cadherin蛋白在结直肠癌中的表达与患者临床病理联系
Claudin1和ZEB－1的表达随着结直肠癌TNM分期的增加逐渐增加，Claudin1及ZEB－1的表达率在III－IV期组（87.5%、41.7%）高于I－II期组（51.9%、7.4%），差异具有统计学意义（P＝0.008，P＝0.007）；有淋巴结转移组（90.9%、45.5%）高于无淋巴结转移组（51.7%、6.9%），差异具有统计学意义（P＝0.005，P＝0.002）。ZEB－1表达率在高级别组（42.1%）高于低级别组（12.5%），差异具有统计学意义（P＝0.037）。E－cadherin的表达率在I－II期组（74.1%）高于III－IV期组（37.5%），差异具有统计学意义（P＝0.019）；无淋巴结转移组（72.4%）高于有淋巴结转移组（36.4%），差异具有统计学意义（P＝0.022）。而Claudin1和E－cadherin的表达率与肿瘤的分级程度比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。Claudin1，ZEB－1和E－cadherin的表达率与患者的年龄，性别，肿瘤发生部位及肿瘤大小等比较，差异无统计学意义（P＞0.05，见表1）。
